מודל חסימתי של דלקת לבלב כרונית שהוקם באמצעות אלקטרו-קואגולציה

ישנן שיטות רבות לבניית מודלים של בעלי חיים של דלקת לבלב כרונית, כולל הזרקה תוך-צפקית של נתרן וקשירת צינור הלבלב, שיש להן מגבלות. הצוות שלנו פיתח לאחרונה מודל אלקטרו-קואגולציה חדש של דלקת לבלב כרונית בעכברים, שיש לו יתרון בכך שהוא אינו דורש תרופות בהזרקה ארוכה או שיטה קשה לשלוט בה. והם יכולים בקלות לבסס מודל של דלקת לבלב כרונית.

השימוש בקרישת דם חשמלית כדי לגרום לדלקת לבלב כרונית בעכברים מספק מודל נוח וניסיוני יותר, המציע אפיק מבטיח למחקר עתידי בתחום זה. כדי להתחיל, הנח את העכבר המורדם על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. בעזרת גוזם יש לגלח את השיער בין החזה לבטן התחתונה.

לאחר מכן, השתמש במספריים כדי לבצע חתך באורך שני סנטימטרים במרכז הבטן, ואחריו חתך של סנטימטר אחד בין הבטן העליונה לתהליך ה-xiphoid. השתמש במרחיב בטן כדי לאתר את אזור הלבלב לצורך קרישה חשמלית. בעזרת צמר גפן סטרילי, זהה את התריסריון מהחלק האחורי של הבטן העליונה השמאלית וסובב אותו כדי לדמיין את צינור המרה המחבר את הכבד.

חסום זמנית את צינור המרה המשותף הפרוקסימלי באמצעות קליפ מיקרו-וסקולרי כדי למנוע עירוי לאחור לכבד. חבר את צינור הפוליאתילן בגודל 0.25 על 0.35 מילימטר למחט של 0.25 מילימטר ונקב את האזור שמסביב לאמפולה, במטרה לפפילת התריסריון הגדולה. הכנס את הצינור לפפילה והעביר אותו באמצע הדרך לתוך צינור המרה, ואז עצור את הכניסה.

הפעל את משאבת העירוי, והחדיר תמיסת מתילן כחולה 0.2% עד שצינור הלבלב הופך לכחול. לאחר העירוי, משוך את צינור הפוליאתילן החוצה והסר את הקליפ המיקרו-וסקולרי. השתמש בצמר גפן סטרילי כדי לתקן את הלבלב, וכוון את סכין האלקטרו-קואגולציה לאזור הכחול.

לאחר קביעת פרמטרי ההפעלה של אלקטרו-קואגולציה, השתמש בנחושת טהורה כחומר האלקטרודה והחל טיפול בלבלב למשך שתיים-שלוש שניות תוך הימנעות מכלי דם. המשך בקרישה חשמלית עד שהאזור המוכתם במתילן כחול משנה את צבעו לצהוב או חום. כאשר תמיסת הצביעה הכחולה כבר לא נראית בלבלב, הפסק את האלקטרו-קואגולציה.

לאחר הניתוח, הניחו את העכבר בקופסת פוליאתילן מרופדת בחומר מצעים. לאחר קרישה חשמלית של צינור הלבלב, יש להרדים את העכבר ולהניח אותו על פלטפורמת הפעלה. כדי לאסוף דם דרך מקלעת המסלול, החזק בעדינות את העור בגב כדי ליצור בליטה קלה של גלגל העין.

לאחר מכן, הניחו את קצה הצינור הנימי בזווית העין והכניסו אותו בעדינות מתחת לגלגל העין בזווית של 30 עד 45 מעלות. סובב את הנימים עד שהדם מתחיל לזרום. לאחר איסוף הדם, סגור את העפעפיים על ידי הפעלת לחץ עדין עם גזה.

צנטריפוגה של הדם ב-1,200 גרם למשך 15 דקות ואספו את הסופרנטנט בצינור חדש. מדדו עמילאז, בילירובין וחומצה היאלורונית באמצעות ערכות מסחריות, בהתאם להמלצות היצרן. לאחר מכן, הניחו את העכבר המומת על שולחן הניתוחים המוגדר בארבע מעלות צלזיוס.

בעזרת מספריים ומלקחיים, בצע חתך V בדופן הבטן כדי לחשוף את חלל הבטן. מוציאים את הלבלב ומחלקים אותו לשלושה חלקים לצביעה. מקבעים את הלבלב בתמיסת פוליפורמלדהיד 4%, ואז מטמיעים את הלבלב הקבוע בפרפין לצורך חתך.

חותכים את גושי הפרפין לחלקים בעובי 0.5 מילימטר ומכתימים אותם בהמטוקסילין ואאוזין, כמו גם בכתם מאסון לניתוח אימונוהיסטוכימי. התבונן ברקמת הלבלב המוכתמת תחת מיקרוסקופ אור. צביעת המטוקסילין-אאוזין הראתה תאי אצינר בלבלב מפוזרים ועדויות לדלקת לבלב כרונית בקבוצת האלקטרו-קרישה ביום ה-14.

ביום ה-28 נצפו סימנים של התאוששות רקמות והיפוך פתולוגיה בתאי הלבלב. הצביעה של מאסון חשפה הרבה יותר פיברוזיס בקבוצת האלקטרו-קואגולציה בהשוואה לקבוצת הדמה. צביעה אימונוהיסטוכימית הדגימה רמות גבוהות של אלפא 1, קולגן מסוג 1 ואקטין בשריר חלק אלפא בקבוצת האלקטרו-קרישה, מה שמעיד על רמה גבוהה יותר של דלקת לבלב כרונית.

רמות החומצה ההיאלורונית עלו בקבוצת הקרישה החשמלית, והגיעו לשיא בסביבות היום ה-21, בעוד שנשארו יציבות בקבוצת הדמה. רמות הבילירובין עלו באופן משמעותי ביום ה-14 בקבוצת הקרישה החשמלית, והראו שיא בסביבות היום ה-21, בעוד שקבוצת הדמה לא הראתה שינויים. רמות העמילאז בקבוצת הקרישה החשמלית זינקו ביום ה-14, ואחריה ירידה ביום ה-28, כאשר קבוצת הדמה הראתה שונות מועטה.