Name: השתלת תאים ברזולוציה גבוהה בדגי זברה עובריים וזחלים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: למדו פרוטוקול להשתלת תאים ברזולוציה גבוהה בזברה Danio rerio מיום אחד עד שבעה לאחר ההפריה. שיטה זו מאפשרת מעקב ארוך טווח אחרי נוירונים מובחלים וחקר דינמיקת סיגנלים במרחב ובזמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>השתלת תאי דג זברה חזקה למחקר התחדשות ופיתוח

<ol><li>Solini, G. E., Dong, C., Saha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+transplantation+experiments%3A+Past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic transplantation experiments: Past, present, and future.</a> Trends Dev Biol. 10, 13-30 (2017).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22A+Conceptual+History+of+Modern+Embryology%22">A Conceptual History of Modern Embryology</a>. , Springer. New York, NY. (1991).</li>
<li>Spemann, H., Mangold, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+embryonic+primordia+by+implantation+of+organizers+from+a+different+species.+1923%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of embryonic primordia by implantation of organizers from a different species. 1923.</a> Int J Dev Biol. 45 (1), 13-38 (2001).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lineage Tracing.</a> Cell. 148 (1), 33-45 (2012).</li>
<li>Gansner, J. M., Dang, M., Ammerman, M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+22+-+Transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 22 - Transplantation in zebrafish.</a> Methods in Cell Biol. 138, 629-647 (2017).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+interphase+nucleus+in+Japanese+quail+%28Coturnix+coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Biol+Fr+Belg%22%5BJournal%5D)">Details of the interphase nucleus in Japanese quail (Coturnix coturnix japonica).</a> Bull Biol Fr Belg. 103 (3), 435-452 (1969).</li>
<li>Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+movements+and+cell+fate+during+zebrafish+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Suppl%22%5BJournal%5D)">Cell movements and cell fate during zebrafish gastrulation.</a> Dev Suppl. , 65-73 (1992).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+patterning+deciphered+in+avian+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Developmental patterning deciphered in avian chimeras.</a> Development, Growth & Differentiation. 50, S11-S28 (2008).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332 (6031), 811-816 (2011).</li>
<li>Balaban, E., Teillet, M. A., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+quail-chick+chimera+system+to+the+study+of+brain+development+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Application of the quail-chick chimera system to the study of brain development and behavior.</a> Science. 241 (4871), 1339-1342 (1988).</li>
<li>Carmany-Rampey, A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+mosaic+analysis+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Modern mosaic analysis in the zebrafish.</a> Methods. 39 (3), 228-238 (2006).</li>
<li>Kragl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+keep+a+memory+of+their+tissue+origin+during+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration.</a> Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).</li>
<li>Rojo-Laguna, J. I., Garcia-Cabot, S., Saló, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+transplantation+in+planarians%3A+A+useful+tool+for+molecular+analysis+of+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue transplantation in planarians: A useful tool for molecular analysis of pattern formation.</a> Semin Cell Dev Biol. 87, 116-124 (2019).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+choreography+of+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular choreography of appendage regeneration.</a> Cell. 165 (7), 1598-1608 (2016).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+are+barely+required+for+the+patterning+and+cell+dynamics+in+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Muscles are barely required for the patterning and cell dynamics in axolotl limb regeneration.</a> Front Genet. 13, 1036641(2022).</li>
<li>Wells, K. M., Kelley, K., Baumel, M., Vieira, W. A., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+growth+and+size+in+the+axolotl+limb+regenerate%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural control of growth and size in the axolotl limb regenerate.</a> Elife. 10, e68584(2021).</li>
<li>Otsuki, L., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+memory+in+vertebrate+regeneration%3A+a+century%27s+insights+from+the+salamander+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Positional memory in vertebrate regeneration: a century's insights from the salamander limb.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 14 (6), e040899(2022).</li>
<li>de Abreu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model of neurodevelopmental disorders.</a> Neuroscience. 445, 3-11 (2020).</li>
<li>Alper, S. R., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+advantages+of+zebrafish+larvae+as+a+model+for+spinal+cord+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unique advantages of zebrafish larvae as a model for spinal cord regeneration.</a> Front Mol Neurosci. 15, 983336(2022).</li>
<li>Blader, P., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+developmental+genetics+and+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish developmental genetics and central nervous system development.</a> Hum Mol Genet. 9 (6), 945-951 (2000).</li>
<li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J Vis Exp. (29), e1394(2009).</li>
<li>Boulanger-Weill, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interactions+between+newborn+and+mature+neurons+leading+to+integration+into+established+neuronal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional interactions between newborn and mature neurons leading to integration into established neuronal circuits.</a> Curr Biol. 27 (12), 1707-1720 (2017).</li>
<li>Dong, J., Stuart, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+manipulation+in+zebrafish+by+using+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgene manipulation in zebrafish by using recombinases.</a> Methods Cell Biol. 77, 363-379 (2004).</li>
<li>Kawakami, K., Shima, A., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+functional+transposase+of+the+Tol2+element%2C+an+Ac-like+element+from+the+Japanese+medaka+fish%2C+and+its+transposition+in+the+zebrafish+germ+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of a functional transposase of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish, and its transposition in the zebrafish germ lineage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (21), 11403-11408 (2000).</li>
<li>Hwang, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+zebrafish+using+a+CRISPR-Cas+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system.</a> Nat Biotechnol. 31 (3), 227-229 (2013).</li>
<li>Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+primary+motoneuron+identity+in+developing+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Determination of primary motoneuron identity in developing zebrafish embryos.</a> Science. 252 (5005), 569-572 (1991).</li>
<li>Elsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5+-+Cellular+methods%3A+detailed+procedure+for+transplanting+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 5 - Cellular methods: detailed procedure for transplanting single cells.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Poulain, F. E., Gaynes, J. A., Stacher Hörndli, C., Law, M. -Y., Chien, C. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+retinal+axon+guidance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analyzing retinal axon guidance in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 100, 3-26 (2010).</li>
<li>Masai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+mediates+retinal+lamination%2C+maintenance+of+forebrain+compartments+and+patterning+of+retinal+neurites%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">N-cadherin mediates retinal lamination, maintenance of forebrain compartments and patterning of retinal neurites.</a> Development. 130 (11), 2479-2494 (2003).</li>
<li>Raible, D. W., Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+interactions+in+zebrafish+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulative interactions in zebrafish neural crest.</a> Development. 122 (2), 501-507 (1996).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Barsh, G. R., Isabella, A. J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+motor+neuron+topographic+map+determined+by+parallel+mechanisms+of+hox5+expression+and+time+of+axon+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Vagus motor neuron topographic map determined by parallel mechanisms of hox5 expression and time of axon initiation.</a> Curr Biol. 27 (24), 3812-3825 (2017).</li>
<li>Isabella, A. J., Stonick, J. A., Dubrulle, J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+positional+memory+guides+target-specific+axon+regeneration+in+the+zebrafish+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intrinsic positional memory guides target-specific axon regeneration in the zebrafish vagus nerve.</a> Development. 148 (18), 199706(2021).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1%3A+General+methods+for+zebrafish+care%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 1: General methods for zebrafish care.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Grant, P. K., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroepithelial+basement+membrane+serves+as+a+boundary+and+a+substrate+for+neuron+migration+in+the+zebrafish+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">The neuroepithelial basement membrane serves as a boundary and a substrate for neuron migration in the zebrafish hindbrain.</a> Neural Dev. 5 (1), 9(2010).</li>
<li>Konantz, J., Antos, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+genetic+morpholino+approach+using+cardiac+ventricular+injection+to+transfect+multiple+difficult-to-target+tissues+in+the+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Reverse genetic morpholino approach using cardiac ventricular injection to transfect multiple difficult-to-target tissues in the zebrafish larva.</a> J Vis Exp. (88), e51595(2014).</li>
<li>Novoa, B., Figueras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+model+for+the+study+of+inflammation+and+the+innate+immune+response+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: model for the study of inflammation and the innate immune response to infectious diseases.</a> Adv Exp Med Biol. 946, 253-275 (2012).</li>
<li>Speirs, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+fish+neutrophil+and+macrophage+response+to+immune+challenge+from+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Shellfish+Immunol%22%5BJournal%5D)">What can we learn about fish neutrophil and macrophage response to immune challenge from studies in zebrafish.</a> Fish Shellfish Immunol. 148, 109490(2024).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Wienholds, E., Schulte-Merker, S., Walderich, B., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-selected+inactivation+of+the+zebrafish+rag1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target-selected inactivation of the zebrafish rag1 gene.</a> Science. 297 (5578), 99-102 (2002).</li>
<li>Petrie-Hanson, L., Hohn, C., Hanson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rag1+mutant+zebrafish+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of rag1 mutant zebrafish leukocytes.</a> BMC Immunol. 10, 8(2009).</li>
<li>Roh-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-dependent+cytoplasmic+transfer+during+melanoma+invasion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage-dependent cytoplasmic transfer during melanoma invasion in vivo.</a> Dev Cell. 43 (5), 549-562 (2017).</li>
<li>Bukrinsky, A., Griffin, K. J. P., Zhao, Y., Lin, S., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+spi-1-like+%28spi-1l%29+in+zebrafish+myeloid+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Essential role of spi-1-like (spi-1l) in zebrafish myeloid cell differentiation.</a> Blood. 113 (9), 2038-2046 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 מ"ל "מזרק מאגר"פישר</td> <td>סיינטיפיק</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>150 מ"ל מסנן ואקום חד פעמי, .2 ומיקרו; מ', PES</td><td>קורנינג</td><td>431153</td><td></td></tr><tr><td>20 x 12 מ"מ בלוק חימום</td><td>קורנינג</td><td>480122</td><td></td></tr><tr><td>פקק תלת כיווני</td><td>בראון מדיקל בע"מ.</td><td></td><td></td>455991</tr><tr><td>3 x 1 שקופית זכוכית חלבית</td><td>VWR</td><td>48312-004</td><td></td></tr><tr><td>40x מטרת טבילה במים</td><td>ניקון</td><td>MRD07420</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלוריד דיהידראט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C3306</td><td></td></tr><tr><td>מניפולטור גס</td><td>Narishige</td><td>MN-4</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מיקרו-מזרק מותאמת אישית</td><td>אוניברסיטת אורגון</td><td>N/A</td><td>מיוצר על ידי חנות מכונות של אוניברסיטת אורגון (tsa.uoregon@gmail.com). חלופה זמינה מסחרית מפורטת להלן.</td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>1129500</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse FN1 "מיקרוסקופ השתלה"</td><td>Nikon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ידית אלקטרודה</td><td>World Precision Instruments</td><td>5444</td><td></td></tr><tr><td>להב כירורגי סטרילי נוצות, #11</td><td>VWR</td><td>21899-530</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור עדין, הידראולי שמן תלת צירי&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7.2</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H3375-100G</td><td></td></tr><tr><td>דיוק גבוה #3 סגנון אזמל ידית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-000-163</td><td></td></tr><tr><td>קימבל חד פעמי בורוסיליקט פסטר פיפטה, קצה רחב, 5.75</td><td>במדעי החיים DWK</td><td>63A53WT</td><td></td></tr><tr><td>מתאם כרומטוגרפיה קימבל&nbsp;</td><td>DWK Life Sciences</td><td>420408-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי קל</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>M3516-1L</td><td></td></tr><tr><td>LSE מחמם אמבטיה יבש דיגיטלי, בלוק אחד, 120 V</td><td>Corning</td><td>6875SB</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מיקרו-מזרקים ידנית</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP</td><td>חלופה מסחרית למשאבת מיקרו-מזרקים מותאמת אישית</td></tr><tr><td>מחזיק מיקרואלקטרודה</td><td>מכשירים מדויקים בעולם</td><td>MPH310</td><td></td></tr><tr><td>MicroFil מילוי פיפטות</td><td>מכשירים מדויקים בעולם</td><td>MF28G67-5</td><td></td></tr><tr><td>לק</td><td>אלקטרונים MIcroscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>מים ללא נוקלז</td><td>VWR</td><td>82007-334</td><td></td></tr><tr><td>P-97 בוער/חום סוג מיקרופיפטה מושך</td><td>סאטר מכשירים</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>p4458-100 מ"ל</td><td>5,000 יחידות פניצילין ו-5 מ"ג סטרפטומיצין/מ"</td></tr><tr><td>ל משאבת פיפטה 10 מ"ל</td><td>Bel-Art</td><td>37898-0000</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>מקצועי סופר דבק</td><td>לוקטיט</td><td>LOC1365882</td><td></td></tr><tr><td>מבחנות פוליסטירן עגולות</td> <td>תחתונותפלקון</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>שלב מיקרומטר</td><td>מייג'י טכנו אמריקה</td><td>MA285</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים ללא מחט, 50 מ"ל</td><td>BD רפואי</td><td>309635</td><td></td></tr><tr><td>טריקאין מתאנוסולפונאט</td><td>סינדל ארה"ב</td><td>SYNCMGAUS03</td><td></td></tr><tr><td>טרילן XL יציקה חלקה חוט דיג</td><td>ברקלי</td><td>XLFS6-15</td><td></td></tr><tr><td>צינורות, פוליאתילן מס' 205</td><td>BD Medical</td><td>427445</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure נקודת התכה נמוכה Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Wiretrol II מיקרופיפטות מכוילות</td><td>Drummond</td><td>50002010</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלת תאים ברזולוציה גבוהה בדגי זברה עובריים וזחלים

High-resolution Cell Transplantation in Embryonic and Larval Zebrafish

תוצאות ניסויי ההשתלה נצפות ישירות על ידי הדמיה של תאי תורם המסומנים באופן פלואורסצנטי בבעלי חיים מארחים בנקודות זמן מתאימות לאחר ההשתלה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. כאן, השתלנו נוירונים תועה קדמיים בודדים ב 3 dpf. חיות מארחות הודגרו במשך 12 או 48 שעות, הורדמו, הורכבו ב-LMA על מכסה זכוכית, וצולמו במיקרוסקופ קונפוקלי (איור 5). 12 שעות לאחר ההשתלה (hpt), אנו צופים בתא עצב מתורם שהושתל בהצלחה (איור 5A). אנו יכולים לאשר מיקום נכון של התא, כפי שהוא ממוקם בין נוירונים vagus המארח באזור הקדמי של הגרעין המנוע vagus המארח; התא גם נראה שלם ובריא, כפי שניתן לראות על-ידי הרחבה של כמה בליטות נוירוריט קצרות (איור 5A). יומיים לאחר ההשתלה (dpt), אנו יכולים שוב לאשר שתא עצב יחיד הושתל בהצלחה במיקום הנכון של הגרעין המארח (איור 5B). בנקודה זו אנו רואים שתא העצב הרחיב אקסון חדש לקשת הלוע הרביעית (איור 5B). התבוננות ישירה מגלה גם מתי ההליך נכשל. בדוגמה זו, אנו צופים במארח 2 dpt שבו לא נמצא נוירון תורם; במקום זאת, ניתן לראות כתם ירוק קטן, ככל הנראה שבר של תא עצב מתורם שמת לאחר ההשתלה (איור 5C). למרות ששיעורי ההצלחה של השתלות ישתנו בהתאם לחוויית המשתמש ומספר התאים המושתלים וסוגם, אנו חווים שיעור הצלחה (המוגדר כנוכחות של נוירון שורד שהרחיב אקסון במארח ב 2-3 dpt) של 66% (n = 453 השתלות) עבור השתלות נוירון מוטורי הואגוס המבוצעות ב 3-4 dpf33.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig01.jpg"> איור 1: סקירה כללית של מנגנון ההשתלה. (A) מיקרוסקופ פלואורסצנטי זקוף; (ב) יעד טבילה במים פי 40; (ג) מיקרומניפולטור גס; (ד) מיקרומניפולטור עדין; (E) מחזיק מיקרואלקטרודות; (ו) ידית אלקטרודה; (ז) סטופר תלת-כיווני; (H) משאבת מזרק; (I) צינורות פוליאתילן; (י) מתאמי כרומטוגרפיה; (K) מזרק מאגר 10 מ"ל. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig02.jpg"> איור 2: הרכבה של בעלי חיים להשתלה. (A) מגלשת זכוכית חלבית בגודל 3 אינץ' x 1 אינץ' עם לק שקוף שנמרח בקו מתאר מלבני (קו מקווקו). (B) בעלי חיים של תורם (חץ) ופונדקאי (ראש חץ) המותקנים בטיפות אגרוז, מיושרים אנכית עם אתר היעד להשתלה (המוח האחורי) בכיוון ימין. (C) אגרוז עם קצה ימני וטריזים חתוכים כדי לחשוף את אתר היעד להשתלה. כניסה: זום של האזור הארוז. (D) שקופית השתלה מוצפת בתמיסה של רינגר עם פניצילין-סטרפטומיצין וטריקאין. פסי קנה מידה = 5 מ"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig03.jpg"> איור 3: הכנת מחט השתלה. (A) מחט השתלה שבורה על גבי מיקרומטר שלב. (B) מילוי פיפטה (1) המוחדר למחט השתלה (2) למילוי מחט בשמן מינרלי. (C) מגלשת השתלה מוכנה ומחט במקומן במיקרוסקופ ההשתלה. 1: מניסקוס מים בין יעד הטבילה פי 40 לבין המגלשה המוצפת 2: מחט השתלה 3: מחזיק מיקרואלקטרודות. (D) קצה של מחט השתלה שבורה עם מניסקוס שמן יציב (ראש חץ) שנצפה דרך מיקרוסקופ השתלה בהגדלה של פי 40. פסי קנה מידה = 100 מיקרומטר <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig04.jpg"> איור 4: תהליך ההשתלה מתחת למיקרוסקופ. (A) מחט הממוקמת מחוץ לבעל החיים התורם, ומכוונת לנוירונים מוטוריים תועים (ירוק, ראש חץ). (B) מחט הממוקמת בתוך בעל החיים התורם לאחר שקלטה תאי עצב של תורם מסומנים פלואורסצנטית (ראשי חץ). (C) מחט המכילה מספר תאי עצב מתורם (ראשי חץ) הממוקמים מחוץ לחיה המארחת, ומכוונים לתאי עצב מוטוריים של הואגוס המארח הקדמי (אדום, כוכבית). (D) בעל חיים מארח לאחר השתלה עם מחט משוכה. אשכול של תאי עצב מתורם מושתל המבטאים GFP (ראש חץ) גורשו לתוך הפונדקאי. פסי קנה מידה = 30 מיקרומטר <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig05.jpg"> תרשים 5: תוצאות מייצגות. (א,ב) השתלות מוצלחות. (A) האזור הקדמי של גרעין מנוע הואגוס מארח 12 hpt (מגנטה) המכיל נוירון תורם (ירוק, שחור ב-A'). תא העצב התורם הרחיב מספר נוירוטים (חצים ב-A'). (B) הגרעין המוטורי התועה (B-B') וענפי האקסון הלועי (B''-B', ענפי אקסון מסומנים) של מארח 2 dpt (מגנטה) המכיל נוירון תורם (ירוק, שחור ב-B', B'''). תא העצב התורם הרחיב אקסון חדש לענף 4 (ראשי חץ). איור 5A,B מייצג חיות שונות. (ג) השתלה לא מוצלחת. הגרעין המוטורי התועה של מארח 2 dpt (מגנטה). אין נוירון תורם נוכח; במקום זאת, כתם קטן (ירוק, שחור ב-C'), המייצג ככל הנראה שבר של נוירון תורם מת (ראש חץ), נוכח. פסי קנה מידה = 20 מיקרומטר. קיצורים: dpt = ימים לאחר ההשתלה; HPT = שעות לאחר ההשתלה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Development and regeneration occur by a process of genetically encoded spatiotemporally dynamic cellular interactions. The use of cell transplantation ...

high-resolution-cell-transplantation-in-embryonic-and-larval-zebrafish

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

דג הזברה השתלת מאפשר שילוב של גנטיקה אמבריולוגיה ליצור מפלצות רקמות ספציפיות. וידאו זה מדגים gastrula מבוים השתלות תא אפשרו במעבדה שלנו כדי לחקור את התפקידים של אוכלוסיות astroglial ו רמזים הנחיות ספציפיות במהלך היווצרות השליכה בקידמתו.

ממוקד רקמות מפלצות עובריים: דג הזברה Gastrula השתלת תאים

אנו להדגים פרוטוקול ליצור עוברי דג הזברה chimeric להתנהגות הדמיה לחיות הסלולר במהלך embryogenesis.

השתלה של ה-GFP-לבטא בלסטומרים עבור הדמיה חיה של התפתחות המוח ואת רשתית עוברי דג הזברה chimeric

דג הזברה, דגים טרופיים קטנים, הפכה לדגם פופולרי ללימוד תפקוד גן במהלך התפתחות מחלה וחוליות. הביטוי של הזמן ומרחב של גני המטרה יכול להיקבע על...

הר שלם ברזולוציה גבוהה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה בתוך עוברי דג הזברה לחקר ביטוי גנים ותפקוד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת תאים של שריר השלד של דג הזברה ורבדומיוסרקומה עוברית (ERMS) לתוך דג זברה מוטנטי מוטנטי הומוזיגוטי של rag2E450fs. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח יעיל של התחדשות וטרנספורמציה ממאירה של תאי שריר.

השתלת תאי שריר נורמלית וממאירים לחיסון חלש למבוגרים דג הזברה

פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד תאים בודדים מעוברי דג הזברה, העשרה לתאים מעניינים, לכידת תאי דג זברה במערכות מולטיפלקס תאים בודדים מבוססות מיקרופלואידית, והערכת ביטוי גנים מתאים בודדים.

בידוד ואפיון של תאים בודדים מעוברים דג הזברה

מעקב חיה של אבות רשתית WT בודדים רקע גנטי מובהק מאפשר הערכה של תרומת איתות שאינו אוטונומי התא במהלך הנוירוגנזה. כאן, שילוב של מציאת גן, דור הכימרה באמצעות השתלה העובר בתחום הדמית confocal זמן לשגות vivo נוצל למטרה זו.

In vivo הדמיה של ביטוי מהונדס ג&#39;ין הפרט רשתית אבות ב Chimeric דג הזברה עוברים לחקר השפעות Cell Nonautonomous

אנו מציגים פרוטוקול יעיל, קל לשימוש עבור הכנת תרביות תאים הראשי של דג זברה העוברים על תרביות תאים, תא חי הדמיה, כמו גם פרוטוקול להכין ראשי תאים מהמוח דג זברה למבוגרים.

תרבות, תרביות תאים תאים ראשי דג זברה

מניפולציות עובריות כגון סילוק והשתלת תאים הן כלים חשובים לחקר ההתפתחות המוקדמת. פרוטוקול זה מתאר מכשיר השתלה פשוט ויעיל לביצוע מניפולציות אלה בעוברי דגי זברה.

מכשיר השתלה פשוט ויעיל לעוברי דגי זברה

עבודה זו מתארת פרוטוקול למערכת טרנסגנזה מודולרית Tol2, שיטת שיבוט מבוססת שער ליצירה והזרקה של מבנים טרנסגניים לעוברים של דגי זברה.

מערכת Tol2 של דג הזברה: גישת טרנסגנזה מודולרית וגמישה מבוססת שער

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת קסנו בחלמון של עוברי דגי זברה שקופים המותאם בשיטת היערכות פשוטה ומהירה. ניתוחים לאחר הזרקה כוללים הישרדות והערכת נטל המחלה של תאים מושתלים על ידי ציטומטריית זרימה.

שיטה פשוטה, מהירה ויעילה לניתוח השתלת גידול בעוברים שקופים של דגי זברה

למדו פרוטוקול להשתלת תאים ברזולוציה גבוהה בזברה Danio rerio מיום אחד עד שבעה לאחר ההפריה. שיטה זו מאפשרת מעקב ארוך טווח אחרי נוירונים מובחלים וחקר דינמיקת סיגנלים במרחב ובזמן.

השתלת תאים ברזולוציה גבוהה בדגי זברה עובריים וזחלים

גלה סרטונים נוספים