Name: מערכות AAV ומודלים של עכברים לחקירת ביטוי חוץ רחמי של Neurod1 בתאים שעברו התמרה בזמנים תת-חריפים וכרוניים לאחר שבץ איסכמי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: חקור ביטוי חוץ של Neurod1 באמצעות וקטורי AAV בעכברים לאחר שבץ איסכמי בשלבים תת-חריפים וכרוניים. שיטה זו מאפשרת הערכת שיפורי תפקוד מוטורי ושיקום נוירונלי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>מערכות AAV ומודלים של עכברים לחקר ביטוי Neurod1 חוץ רחמי לאחר שבץ מוחי

<ol><li>GBD 2016 Stroke Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+stroke%2C+1990-2016%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of stroke, 1990-2016: A systematic analysis for the global burden of disease study 2016.</a> Lancet Neurol. 18 (5), 439-458 (2016).</li>
<li>Iadecola, C., Buckwalter, M. S., Anrather, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+stroke%3A+Mechanisms%2C+modulation%2C+and+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Immune responses to stroke: Mechanisms, modulation, and therapeutic potential.</a> J Clin Invest. 130 (6), 2777-2788 (2020).</li>
<li>Kuriakose, D., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+and+treatment+of+stroke%3A+Present+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology and treatment of stroke: Present status and future perspectives.</a> Int J Mol Sci. 21 (20), 7609(2020).</li>
<li>Fifield, K. E., Vanderluit, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+degeneration+of+neurons+in+the+penumbra+region+following+a+small%2C+focal+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapid degeneration of neurons in the penumbra region following a small, focal ischemic stroke.</a> Eur J Neurosci. 52 (4), 3196-3214 (2020).</li>
<li>Burda, J. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+gliosis+and+the+multicellular+response+to+CNS+damage+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reactive gliosis and the multicellular response to CNS damage and disease.</a> Neuron. 81 (2), 229-248 (2014).</li>
<li>Kowalczyk, A., Kleniewska, P., Kolodziejczyk, M., Skibska, B., Goraca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endothelin-1+and+endothelin+receptor+antagonists+in+inflammatory+response+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Immunol+Ther+Exp+%28Warsz%29%22%5BJournal%5D)">The role of endothelin-1 and endothelin receptor antagonists in inflammatory response and sepsis.</a> Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 63 (1), 41-52 (2015).</li>
<li>Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+scar+is+more+than+just+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The glial scar is more than just astrocytes.</a> Exp Neurol. 286, 147-149 (2016).</li>
<li>Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+dissection+of+reactive+astrogliosis+and+glial+scar+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular dissection of reactive astrogliosis and glial scar formation.</a> Trends Neurosci. 32 (12), 638-647 (2009).</li>
<li>Adams, K. L., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diversity+and+disparity+of+the+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The diversity and disparity of the glial scar.</a> Nat Neurosci. 21 (1), 9-15 (2018).</li>
<li>Buscemi, L., Price, M., Bezzi, P., Hirt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+overview+of+neuroinflammation+in+an+experimental+mouse+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal overview of neuroinflammation in an experimental mouse stroke model.</a> Sci Rep. 9 (1), 507(2019).</li>
<li>Vasan, L., Park, E., David, L. A., Fleming, T., Schuurmans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+reprogramming%3A+Bridging+the+gap+between+basic+science+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal reprogramming: Bridging the gap between basic science and clinical application.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 681087(2021).</li>
<li>Berninger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+properties+of+neurons+derived+from+in+vitro+reprogrammed+postnatal+astroglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional properties of neurons derived from in vitro reprogrammed postnatal astroglia.</a> J Neurosci. 27 (32), 8654-8664 (2007).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neurod1+aav-based+gene+therapy+for+functional+brain+repair+after+ischemic+injury+through+in+vivo+astrocyte-to-neuron+conversion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A neurod1 aav-based gene therapy for functional brain repair after ischemic injury through in vivo astrocyte-to-neuron conversion.</a> Mol Ther. 28 (1), 217-234 (2020).</li>
<li>Ghazale, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascl1+phospho-site+mutations+enhance+neuronal+conversion+of+adult+cortical+astrocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ascl1 phospho-site mutations enhance neuronal conversion of adult cortical astrocytes in vivo.</a> Front Neurosci. 16, 917071(2022).</li>
<li>Wang, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+astrocyte+to+neuron+conversion+with+lineage+tracing+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Revisiting astrocyte to neuron conversion with lineage tracing in vivo.</a> Cell. 184 (21), 5465-5481.e16 (2021).</li>
<li>Xie, Y., Zhou, J., Wang, L. L., Zhang, C. L., Chen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+aav+tools+fail+to+detect+neurod1-mediated+neuronal+conversion+of+muller+glia+and+astrocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">New aav tools fail to detect neurod1-mediated neuronal conversion of muller glia and astrocytes in vivo.</a> EBioMedicine. 90, 104531(2023).</li>
<li>Bocchi, R., Masserdotti, G., Gotz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+reprogramming%3A+Fast+forward+from+new+concepts+toward+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal reprogramming: Fast forward from new concepts toward therapeutic approaches.</a> Neuron. 110 (3), 366-393 (2022).</li>
<li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+promise+for+neuronal+repair%3A+Reprogramming+astrocytes+into+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">A promise for neuronal repair: Reprogramming astrocytes into neurons in vivo.</a> Biosci Rep. 44 (1), BSR20231717(2024).</li>
<li>Hickmott, J. W., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia-to-neuron+reprogramming+to+the+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Glia-to-neuron reprogramming to the rescue.</a> Neural Regen Res. 20 (5), 1395-1396 (2024).</li>
<li>Gao, X., Wang, X., Xiong, W., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+reprogramming+reactive+glia+into+iPSCs+to+produce+new+neurons+in+the+cortex+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo reprogramming reactive glia into iPSCs to produce new neurons in the cortex following traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 6, 22490(2016).</li>
<li>Guo, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+direct+reprogramming+of+reactive+glial+cells+into+functional+neurons+after+brain+injury+and+in+an+alzheimer%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo direct reprogramming of reactive glial cells into functional neurons after brain injury and in an alzheimer's disease model.</a> Cell Stem Cell. 14 (2), 188-202 (2014).</li>
<li>Livingston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+neurod1+is+sufficient+for+functional+recovery+following+a+sensory-motor+cortical+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of neurod1 is sufficient for functional recovery following a sensory-motor cortical stroke.</a> Biomedicines. 12 (3), 663(2024).</li>
<li>Tai, W., Xu, X. M., Zhang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+through+in+vivo+cell+fate+reprogramming+for+neural+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regeneration through in vivo cell fate reprogramming for neural repair.</a> Front Cell Neurosci. 14, 107(2020).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+conversion+of+striatal+astrocytes+into+gabaergic+neurons+in+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Gene therapy conversion of striatal astrocytes into gabaergic neurons in mouse models of Huntington's disease.</a> Nat Commun. 11 (1), 1105(2020).</li>
<li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A reproducible endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li>
<li>Islam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+apoptosis+in+a+model+of+ischemic+stroke+leads+to+enhanced+cell+survival%2C+endogenous+neural+precursor+cell+activation+and+improved+functional+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Inhibition of apoptosis in a model of ischemic stroke leads to enhanced cell survival, endogenous neural precursor cell activation and improved functional outcomes.</a> Int J Mol Sci. 25 (3), 1786(2024).</li>
<li>Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-titer+AAV+disrupts+cerebrovascular+integrity+and+induces+lymphocyte+infiltration+in+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">High-titer AAV disrupts cerebrovascular integrity and induces lymphocyte infiltration in adult mouse brain.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 31, 101102(2023).</li>
<li>Ortinski, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+induction+of+astrocytic+gliosis+generates+deficits+in+neuronal+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective induction of astrocytic gliosis generates deficits in neuronal inhibition.</a> Nat Neurosci. 13 (5), 584-591 (2010).</li>
<li>Jiang, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+reactive+astrocytes+to+induced+neurons+enhances+neuronal+repair+and+functional+recovery+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Conversion of reactive astrocytes to induced neurons enhances neuronal repair and functional recovery after ischemic stroke.</a> Front Aging Neurosci. 13, 612856(2021).</li>
<li>Aschauer, D. F., Kreuz, S., Rumpel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+transduction+efficiency%2C+tropism+and+axonal+transport+of+AAV+serotypes+1%2C+2%2C+5%2C+6%2C+8+and+9+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Analysis of transduction efficiency, tropism and axonal transport of AAV serotypes 1, 2, 5, 6, 8 and 9 in the mouse brain.</a> PLoS One. 8 (9), e76310(2013).</li>
<li>Su, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+specificity+of+GFAP+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Expression specificity of GFAP transgenes.</a> Neurochem Res. 29 (11), 2075-2093 (2004).</li>
<li>Kofoed, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+gene+delivery+to+the+brain+using+AAV+and+ultrasound+depends+on+serotypes+and+brain+areas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Efficacy of gene delivery to the brain using AAV and ultrasound depends on serotypes and brain areas.</a> J Control Release. 351, 667-680 (2022).</li>
<li>He, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+murine+genetic+background+in+adeno-associated+virus+transduction+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">The influence of murine genetic background in adeno-associated virus transduction of the mouse brain.</a> Hum Gene Ther Clin Dev. 30 (4), 169-181 (2019).</li>
<li>Hu, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+inducible+cre+recombinase+driven+by+differential+astrocyte-specific+promoters+in+transgenic+mouse+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of inducible cre recombinase driven by differential astrocyte-specific promoters in transgenic mouse lines.</a> Neurosci Bull. 36 (5), 530-544 (2020).</li>
<li>Botterill, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Off-target+expression+of+cre-dependent+adeno-associated+viruses+in+wild-type+c57bl%2F6j+mice%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Off-target expression of cre-dependent adeno-associated viruses in wild-type c57bl/6j mice.</a> eNeuro. 8 (6), ENEURO.0363-ENEURO.0421 (2021).</li>
<li>Hasel, P., Rose, I. V. L., Sadick, J. S., Kim, R. D., Liddelow, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammatory+astrocyte+subtypes+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammatory astrocyte subtypes in the mouse brain.</a> Nat Neurosci. 24 (10), 1475-1487 (2021).</li>
<li>Kim, R. D., et al. Temporal and spatial analysis of astrocytes following stroke identifies novel drivers of reactivity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKim%2C+RD+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2023).</li>
<li>Matias, I., Morgado, J., Gomes, F. C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+heterogeneity%3A+Impact+to+brain+aging+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocyte heterogeneity: Impact to brain aging and disease.</a> Front Aging Neurosci. 11, 59(2019).</li>
<li>Miller, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+heterogeneity+in+the+adult+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocyte heterogeneity in the adult central nervous system.</a> Front Cell Neurosci. 12, 401(2018).</li>
<li>Early, A. N., Gorman, A. A., Van Eldik, L. J., Bachstetter, A. D., Morganti, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+advanced+age+upon+astrocyte-specific+responses+to+acute+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of advanced age upon astrocyte-specific responses to acute traumatic brain injury in mice.</a> J Neuroinflammation. 17 (1), 115(2020).</li>
<li>Donocoff, R. S., Teteloshvili, N., Chung, H., Shoulson, R., Creusot, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+tamoxifen-induced+cre+activity+and+its+effect+on+immune+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of tamoxifen-induced cre activity and its effect on immune cell populations.</a> Sci Rep. 10 (1), 15244(2020).</li>
<li>Gresita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Very+low+efficiency+of+direct+reprogramming+of+astrocytes+into+neurons+in+the+brains+of+young+and+aged+mice+after+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Very low efficiency of direct reprogramming of astrocytes into neurons in the brains of young and aged mice after cerebral ischemia.</a> Front Aging Neurosci. 11, 334(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#77 מקדח (0.018 אינץ')</td><td>דיוויד קופף אינסטרומנטס</td><td>8177</td><td></td></tr><tr><td>AAV5-GFAP(0.7)-mNeurod1-2A-iCre</td><td>וקטור&nbsp; תפר נספג Biolabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>עם פוליסורב מחט; פוליאסטר CV-15 3/8 מחט נקודת התחדדות מעגל גודל 4 - 0 קלוע</td><td>Covidien</td><td>GL-881</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד NeuN (ארנב)&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>ABN78&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 עכברים</td><td>נהר צ'ארלס</td><td>027</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת כלורהקסידין</td><td>Partnar</td><td>PCH-020</td><td></td></tr><tr><td>Contec&trade; &nbsp; PREempt&TRADE; תמיסת חיטוי RTU</td><td>Fisher Scientific</td><td>29-636-6212</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>HM525 NX&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Endothelin 1</td><td>Millipore Sigma</td><td>05-23-3800-0.5MG</td><td></td></tr><tr><td>בטיחות נוצה סכין גילוח מיקרוטום</td><td>להבים נוצה</td><td>12-631P</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; משקפי כיסוי: מלבנים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-545M&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>הרכבה פלואורסצנטית Medium</td><td>Agilent Technologies</td><td>S3023&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מזרק המילטון</td><td>חברת המילטון</td><td>7634-01</td><td></td></tr><tr><td>מקדחה סטריאוטקסית במהירות גבוהה</td><td>David Kopf Instruments</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>Metacam Solution (Meloxicam)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td></td><td></td></tr><tr><td>O.C.T Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td></td></tr><tr><td>pAAV2/5-GFAP-iCre</td><td>Vector Builder</td><td>P190924-1001suq</td><td></td></tr><tr><td>משחת פולידרם USP</td><td>TARO</td><td>2181908</td><td></td></tr><tr><td>SOMNI Scientific&trade; &nbsp; כרית חימום טמפרטורת בעלי חיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>04-777-177</td><td></td></tr><tr><td>מכשירים סטריאוטקסיים</td> מכשירי <td>דיוויד קופף</td><td>דגם 902</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות סופרפרוסט פלוס מיקרוסקופ, לבן</td><td>פישרברנד</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>tdעכברי כתב עגבניות&nbsp;</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>007914</td><td></td></tr><tr><td>V-1 מערכת הרדמה לבעלי חיים במעבדה שולחנית</td><td>VetEquip</td><td>901806</td><td></td></tr></tbody></table>

מערכות aav ומודלים של עכברים לחקירת ביטוי חוץ רחמי של neurod1 בתאים שעברו התמרה בזמנים תת-חריפים וכרוניים לאחר שבץ איסכמי

AAV Systems and Mouse Models for Investigating Ectopic Expression of Neurod1 in Transduced Cells at Subacute and Chronic Times Post-Ischemic Stroke

לבחון את התוצאות התאיות של ביטוי מקדם GFAP קצר (gfaABC(1)D), מונע על ידי מקדם חוץ רחמי בסוג פרא (C57BL/6J) ובזנים מדווחים טרנסגניים tdTom-Cre (ספציפית, B6. Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J)22 שתי מערכות מבוססות AAV5 שימשו בעכברים שנפגעו משבץ ET-1 (איור 1A-C). במודל תת-חריף של שבץ מוחי, Neurod1 נארז במערכת Cre-Flex AAV ונמסר לעכברים מסוג בר ביום 7 לאחר השבץ (איור 1B). וקטור ה-Flex השני מכיל את הרצף ההפוך עבור GFP המונע על ידי מקדם ה-CAG המוקף באתרי רקומבינציה הטרוטיפיים אנטי-מקבילים מסוג loxP (איור 1B). שני המבנים הנגיפיים מוזרקים יחד באותו זמן לאחר השבץ המוחי. ברגע ש-Cre מתבטא בתאים שעברו התמרה, ה-GFP מתהפך ונכרת באתרי רקומבינציה, ומכוון את הרצף לכיוון החישה, מה שמאפשר ביטוי של GFP. לפיכך, תאים המבטאים Cre יהיו חיוביים ל-GFP, מה שמצביע על כך שהם הומרו על ידי וקטורי Cre-Flex. במודל התת-חריף, עכברים הוקרבו 21 ימים לאחר הטרנסדוקציה (כלומר, 28 ימים לאחר השבץ), ומספר התאים המומרים (GFP+), כמו גם מספר תאי NeuN+GFP+ (תאים מותמרים המבטאים NeuN), נספרו בפרנכימה של המוח שנפגע משבץ. כפי שניתן לראות באיור 2A, תאי עצב הולכים לאיבוד באתר הפגיעה האיסכמית. כימות של תאים מותמרים בפרדיגמה התת-חריפה באמצעות מערכת Cre-Flex AAV מגלה באופן משמעותי יותר נוירונים מסומנים (תאי NeuN+GFP+/GFP+) בעכברים שטופלו ב-Neurod1 בהשוואה לעכברי ביקורת Stroke-Cre (43.05 +/- 5.50% לעומת 18.43 +/- 3.03% תאי NeuN+GFP+/GFP+, ב-Stroke-Neurod1 לעומת 18.43 +/- 3.03% תאי NeuN+GFP+/GFP+, ב-Stroke-Neurod1 לעומת 18.43 +/- 3.03% בתאי Stroke-Neurod1 לעומת 18.43 +/- 3.03% בתאי NeuN+GFP+/GFP+, ב-Stroke-Neurod1 לעומת 18.43 +/- 3.03% תאי NeuN+GFP+/GFP+, ב-Stroke-Neurod1 לעומת 18.43 +/- 3.03% תאי NeuN+GFP+/GFP+. עכברים שטופלו ב-Stroke-Cre (ביקורת), בהתאמה) (p = 0.0172) (איור 2B,C).
בקבוצה נפרדת של ניסויים, המרת AtN בוצעה במודל כרוני של שבץ מוחי (איור 1B,C). גורם השעתוק Neurod1 הועבר לעכברי דיווח tdTom-Cre שנפגעו משבץ ביום ה-21 לאחר השבץ (איור 1C). זהה למערכת Cre-Flex המשמשת בעכברים מסוג בר, ביטוי Neurod1 הונע על ידי מקדם ה-GFAP הקצר. עם זאת, במערכת זו, נעשה שימוש במבנה AAV יחיד עם Cre recombinase בעקבות Neurod1 (איור 1B). לפיכך, תאים המבטאים GFAP ייצרו Cre recombinase, ויגרמו למדווח tdTom, המציין תאים שעברו התמרת AAV. עכברים הוקרבו 77 ימים לאחר השבץ (8 שבועות לאחר ה-AAV) (איור 1C). כפי שניתן לראות באיור 3A, נגע קליפת המוח נצפה ביום 77 לאחר השבץ בעכברי tdTom-Cre. מספר התאים המומרים המבטאים את הסמן העצבי, NeuN+, כומת (אחוז יחסי של תאי (NeuN+tdTom+/tdTom+) בשלב הכרוני שלאחר השבץ ומצא כי לעכברים שקיבלו Stroke-Neurod1 היו הרבה יותר נוירונים מתויגים בהשוואה לעכברי הביקורת Stroke-Cre (74.81 +/- 4.835% לעומת 53.05 +/- 5.028% תאי NeuN+tdTom+/tdTom+ ב-Stroke-Neurod1vs. עכברים שטופלו ב-Stroke-Cre (ביקורת), בהתאמה) (p = 0.0355) (איור 3B,C).
בסך הכל, התוצאות מדגימות התמרה בסיסית של נוירונים ומספר גבוה יותר של תאים מתמרים המבטאים NeuN+ עם העברת Neurod1 הן בשלב התת-חריף והן בשלב הכרוני שלאחר שבץ בעכברים מדווחים מסוג בר ו-tdTom-Cre, עם שתי מערכות שונות מבוססות AAV.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig01.jpg"> 
איור 1: ביטוי חוץ רחמי של Neurod1, וקטורים וצירי זמן. (A) ייצוג גרפי של השראת שבץ על ידי הזרקת אנדותלין-1 (ET-1) לקליפת המוח המוטורית של העכבר. Adeno-Associated Virus (AAV) מועבר ב-3 אתרים, באתר ההזרקה ET-1 וכן באתרים המקיפים את הנגע, 1 מ"מ קדמי ואחורי. פאנל מוגדל המציג תאים מותמרים עם AAV-Neurod1 בקליפת המוח המוטורית. (B) סכמטי של שני וקטורי ה-AAV במערכת Cre-Flex שנמסרו לעכברים מסוג פרא (פאנל עליון). וקטור AAV5 1 מכיל את מקדם ה-GFAP הקצר, גורם השעתוק Neurod1 ורצף Cre recombinase המוקף באתר loxP (משולש שחור) ובאתר lox2272 (משולש לבן). וקטור AAV5 2 נושא את רצף מדווח הגנים GFP ההפוך משני צדיו זוג אתרי loxP ו-lox2272. התמרה של שני הווקטורים בתאים מביאה לכריתה והיפוך בתיווך Cre, מה שמאפשר לביטוי GFP לתייג תאים מותמרים. Neurod1 הועבר גם לעכברי tdTom-Cre באמצעות וקטור AAV5 אחד (פאנל תחתון). בווקטור AAV5 1 ארוזים מקדם ה-GFAP הקצר, גורם השעתוק Neurod1 ורצף ה-Cre recombinase. ביטוי Cre בתאים מתמרים מניע כריתה של קודון העצירה באתרי loxP (משולש שחור), המאפשר ביטוי tdTomato. (C) מערכת Cre-Flex נבדקה בעכברים מסוג בר עם AAVs שהוזרקו בתקופה התת-חריפה שלאחר השבץ (יום 7 לאחר השבץ). עכברים מסוג בר הוקרבו 21 ימים לאחר התמרת AAV (28 ימים לאחר השבץ). AAV הועבר לעכברי tdTom-Cre בתקופה הכרונית שלאחר השבץ (יום 21 לאחר השבץ), ועכברים הוקרבו 56 ימים לאחר התמרת AAV (77 ימים לאחר השבץ). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig02v4.jpg"> 
איור 2: העברת Neurod1 חוץ רחמית באמצעות Cre-Flex AAVs בשלב התת-חריף שלאחר שבץ מוחי מובילה למספר מוגבר של תאים מתמרים המבטאים NeuN. (A) צביעה חיסונית של חלקי מוח קורונליים דרך קליפת המוח המוטורית ביום 28 לאחר שבץ מעכברי Stroke-Cre (משמאל) ו-Stroke-Neurod1 (מימין). אובדן עצבי נצפה במקום הנגע (קווים מקווקווים לבנים). תאים מותמרים (GFP+, ירוק), נוירונים (NeuN+, אדום) ותאי NeuN+GFP+ (כתומים) משותפים נראים בקליפת המוח. פסי קנה מידה: 250 מיקרומטר. (B) תמונות מייצגות של בקרת Stroke-Cre (למעלה) ו-Stroke-Neurod1 (למטה) רקמת מוח המציגות נוירונים (NeuN+, אדום) ו-AAV התמרו GFP+ (ירוק). כניסות המתוארות בלבן מציגות תקריב של תאים עבור כל ערוץ בנפרד. ראשי חץ לבנים מציינים תאים שהומרו AAV (GFP+). חיצים לבנים מצביעים על תאי NeuN+GFP+ שעברו מיקום משותף. פסי קנה מידה: 125 מיקרומטר. (C) כימות של תאי NeuN+GFP+/GFP+ בעכברי Stroke-Cre ו-Stroke-Neurod1. N = 3 עכברים לקבוצה. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM. מבחן שפירו-וילק (p = 0.3223). מבחן t לא מזווג, *p &lt; 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig03.jpg"> 
איור 3: העברת Neurod1 חוץ רחמית בעכברים מדווחים tdTom-Cre בשלב הכרוני שלאחר שבץ מוחי מובילה למספר מוגבר של תאים מתמרים המבטאים NeuN. (A) צביעה חיסונית של מקטעי מוח קורונליים דרך קליפת המוח המוטורית ביום 77 לאחר השבץ מעכברי Stroke-Cre ו-Stroke-Neurod1. אובדן עצבי נראה באתר הפגיעה האיסכמית (קווים מקווקווים לבנים). תאים מותמרים מסומנים ב-tdTom (אדום) ב-peri-infarct. NeuN+tdTom+ (כתום) הם תאים מותמרים המבטאים סמנים עצביים. פסי קנה מידה: 250 מיקרומטר. (B) תמונות מייצגות של בקרת Stroke-Cre (למעלה) ו-Stroke-Neurod1 (למטה) רקמת מוח המציגות נוירונים (NeuN+, ירוק) ותאים מותמרים AAV (tdTom+, אדום). כניסות המתוארות בלבן מציגות תקריב של תאים עבור כל ערוץ בנפרד. ראשי חצים לבנים מציינים תאים שהומרו AAV (tdTom+). חיצים לבנים מצביעים על תאי NeuN+tdTom+ משותפים. פסי קנה מידה: 125 מיקרומטר. (C) כימות של תאי NeuN+tdTom+/tdTom+ בפרדיגמה הכרונית מראה יותר תאים מותמרים המבטאים NeuN+ (תאי NeuN+tdTom+/tdTom+) בעכברים שטופלו ב-Neurod1 . N = 3 עכברים לקבוצה. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM. מבחן שפירו-וילק (p = 0.2044). מבחן t לא מזווג, *p &lt; 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

מערכות AAV ומודלים של עכברים לחקירת ביטוי חוץ רחמי של Neurod1 בתאים שעברו התמרה בזמנים תת-חריפים וכרוניים לאחר שבץ איסכמי

Ectopic expression of neurogenic factors in vivo has emerged as a promising approach for replacing lost neurons in disease models. The use of neural basic ...

aav-systems-mouse-models-for-investigating-ectopic-expression-neurod1

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן אנו מציגים מתודולוגיה לייצור שבץ מוחי מוקדי בחומר לבן של עכברים על ידי הזרקה מקומית של מעכב סינתאז תחמוצת החנקן (eNOS) בלתי הפיך (L-Nio). מוצגות שתי וריאציות סטריאוטקטיות, מעקב עצבי רטרוגרדי ותיוג ודיסקציה של רקמות טריות המרחיבות את היישומים הפוטנציאליים של טכניקה זו.

שבץ בחומר הלבן צדדי דגם Murine של קורטיקליים לחקר ניוון אקסונלית ולבן Matter לנוירוביולוגיה

על מנת להבין את פתופיזיולוגיה של שבץ, חשוב להשתמש במודלים אמינים. מאמר זה יתאר את אחד דגמי שבץ הנפוצים ביותר בשימוש בעכברים, כינה את חסימת עורק המוח האמצעי (MCAo) המודל (המכונה גם נימת intraluminal או מודל תפר) עם reperfusion.

גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים

חסימה כירורגי של ענף עורק דיסטלי באמצע המוח (MCAo) היא מודל משמש לעתים קרובות במחקר שבץ ניסיוני. כתב יד זה מתאר את הטכניקה הבסיסית של MCAo קבע, בשילוב עם הכניסה של חלון גולגולתי לרוחב, אשר מציעה את ההזדמנות עבור מיקרוסקופיה intravital אורך בעכברים.

הכנת חלון גולגולת כרוני לרוחב מאפשרת In vivo תצפית בעקבות העורקים התיכון ספיגה מוחין דיסטלי של עכברים

אנו מתארים מודל עכבר של שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימה של עורק המוח האמצעי באמצעות תפר מצופה סיליקון. ניתן ליישם את הפרוטוקול כדי לגרום לחסימה קבועה או איסכמיה זמנית, ואחריה רפרפוזיה.

אינדוקציה של שבץ איסכמי ו איסכמיה reperfusion בעכברים באמצעות הטכניקה ויזואליזציה ספיגות עורקים התיכונים של אזור האוטם

שיטה לאספקת תאי גזע עצביים, הניתנים להזרקת פתרונות או השעיות, דרך עורק הראש המשותף (עכבר) או העורק הראשי החיצוני (עכברוש) לאחר דיווח על שבץ. תאים מוזרק מופצים בהרחבה ברחבי המוח באתר וניתן לאתרם עד 30 d לאחר המסירה.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי למדוד במבחנה Ca2+ שטף בנוירונים המוח האמצעי ואת ההשפעות שלהם במורד הזרם על caspase-3 באמצעות תרביות המוח האמצעי של העכבר הראשי. מודל זה יכול להיות מועסק כדי ללמוד שינויים פתופיזיולוגיים הקשורים פעילות Ca2+ חריגה בנוירונים המוח האמצעי, ולסנן טיפולים רומן עבור תכונות אנטי אפופטוטיות.

כימות ספונטני Ca2+ שטף ואת ההשפעות במורד הזרם שלהם בעכבר ראשי נוירונים המוח האמצעי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

שיטת המחט של היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדית הא-סימטרית מוצעת ליצירת מודל עכבר לפגיעה קוגניטיבית בכלי הדם ודמנציה. זה מביא לתוצאות ארוכות טווח בהשוואה למודלים שנקבעו בעבר ותואם ל-MRI חי. ייצוג חזותי המדגים את ההליך מספק הנחיות לשליטה בניתוח.

מודל עכבר לליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה המבוסס על היצרות עורק צוואר משותף דו-צדדי אסימטרי מונחה מחט

פרוטוקול זה מספק שיטה משולבת הכוללת העברת ויראלית, השתלת אופטרודה, השראה פוטותרומבוטית, רישום סימולטני של פעילות אסטרוציטים ונוירונים, וגירוי אופטוגנטי של אסטרוציטים. שיטה משולבת זו שואפת לספק חקירה מקבילה של מערכת היחסים בין האסטרוציטים לנוירון בשלבים החריפים ועד הכרוניים של שבץ איסכמי.

שיטה משולבת למידול שבץ פוטוטרומבוטי ורישום אופטרודה ב-vivo של פעילות נוירונית ואסטרוציטית בעכברים מתנהגים

ההליך המתואר בפרוטוקול זה מראה כי הממשל טסטוסטרון ואמונות עממיות על הטסטוסטרון עשויה להיות קשורה התנהגויות חברתיות בניגוד ישירות.

שילוב של התנהגות אנדוקרינולוגיה וכלכלה ניסויית: החלטת טסטוסטרון חברתית ביצוע

חקור ביטוי חוץ של Neurod1 באמצעות וקטורי AAV בעכברים לאחר שבץ איסכמי בשלבים תת-חריפים וכרוניים. שיטה זו מאפשרת הערכת שיפורי תפקוד מוטורי ושיקום נוירונלי.

מערכות AAV ומודלים של עכברים לחקירת ביטוי חוץ רחמי של Neurod1 בתאים שעברו התמרה בזמנים תת-חריפים וכרוניים לאחר שבץ איסכמי

גלה סרטונים נוספים