Name: ניטור שינויים הנגרמים על ידי אלקטרופורציה ביצירת פוטנציאל פעולה בתאי HEK מהונדסים גנטית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-06T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: למד כיצד לנטר שינויים ביצירת פוטנציאל פעולה בתאי HEK מהונדסים גנטית בעקבות אלקטרופורציה. השיטה משתמשת במעקב אופטי ומספקת תובנות חשובות לטיפולים קליניים בתאים מעוררים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הערכת השפעות אלקטרופורציה על תאי HEK מהונדסים גנטית

<ol><li>Kotnik, T., Rems, L., Tarek, M., Miklavčič, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+electroporation+and+electropermeabilization%3A+Mechanisms+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Membrane electroporation and electropermeabilization: Mechanisms and models.</a> Ann Rev Biophys. 48 (1), 63-91 (2019).</li>
<li>Yarmush, M. L., Golberg, A., Serša, G., Kotnik, T., Miklavčič, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation-based+technologies+for+medicine%3A+principles%2C+applications%2C+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Electroporation-based technologies for medicine: principles, applications, and challenges.</a> Ann Rev Biomed Eng. 16, 295-320 (2014).</li>
<li>Kotnik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation-based+applications+in+biotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Electroporation-based applications in biotechnology.</a> Trend Biotechnol. 33 (8), 480-488 (2015).</li>
<li>Mahnič-Kalamiza, S., Vorobiev, E., Miklavčič, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+in+food+processing+and+biorefinery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Memb+Biol%22%5BJournal%5D)">Electroporation in food processing and biorefinery.</a> J Memb Biol. 247 (12), 1279-1304 (2014).</li>
<li>Reddy, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+field+or+conventional+thermal+ablation+for+paroxysmal+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulsed field or conventional thermal ablation for paroxysmal atrial fibrillation.</a> New Engl J Med. 389 (18), 1660-1671 (2023).</li>
<li>Cvetkoska, A., Maček-Lebar, A., Trdina, P., Miklavčič, D., Reberšek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+contractions+and+pain+sensation+accompanying+high-frequency+electroporation+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Muscle contractions and pain sensation accompanying high-frequency electroporation pulses.</a> Sci Rep. 12 (1), 8019(2022).</li>
<li>Tung, L., Tovar, O., Neunlist, M., Jain, S. K., O'neill, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+strong+electrical+shock+on+cardiac+muscle+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+New+York+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of strong electrical shock on cardiac muscle tissue.</a> Ann New York Acad Sci. 720 (1), 160-175 (1994).</li>
<li>Batista Napotnik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+HEK+cells+as+a+valuable+tool+for+studying+electroporation+in+excitable+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered HEK cells as a valuable tool for studying electroporation in excitable cells.</a> Sci Rep. 14 (1), 720(2024).</li>
<li>McNamara, H. M., Zhang, H., Werley, C. A., Cohen, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optically+controlled+oscillators+in+an+engineered+bioelectric+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+X%22%5BJournal%5D)">Optically controlled oscillators in an engineered bioelectric tissue.</a> Phys Rev X. 6 (3), 031001(2016).</li>
<li>Tian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video-based+pooled+screening+yields+improved+far-red+genetically+encoded+voltage+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Video-based pooled screening yields improved far-red genetically encoded voltage indicators.</a> Nat Methods. 20 (7), 1082-1094 (2023).</li>
<li>Sweeney, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+cell+membrane+permeability+induced+by+monopolar+and+high-frequency+bipolar+bursts+of+electrical+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembranes%22%5BJournal%5D)">Quantification of cell membrane permeability induced by monopolar and high-frequency bipolar bursts of electrical pulses.</a> Biochim Biophys Acta Biomembranes. 1858 (11), 2689-2698 (2016).</li>
<li>Pakhomov, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+plasma+membrane+permeabilization+in+mammalian+cells+by+nanosecond+pulsed+electric+field+%28nsPEF%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectromagnetics%22%5BJournal%5D)">Long-lasting plasma membrane permeabilization in mammalian cells by nanosecond pulsed electric field (nsPEF).</a> Bioelectromagnetics. 28 (8), 655-663 (2007).</li>
<li>Lee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+ratiometric+optical+mapping+enables+high-resolution+cardiac+electrophysiology+in+pig+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo ratiometric optical mapping enables high-resolution cardiac electrophysiology in pig models.</a> Cardiovasc Res. 115 (11), 1659-1671 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>צינור 1.5 מ"ל</td><td>Ratiolab&nbsp;</td><td>5615000</td><td></td></tr><tr><td>2 בארות Nunc Lab-Tek II Chambered #1.5 מערכת כיסוי גרמנית</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>155379 ADP305 בדיקת מתח דיפרנציאלי</td><td>Teledyne LeCroy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AP015 בדיקת זרם</td><td>Teledyne LeCroy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td></td><td></td>A1113903</tr><tr><td>חממת CO2&nbsp;</td><td>PHCbi&nbsp;</td><td>MCO -230AICUV</td><td></td></tr><tr><td>דוקסיציקלין&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'/מרק</td><td>D9891</td><td></td></tr><tr><td>דולבקו s Modifed Eagle' s בינוני גבוה גידול גלוקוז</td><td>בינוני Sigma-Aldrich/Merck</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>ElectroFluor630 (Di-4-ANEQ(F)PTEA)</td> <td>בדיקות פוטנציומטריות</td><td>31795</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>גנטיצין</td><td>תרמו פישר מדעי&nbsp;</td><td></td><td></td>10131035</tr><tr><td>גלוטמין</td><td>סיגמא-אולדריץ'/Merck</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>קולט אדים למינרי Iskra</td><td>Pio&nbsp;</td><td>MC 15-2</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Mathworks</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פניצילין&ndash; סטרפטומיצין</td><td>סיגמא-אולדריץ'/Merck</td><td>P07681</td><td></td></tr><tr><td>פולי-L-ליזין הידרוברומיד&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'/מרק</td><td>P9155-5MG&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מחולל פולסים&nbsp;</td><td>בהתאמה</td><td></td> אישית <td>ראה התייחסות11</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>A1113803</tr><tr><td>T25 25 ס"מ ו-sup2; בקבוק תרבית רקמה</td><td>TPP&nbsp;</td><td>90026</td><td></td></tr><tr><td>תאי HEK מזנקים Tet-on</td><td>אוסף תרבית מסוג אמריקאי ATCC</td><td>CRL-3479</td><td></td></tr><tr><td>מערכת תאים חיים של Thunder Imager למיקרוסקופיה פלואורסצנטית</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פתרון Trypsin-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>WavePro 7300A אוסילוסקופ</td><td>Teledyne LeCroy</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ניטור שינויים הנגרמים על ידי אלקטרופורציה ביצירת פוטנציאל פעולה בתאי hek מהונדסים גנטית

Monitoring Electroporation-Induced Changes in Action Potential Generation in Genetically Engineered Tet-On Spiking HEK cells

ניתן לנטר אופטית שינויים ב-TMV בתאים מעוררים במבחנה המופעלים על ידי פולסים חשמליים באמצעות פרוטוקול זה, וניתן לנתח את אותות הקרינה כדי לחלץ את הפרמטרים הרלוונטיים שלהם.
מערך הניסוי מוצג באיור 1A. אות טיפוסי של פולס חשמלי של 100 מיקרון-שניות המשמש בניסויים מוצג באיור 1B. תאים בתאים שממוקמים מתחת למיקרוסקופ בדרך כלל נראים כמו התאים באיור 1C (תמונת שדה בהיר) ובאיור 1D (תמונת פלואורסצנטיות). אנו מבצעים ניסוי שבו כל 2 דקות מופעל פולס חשמלי עם מתח הולך וגדל על אותם תאים. שימו לב שזמן הדחף של 2 דקות עשוי שלא להיות ארוך מספיק כדי לאפשר איטום מחדש והתאוששות מלאה של קרומי התאים, במיוחד כאשר משתמשים בפולסים בעלי המשרעת הגבוהה ביותר, הקשורים לאלקטרופורציה בולטת. לפיכך, ניתן לצפות לכמה השפעות מצטברות של הפולסים. כדי להימנע מהשפעות מצטברות אלה, ניתן להאריך את עיכוב הדחף, אך על חשבון הפחתת מספר אמפליטודות הדופק שנבדקו והימנעות מהשארת התאים במיקרוסקופ זמן רב מדי.
לאחר לכידת תמונות פלואורסצנטיות בניסויים, נתח אותן עם אפליקציית MATLAB המותאמת אישית. ראשית, קבע את ספי הפיקסלים (איור 2A); על ידי התאמת הסף הנמוך, אנו מקבלים תמונה ברורה של הממברנות סביב התאים (בסגול), ועל ידי התאמת הסף הגבוה אנו מסירים את אות הפסולת (ירוק). לאחר מכן, היישום קובע את עוצמת הקרינה הממוצעת של כל פיקסלי הסף עבור כל פולס עוקב שנמסר כדי לקבל אות תלוי זמן של השינוי היחסי בקרינה F/F0. אות זה מתוקן עבור פוטו-הלבנת צבע על ידי הפחתת שיפוע הירידה הליניארית של F שנקבע מהקלטת זמן-lapse של הבקרה שבה לא הופעל פולס (איור 2B). לאחר תיקון האות, הפרמטרים של התגובות מופקים בצורה של טבלה בתוך האפליקציה וגרף של אות הקרינה המתוקן (איור 2C). במקרים נדירים, האלגוריתם אינו מזהה שיא ברור או מזהה אותות רעש מזויפים כחיוביים כוזבים. במקרים אלה, למשתמש יש אפשרות לבחור ידנית את הנקודה המתאימה באות הקרינה כשיא או להסיר את השיא הכוזב שזוהה (איור 2D - הסרה של שיא קטן שזוהה באופן חריג לפני הפעלת הפולס החשמלי).
על ידי שימוש ביישום MATLAB, אנו יכולים לקבל תמונות של תגובות TMV לפולסים חשמליים הן בתאי S-HEK מעוררים (איור 3A) והן בתאי NS-HEK שאינם מעוררים (איור 3B). פרמטרי התגובה הבאים מופקים (טבלה 1): מספר פסגות (NoPeaks), זמן שיא לשיא ממוצע (כאשר מזוהה יותר משיא אחד, MPPT), תגובה מקסימלית (MR), זמן לשיא ראשון (TtFP) וזמן משיא ל-25%, 50%, 75% ו-90% התאוששות (T25, T50, T75, T90, בהתאמה). פרמטרים אלה מאפשרים להעריך את התגובות לפולסים חשמליים שונים (למשל, לקבוע את מספר הפסגות המופעלות על ידי פולסים חשמליים של E שונה, איור 3C) ואת יחסי הגומלין בין עירור לאלקטרופורציה.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67257/67257fig01.jpg"> 
איור 1: המערך, צורת הגל ותאי S-HEK. (A) תמונת החדר על במת המיקרוסקופ. (ב) דוגמה לצורת הגל של פולס ששימש במחקר (מתח (U) לאורך זמן). (ג, ד) התמונה של תאי S-HEK ((C): שדה בהיר, (D): פלואורסצנטי), סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67257/67257fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67257/67257fig02v2.jpg"> 
איור 2: יישום ניתוח נתונים. (א) התמונה של ממשק היישום - סף. (B) הגרף של האות הגולמי והמתוקן של שינוי הקרינה. (C) התמונה של ממשק היישום - נתונים שחולצו. (ד) תיקון ידני של גילוי שיא (הסרת שיא קטן שזוהה באופן חריג לפני הפעלת הפולס החשמלי, מסומן בחץ אדום). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67257/67257fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67257/67257fig03v2.jpg"> 
איור 3: תוצאות מייצגות. (A, B) הפעלת שינויים ב-TMV ב-(A) S-HEK מעורר ו-(B) NS-HEK לא-מעורר עם פולסים חשמליים של 100 μs של אמפליטודות שונות, תוצאות מניסויים מייצגים. לשם הבהרה, מוצגות רק תגובות לפולסים נבחרים ברצף הדופק המיושם. (C) הפרמטרים של תגובות TMV המופעלות על ידי פולסים של 100 מיקרומטר של אמפליטודות שונות: דוגמה מראה את מספר הפסגות. התוצאות מבוטאות כממוצע ± SE, מספר הניסויים: N = 13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67257/67257fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>מדד</td>
			<td>חוזק E (אנכי/ס"מ)</td>
			<td>אין פסגות (-)</td>
			<td>MPPT (מ.ס)</td>
			<td>אדון (-)</td>
			<td>TtFP (מ.ס)</td>
			<td>T25 (מ.ס)</td>
			<td>T50 (מ.ס)</td>
			<td>טי75 (מ.ס)</td>
			<td>טי90 (מ.ס)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>126</td>
			<td>9</td>
			<td>224</td>
			<td>0.104</td>
			<td>360</td>
			<td>72</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>150</td>
			<td>6</td>
			<td>354</td>
			<td>0.097</td>
			<td>108</td>
			<td>72</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>176</td>
			<td>2</td>
			<td>144</td>
			<td>0.089</td>
			<td>36</td>
			<td>72</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>200</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.075</td>
			<td>0</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
			<td>252</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6</td>
			<td>250</td>
			<td>2</td>
			<td>396</td>
			<td>0.064</td>
			<td>0</td>
			<td>108</td>
			<td>216</td>
			<td>432</td>
			<td>2052</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7</td>
			<td>300</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.059</td>
			<td>0</td>
			<td>180</td>
			<td>1188</td>
			<td>2448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8</td>
			<td>350</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.053</td>
			<td>0</td>
			<td>1008</td>
			<td>2340</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9</td>
			<td>400</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.047</td>
			<td>0</td>
			<td>1512</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: פרמטרים של תגובות TMV המופעלות על ידי פולסים של 100 מיקרון של אמפליטודות שונות.

ניטור שינויים הנגרמים על ידי אלקטרופורציה ביצירת פוטנציאל פעולה בתאי HEK מהונדסים גנטית

Excitable cells such as&#160;neuronal and muscle cells can be primary targets in rapidly emerging electroporation-based treatments. However, they can be ...

monitoring-electroporation-induced-changes-action-potential

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

תא בודד electroporation (SCE) היא טכניקה מיוחדת המאפשרת משלוח של ה-DNA או מקרומולקולות אחרים לתוך תאים בודדים בתוך הרקמה בשלמותה, כולל ההכנות vivo. כאן אנו בפירוט את הליך SCE של פלורסנט לצבוע או פלסמיד דנ"א לתוך הנוירונים במוח שלם של laevis Xenopus הראשן.

תא יחיד electroporation in vivo בתוך המוח המתפתח אינטקט

אנו מדגימים כיצד ללמוד את ההשפעה של מוטציה נקודה אחת על התפקוד של ערוץ יון.

Mutagenesis וניתוח פונקציונלי של תעלות יונים הביעו Heterologously בתאי יונקים

Transfection אסטרטגיה אופטימיזציה עבור הביטוי הקלטה של ​​אלקטרו Voltage-מגודרת ערוצי רקומביננטי יון ב HEK-293T תאים

מקור: Keener, D. G., et al. אלקטרופורציה של תא בודד על פני תרביות פרוסות אורגנוטיפיות שונות של נוירונים מעוררים ומעכבים ספציפיים לכיתה של עכבר. J. Vis. Exp. (2020).סרטון זה מדגים את התהליך של אלקטרופורציה של תא בודד להחדרת DNA פלסמיד לתאי עצב בתוך תרביות פרוסות היפוקמפוס של עכברים. ההליך כולל מיקום מדויק של פיפטה, התאמות לחץ ופולסים של אלקטרופורציה כדי לחלחל באופן זמני את הממברנה העצבית, מה שמקל על העברת גנים. לאחר האלקטרופורציה, הפרוסה מודגרת כדי לאפשר ביטוי של הגן המבוקש.

ביטוי גנים באמצעות אלקטרופורציה של תא בודד בתרביות פרוסות היפוקמפוס של עכברים

בסרטון זה, תרביות תאי כליה עובריים המבטאים חלבוני תעלות יונים תלויי אור המאוחים עם כתב פלואורסצנטי מדגימות את השפעת האור על תנועת היונים. מהדק טלאי תא שלם משמש לניטור תנועת היונים.

רישום אלקטרופיזיולוגיה אופטוגנטית של תאים עם תעלות יונים תלויות אור

מצגת זו מדגימה שיטה לפיה אלקטרופורציה של תאים דבקים ומתורבתים משמשת לחקר תקשורת בין-תאית, צומתית, בעוד התאים גדלים על שקופית המצופה בתחמוצת אינדיום-בדיל מוליכה ושקופה.

Assay פונקציונלי לגאפ junctional בחינה; Electroporation של תאים חסידים על אינדיום הבדיל-אוקסיד

אלקטרופורציה שימשה להחדרת חלבוני אפקטור אלימות חיידקים מטוהרים ישירות לתאים אוקריוטיים חיים. לוקליזציה של חלבונים נוטרה על ידי מיקרוסקופיה אימונופלואורסצנטית קונפוקלית. שיטה זו מאפשרת מחקרים על סחר, תפקוד ואינטראקציות חלבון-חלבון באמצעות חלבונים אקסוגניים פעילים, ומונעת את הצורך בביטוי הטרולוגי בתאים אוקריוטיים.

Electroporation של effectors בקטריאלי פונקציונלי לתאי יונקים

מתוארת שיטה להדמיית שינויים בפוטנציאל הממברנה באמצעות מחווני מתח מקודדים גנטית.

ממברנה הדמיה פוטנציאלית עם שני סוגי חיישני מתח פלורסנט מקודדים גנטיים

פרוטוקול זה מתאר את טכניקות המיקרו-פבריקציה הנדרשות לבניית התקן אלקטרופורציה מיקרופלואידי במעבדה על שבב. מערך הניסוי מבצע טרנספקציות מבוקרות ברמת תא בודד בזרימה רציפה וניתן להרחיב אותן לתפוקות גבוהות יותר עם בקרה מבוססת אוכלוסייה. ניתן ניתוח המציג את היכולת לעקוב באופן חשמלי אחר מידת החדירה של קרום התא בזמן אמת.

ייצור והפעלה של זרימה רציפה, מערכת מיקרו-אלקטרופורציה עם זיהוי חלחול

כאן, אנו מציגים פרוטוקול אלקטרופורציה במבחנה לשחזור עבור מניפולציה גנטית של מבשרי תאי גרגר המוח הקטן העיקרי (GCPs) כי הוא חסכוני, יעיל, קיימא. יתר על כן, פרוטוקול זה מדגים גם שיטה פשוטה למחקר מולקולרי של מסלולי איתות קיפוד תלויי ציליום ראשוניים בתאי GCP ראשוניים.

שיטת אלקטרופורמציה יעילה וחסכונית לחקר מסלולי איתות ראשוניים תלויי סיליום במבשר תאי הגרגיר

אלקטרופורציה של מצע נקבובי (PSEP) משלבת אספקה עקבית בתפוקה גבוהה עם כדאיות תאים גבוהה. הכנסת מדידות עכבה חשמלית טרנסאפיתל (TEEI) מספקת תובנה לגבי תהליכי הביניים של PSEP ומאפשרת אספקה ללא תוויות. מאמר זה דן בשיטה לביצוע ניסויי העברת PSEP וניתוח מדידת TEEI בו-זמנית.

אלקטרופורציה מבוססת מצע נקבובי עם ניטור עכבה חשמלית טרנסאפיתל

למד כיצד לנטר שינויים ביצירת פוטנציאל פעולה בתאי HEK מהונדסים גנטית בעקבות אלקטרופורציה. השיטה משתמשת במעקב אופטי ומספקת תובנות חשובות לטיפולים קליניים בתאים מעוררים.

ניטור שינויים הנגרמים על ידי אלקטרופורציה ביצירת פוטנציאל פעולה בתאי HEK מהונדסים גנטית

גלה סרטונים נוספים