Name: ביסוס מודל דלקת קרנית חמורה בחולדות המבוסס על גרידת אפיתל בקרנית בשילוב תפרי קרנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T14:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: למדו כיצד לבסס מודל דלקת קרנית חמורה בחולדות באמצעות גרידת אפיתל קרנית בשילוב תפרי קרנית. שיטה זו מאפשרת חקר השפעות הדלקת על תאי גזע לימבליים ללא פגיעה בהם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ang, L. P., Tan, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+surface+stem+cells+and+disease%3A+Current+concepts+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Acad+Med+Singap%22%5BJournal%5D)">Ocular surface stem cells and disease: Current concepts and clinical applications.</a> Ann Acad Med Singap. 33 (5), 576-580 (2004).</li>
<li>Mao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+p38+MAPK+signaling+pathway+ameliorates+tissue-engineered+corneal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Downregulation of p38 MAPK signaling pathway ameliorates tissue-engineered corneal epithelium.</a> Tissue Eng Part A. 28 (23-24), 977-989 (2022).</li>
<li>Sprogyte, L., Park, M., Di Girolamo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+alkali+injury-induced+limbal+stem+cell+deficiency%3A+A+literature+survey+of+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of alkali injury-induced limbal stem cell deficiency: A literature survey of animal models.</a> Cells. 12 (9), 1294(2023).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+microenvironment+changes+after+obstruction+of+lacrimal+gland+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland microenvironment changes after obstruction of lacrimal gland ducts.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (3), 15(2022).</li>
<li>Le, Q., Chauhan, T., Deng, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+criteria+for+limbal+stem+cell+deficiency+before+surgical+intervention-+A+systematic+literature+review+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic criteria for limbal stem cell deficiency before surgical intervention- A systematic literature review and analysis.</a> Surv Ophthalmol. 65 (1), 32-40 (2020).</li>
<li>Li, W., Hayashida, Y., Chen, Y. T., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche+regulation+of+corneal+epithelial+stem+cells+at+the+limbus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Niche regulation of corneal epithelial stem cells at the limbus.</a> Cell Res. 17 (1), 26-36 (2007).</li>
<li>Ou, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ectodysplasin+a+on+the+ocular+surface+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of ectodysplasin a on the ocular surface homeostasis.</a> Int J Mol Sci. 23 (24), 12(2022).</li>
<li>Lin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+stem+cell+dysfunction+induced+by+severe+dry+eye+via+activation+of+the+p38+MAPK+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Limbal stem cell dysfunction induced by severe dry eye via activation of the p38 MAPK signaling pathway.</a> Am J Pathol. 193 (11), 1863-1878 (2023).</li>
<li>Jiang, G. J., Li, B. B., Fan, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timolol+induces+necroptosis%2C+apoptosis+and+senescence+concentration-dependently+in+rabbit+limbal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Timolol induces necroptosis, apoptosis and senescence concentration-dependently in rabbit limbal stem cells in vitro.</a> Life Sci. 277, 119453(2021).</li>
<li>Castro-Munozledo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Corneal+epithelial+stem+cells%2C+their+niche+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Review: Corneal epithelial stem cells, their niche and wound healing.</a> Mol Vis. 19, 1600-1613 (2013).</li>
<li>Atalay, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+limbal+stem+cell+deficiency%3A+A+critical+narrative+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models for limbal stem cell deficiency: A critical narrative literature review.</a> Ophthalmol Ther. 13 (3), 671-696 (2024).</li>
<li>Delic, N. C., Cai, J. R., Watson, S. L., Downie, L. E., Di Girolamo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+clinical+translational+relevance+of+animal+models+for+limbal+stem+cell+deficiency%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Evaluating the clinical translational relevance of animal models for limbal stem cell deficiency: A systematic review.</a> Ocul Surf. 23, 169-183 (2022).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+limbal+stem+cell+deficiency+induced+by+topical+medication+with+the+preservative+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of limbal stem cell deficiency induced by topical medication with the preservative benzalkonium chloride.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6314-6325 (2013).</li>
<li>Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+nanocomplex+based+corneal+neovascularization+theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Biomimetic nanocomplex based corneal neovascularization theranostics.</a> J Control Release. 374, 50-60 (2024).</li>
<li>Zhu, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synergistic+therapy+with+antioxidant+and+anti-VEGF%3A+Toward+its+safe+and+effective+elimination+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">A synergistic therapy with antioxidant and anti-VEGF: Toward its safe and effective elimination for corneal neovascularization.</a> Adv Healthc Mater. 13 (5), 10(2024).</li>
<li>Yu, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assembly+drug+delivery+strategy+based+on+ultra-small+nanoparticles%3A+Toward+high+drug+permeation+and+accumulation+for+CNV+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Eng+J%22%5BJournal%5D)">In vivo assembly drug delivery strategy based on ultra-small nanoparticles: Toward high drug permeation and accumulation for CNV treatment.</a> Chem Eng J. 450, 137968(2022).</li>
<li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+SU6668+pure+nanoparticle-based+eyedrops%3A+Toward+its+high+drug+accumulation+and+long-time+treatment+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">A SU6668 pure nanoparticle-based eyedrops: Toward its high drug accumulation and long-time treatment for corneal neovascularization.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 290(2024).</li>
<li>Long, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+tissue-engineered+corneal+epithelium+based+on+ultra-thin+amniotic+membrane+and+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A novel tissue-engineered corneal epithelium based on ultra-thin amniotic membrane and mesenchymal stem cells.</a> Sci Rep. 14 (1), 17407(2024).</li>
<li>Giroux, V., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metaplasia%3A+Tissue+injury+adaptation+and+a+precursor+to+the+dysplasia-cancer+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Metaplasia: Tissue injury adaptation and a precursor to the dysplasia-cancer sequence.</a> Nat Rev Cancer. 17 (10), 594-604 (2017).</li>
<li>Herfs, M., Hubert, P., Delvenne, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+metaplasia%3A+Adult+stem+cell+reprogramming+and+%28pre%29neoplastic+transformation+mediated+by+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Epithelial metaplasia: Adult stem cell reprogramming and (pre)neoplastic transformation mediated by inflammation.</a> Trends Mol Med. 15 (6), 245-253 (2009).</li>
<li>Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metaplasia+and+transdifferentiation%3A+From+pure+biology+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Metaplasia and transdifferentiation: From pure biology to the clinic.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (5), 369-378 (2007).</li>
<li>Slack, J. M., Tosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transdifferentiation+and+metaplasia--switching+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Transdifferentiation and metaplasia--switching cell types.</a> Curr Opin Genet Dev. 11 (5), 581-586 (2001).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+chronic+smoking+on+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of chronic smoking on meibomian gland dysfunction.</a> PLoS One. 11 (12), e0168763(2016).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+therapeutic+strategy+based+on+oxidant-antioxidant+balance+for+fuchs+endothelial+corneal+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Evolution of therapeutic strategy based on oxidant-antioxidant balance for fuchs endothelial corneal dystrophy.</a> Ocul Surf. 34, 247-261 (2024).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+gland+alteration+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Meibomian gland alteration in patients with systemic lupus erythematosus.</a> Lupus. 31 (4), 407-414 (2022).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathology-based+diagnosis+of+Mooren%27s+ulcer+concealed+beneath+the+pterygium+on+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Histopathology-based diagnosis of Mooren's ulcer concealed beneath the pterygium on eye.</a> J Histotechnol. 45 (4), 195-201 (2022).</li>
<li>Tseng, S. C., Hatchell, D., Tierney, N., Huang, A. J., Sun, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+specific+keratin+markers+by+rabbit+corneal%2C+conjunctival%2C+and+esophageal+epithelia+during+vitamin+A+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of specific keratin markers by rabbit corneal, conjunctival, and esophageal epithelia during vitamin A deficiency.</a> J Cell Biol. 99 (6), 2279-2286 (1984).</li>
<li>Espana, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+corneal+pannus+removed+from+patients+with+total+limbal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of corneal pannus removed from patients with total limbal stem cell deficiency.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (9), 2961-2966 (2004).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+exposure+induced+squamous+metaplasia+of+human+limbal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Air exposure induced squamous metaplasia of human limbal epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49 (1), 154-162 (2008).</li>
<li>Marino, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+basement+membrane+injury+and+regeneration+modulates+corneal+fibrosis+after+pseudomonas+corneal+ulcers+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Epithelial basement membrane injury and regeneration modulates corneal fibrosis after pseudomonas corneal ulcers in rabbits.</a> Exp Eye Res. 161, 101-105 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>קו תפרים 10-0</td><td>Alcon, Inc., ארה"ב</td><td>8065698001</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"מ טרפין קרנית</td><td>Suzhou XVI Vision Company, סין</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>20 &mu; L, 100 &mu; L, 1 מ"ל ראשי אקדח פיפטה, צלחות תרבית צלחת תרבית תאים, צינורות צנטריפוגה</td><td>גואנגג'ואו Jiete ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td>https://www.jetbiofil.com/index.html-20</td><td></td></tr>/<tr><td>-80 & deg; מקרר C</td><td>חברת צ'ינגדאו Haier, סין</td><td>https://www.haier.com/cn/</td><td></td></tr> <tr><td>מזרק 10 מ"ל</td><td>&nbsp; Zhejiang Condelai Medical Device Co., Ltd., סין</td><td>https://en.kdlchina.com/zhejiang/25.html</td><td></td></tr><tr><td>לדבוק בשקופית</td><td>חברת ShiTai</td><td>188105</td><td></td></tr><tr><td>אלכוהול אמילן</td><td>שנחאי. Macklin Biochemical, סין</td><td>http://www.macklin.cn/products/</td><td></td></tr> <tr><td>Anti-Cytokertin</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab76318</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד קרטין 12 EPR17882</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Anti-PAX6</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab195045</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות נגד הפשטה, תלושי כיסוי</td><td>ג'יאנגסו Shitai ציוד ניסיוני ושות', בע"מ. סין</td><td>https://cn.citotest.com/</td><td></td></tr> <tr><td>אוטוקלאב</td><td>היראיאמה, יפן</td><td>https://hirayama.com.cn/about/</td><td></td></tr> <tr><td>Avertin</td><td>שנחאי אלאדין טכנולוגיה ביוכימית, סין</td><td>https://www.aladdin-e.com/zh_cn/A111225.html</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>שנחאי הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td>https://www.siobp.com/web</td><td></td></tr><tr><td>חממת תנור CO2,, מגרסה קולית, צנטריפוגה</td><td>Thermo Fisher Technologies Inc., ארה"ב</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>שנחאי Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd., סין</td><td>https://www.clinx.cn/about</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים אפיתל קרנית</td><td>Suzhou XVI Vision Company, סין</td><td>53418D</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vector. בע"מ, ארה"ב</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>מים DEPC</td><td>&nbsp; Shanghai Biological Engineering Co., Ltd., China</td><td>https://www.siobp.com/web</td><td></td></tr><tr><td>קרם עיניים Dicuro (קרם עיניים ofloxacin)</td> <td>תאגיד התרופות סנטיאן, יפן</td><td>https://www.santen.com/asia</td><td></td></tr><tr><td>D-KSFM, מדיום תרבית, נוגדן כפול ו-PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc., ארה"ב</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>ED1</td><td>AbD Serote c, בריטניה</td><td>&nbsp; </td><td></td></tr><tr><td>MCA341GA איזון אלקטרוני</td><td>שנחאי Ohaus חברת ביוטכנולוגיה, סין</td><td>http://shbio.com/company</td><td></td></tr><tr><td>מארז הממברנה</td><td>Parafilm, Inc., ארה"</td>ב <td>https://www.sigmaaldrich.cn</td><td></td></tr><tr><td>רצועת בדיקת נתרן פלואורסצאין שימשה ברפואת עיניים</td><td>טיאנג'ין ג'ינגמינג פיתוח טכנולוגיה חדשה ושות 'בע"מ, סין</td><td>https://www.eworldtrade.com/c/jingmingtechnological/</td><td></td></tr><tr><td>מערכת מיקרוגרפית ניגודיות פאזה הפוכה פלואורסצנטית</td><td>TE-2000U, ניקון, יפן</td><td>https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-te2000-inverted-microscope</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה שולחנית קפואה</td><td>אפנדורף, גרמניה</td><td>https://www.eppendorf.sh.cn&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת גיליון זכוכית</td><td>שיאמן טיאנג'ינג ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>http://www.tagene.net/</td><td></td></tr> <tr><td>H-1200 עם חומר איטום DAPI</td><td>Xiamen Juin Biotechnology Co., Ltd., סין</td><td>https://www.bosonbio.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>ערכת צביעה</td><td>HE Auragene, סין</td><td>http://jushengwu.com/a048/</td><td></td></tr> <tr><td>ערכת תמיסת צבע Hematoxylin-eosin</td><td>AURAGEN, ארצות הברית</td><td>P032IH</td><td></td></tr><tr><td>איזון אלקטרוני דיוק גבוה ונמוך</td><td>Sdolis, גרמניה</td><td>https://www.solisinverters.com/global</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>שנחאי Sinopharm ריאגנטים כימיים ושות', בע"מ, סין</td><td>https://en.reagent.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>Ki-67 נוגדן</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>חנקן נוזלי</td><td>Xiamen Yidong Gas Co., Ltd., סין</td><td>https://www.china.tdk.com.cn/tdk_chn_en/tdk_xiamen/</td><td></td></tr> <tr><td>מחזיק מיקרו-יד</td><td>Suzhou XVI Vision Company, סין</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>אבקת מולטיפורמלדהיד</td><td>Sigm, אמריקה</td><td>https://www.sigmaaldrich.cn</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה בטמפרטורה רגילה 46</td><td>Eppendorf, גרמניה</td><td>https://www.thermofisher.cn</td><td></td></tr><tr><td>OCT</td><td>שנחאי Maokang ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>מערכת מיקרוגרפית ביולוגית רגילה</td><td>Eclipse 50i, ניקון, יפן</td><td>https://www.microscope.healthcare.nikon.com/zh_CN/products/upright-microscopes/eclipse-ni-series</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>שנחאי אנג'ין ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>PCR, ומנגנון הכור</td><td>Biometra Thermocycler, גרמניה</td><td>https://www.analytik-jena.com/products/life-science/pcr-qpcr-thermal-cycler/thermal-cycler-pcr/biometra-tone-series/</td><td></td></tr> <tr><td>פיפטות של מפרטים שונים</td><td>חברת אפנדורף, גרמניה</td><td>https://www.eppendorf.com/cn-zh/</td><td></td></tr> <tr><td>פריימרים עבור Rt-PCR</td><td>שנחאי ביו-טק ושות', בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Promeaine hydrochloride 0.5% טיפות עיניים</td><td>Alcon, Inc., ארה"ב</td><td>https://www.alcon.com/about-us</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן PMN עכברוש</td><td>פיצג'רלד, ארצות הברית</td><td>20R-PR020</td><td></td></tr><tr><td>בזמן אמת פלואורסצנטי כמותי PCR</td><td>יישומי ביוסיסטמס,&nbsp; ערכת</td> תמלול הפוך <td>https://www.thermofisher.cn</td><td></td>ארצות הברית</tr><tr><td></td><td>TAKARA, יפן</td><td>https://www.takarabiomed.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>מנורת חריץ</td><td>TOPCON, יפן</td><td>https://topconchina.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>מלקחיים חלקים</td><td>Suzhou XVI Vision Company, סין</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>קופסת דגימה</td><td>Lambolid (Fuzhou) Biotechnology Co., Ltd., סין</td><td>http://chuangdianbio.com/</td><td></td></tr> <tr><td>ספסל Superclean</td><td>New Plus Pi Art High Technology Company Limited, סינגפור</td><td>https://www.hi-p.com/</td><td></td></tr> <tr><td>מלקחיים עם שיניים</td><td>Suzhou XVI Vision Company, סין</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>טיפות עיניים Toppicamide (Medol)</td><td>Alcon, Inc., ארה"ב</td><td>https://www.alcon.com/about-us</td><td></td></tr><tr><td>חלבון קורט חומצת גרעין בודק הריכוז</td><td>Thermo Fisher Technologies Inc., ארה"ב</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen ארצות הברית</td><td>https://www.fishersci.com/us/en/brands/IIAM0WMR/invitrogen.html</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss, עם מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Carl ZEIS, גרמניה</td><td>https://www.zeiss.com/corporate/en/about-zeiss.html</td><td></td></tr></tbody></table>

ביסוס מודל דלקת קרנית חמורה בחולדות המבוסס על גרידת אפיתל בקרנית בשילוב תפרי קרנית

Establishing a Severe Corneal Inflammation Model in Rats Based on Corneal Epithelium Curettage Combined with Corneal Sutures

כפי שמוצג באיור 1A, באמצעות תצפית עם מנורת חריץ, מצאנו שהריפוי של אפיתל הקרנית נפגע. בנסיבות רגילות, אפיתל הקרנית המרכזי היה נרפא לחלוטין תוך 24-48 שעות לאחר ההסרה, אך בכריתת האפיתל המרכזי של הקרנית בשילוב עם מודל תפרים, כלי דם חדשים המשיכו להתקיים. ביום השלישי לאחר הקמת המודל, נצפו בצקת לימבלית משמעותית בקרנית וניאו-וסקולריזציה, עם סימנים אופייניים למחסור בתאי גזע לימביים בקרנית שהופיעו באופן מקומי. עם הזמן, ביום השביעי, הריפוי עדיין לא הושלם. מדד הדלקת בקרנית הוערך באמצעות גודש רירי, בצקת קרנית פרה-מרכזית ובצקת מרכזית בקרנית. בצקת בקרנית החמירה בהדרגה, ודלקת הקרנית (איור 1A) המשיכה להידרדר. בנוסף, ניאו-וסקולריזציה של הקרנית היא אינדיקטור לדלקת. עם התקדמות הדלקת, ניאו-וסקולריזציה של הקרנית (איור 1B) ומדד הדלקת (איור 1C) הראו עלייה מתמשכת.
ביצענו הקפאה על רקמות העיניים 7 ימים לאחר יצירת הדגם. צביעת המטוקסילין ואאוזין (איור 2A) הראתה עיבוי של האפיתל בלימבוס ובקרנית המרכזית, כאשר סידור האפיתל איבד את המורפולוגיה הרגילה שלו, מה שמעיד על היפרפלזיה לא טיפוסית. סטרומה הקרנית נראתה בצקתית, עם חדירה משמעותית של תאים דלקתיים. באמצעות צביעה אימונופלואורסצנטית PMN ו-ED1 (איור 2B), נצפתה עלייה ניכרת בחדירה של נויטרופילים ומקרופאגים. המחקר העריך גורמים דלקתיים באמצעות IL-1β (איור 2C) ו-MIP-1α (איור 2D), ומצא כי IL-1β הגיע לשיא ביום השלישי וירד בהדרגה לאחר מכן, בעוד ש-MIP-1α עלה ברציפות לאורך זמן.
דלקת כרונית מובילה בדרך כלל לסדרה של חוסרים בתאי גזע לימבליים, כגון הפחתת ויסות Pax6, ביטוי מופחת של Krt12 ומטפלזיה קשקשית של אפיתל הקרנית. כדי לוודא אם המודל שפותח במחקר זה יכול לגרום לשינויים אלה בפנוטיפ האפיתל של הקרנית, בוצעה צביעה אימונופלואורסצנטית עבור Krt12 (איור 3A) ו-Pax6 (איור 3B) על אפיתל הקרנית. ביטוי Krt12 ירד עם דלקת ממושכת, כאשר רק תאים בודדים חיוביים ל-Krt12 נצפו ביום 7, וביטוי Pax6 הופחת משמעותית באפיתל הקרנית. ברמת ה-mRNA, רמות הביטוי של סמני אפיתל קרנית תקינים Krt12 (איור 3C) ו-Pax6 (איור 3D) הופחתו משמעותית ביום 7. עם זאת, רמות הביטוי של סמני מטפלזיה קשקשית Krt10 (איור 3E) ו-Sprr1b (איור 3F) עלו באופן משמעותי ביום 7.
השתמשנו בסמן ההתפשטות Ki67 כדי לצבוע את אפיתל הקרנית, והתוצאות הראו ירידה משמעותית במספר תאי האפיתל של הקרנית החיוביים ל-Ki67 ביום השביעי (איור 4A). הסטטוס של תאי גזע אפיתל בקרנית הוערך באמצעות הסמן הספציפי לתאי גזע לימבליים בקרנית ABCG2 (איור 4B) וסמן תאי האב האפיתל P63 (איור 4C). רמות ABCG2 ו-P63 היו נמוכות משמעותית מאלו בקבוצה הרגילה. בנוסף, השתמשנו בתקן הזהב לתאי גזע, שיטת התרבית המשובטת כדי להעריך שינויים בתאי גזע לימבליים בקרנית במהלך תהליך זה. ראינו שקצב ההיווצרות המשובטת של תאי גזע לימבליים בקרנית (איור 4D) ירד ביום השלישי וירד באופן משמעותי ביום השביעי, כאשר השטח הממוצע של שיבוטים נעשה קטן יותר ורק כמה הולוקלונים נראים ביום השביעי. יעילות יצירת המושבה (CFE) הושגה על ידי ספירת שיבוטי התאים הנראים בשדה המיקרוסקופ של צלחת התרבית. ה-CFE (איור 4E) הצביע על ירידה הדרגתית במספר תאי הגזע הלימבליים בקרנית בתנאים דלקתיים. זה מצביע על כך שדלקת חמורה במודל זה מובילה לדלדול תאי גזע אפיתל לימבליים בקרנית, ותהליך זה אינו גורם לטרנספורמציה פנוטיפית של תאי הגזע הלימבליים בקרנית אלא מציג בעיות בהתמיינות או חידוש עצמי.
מודל הדלקת ששימש במחקר זה הביא לשינויים בקרנית האופייניים ל-LSCD, כולל חדירה נרחבת של תאים דלקתיים לתוך הקרנית, דיספלזיה של אפיתל הקרנית, ושיבוש או ירידה בביטוי של Pax6 ו-Krt12 בפנוטיפ האפיתל הרגיל של הקרנית. בנוסף, חלה עלייה משמעותית בביטוי Krt10 mRNA. לסיכום, מודל ניסיוני זה מתאים היטב לחקר ההתמיינות החריגה של תאי גזע אפיתל בקרנית הנגרמת על ידי דלקת.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig1v2.jpg"> 
איור 1: הקמת מודל הדלקת. כדי לחקור את ההשפעות של דלקת חמורה על תאי גזע אפיתל בקרנית, הוקם מודל דלקת חמורה. (A) אחרי השראת המודל, הקרנית נצפתה באמצעות צילום מנורת חריץ. שלושה ימים לאחר המודל, לימבוס קרנית החולדה היה בצקתי חמור, עם ניאו-וסקולריזציה ברורה והיפרפלזיה מקומית, שהם סימנים אופייניים למחסור בתאי גזע לימבליים בקרנית. ביום השביעי, בצקת הקרנית החמירה בהדרגה, והניאו-וסקולריזציה המשיכה לגדול. עם התקדמות הדלקת, (B) ניאו-וסקולריזציה של הקרנית ו-(C) מדד הדלקת הראו עלייה מתמשכת. *p &lt; 0.05, ****P &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig02.jpg"> 
איור 2: התגובה הדלקתית לאחר המודל. התגובה הדלקתית הנגרמת על ידי המודל בקרנית הוערכה. (A) צביעת המטוקסילין ואאוזין של גלגל העין הראתה שבמהלך התהליך הדלקתי, גם האפיתל הלימבלי וגם האפיתל המרכזי של הקרנית התעבו, וסידור האפיתל של הקרנית איבד את המורפולוגיה הרגילה שלו, והראה סימנים של היפרפלזיה לא טיפוסית. (B) סמן המקרופאגים ED1 (ירוק) וסמן הנויטרופילים PMN (אדום) גדלו באופן משמעותי. RT-qPCR הראה עלייה משמעותית בגורמי דלקת אפיתל בקרנית (C) IL-1β ו-(D) MIP-1α. כחול מייצג צביעה גרעינית עם DAPI, סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר; עמ' &lt; 0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig03v2.jpg"> 
איור 3: שינויים פנוטיפיים של תאים בתנאים דלקתיים. צביעה חיסונית עבור (A, אדום) KRT12 באפיתל הלימבלי ו-(B) PAX6. (C) רמות ביטוי ה-mRNA של KRT12 מראות ירידה משמעותית ככל שהדלקת מתקדמת. (D) ביטוי mRNA PAX6 חושף פיזור חריג וירידה ניכרת באפיתל הלימבלי בתנאים דלקתיים. לעומת זאת, ביטוי mRNA של (E) Krt10 וסמן האפיתל הקרנית המובחן באופן חריג (F) Sprr1b גדל באופן משמעותי במהלך דלקת. כחול מייצג צביעה גרעינית עם DAPI, סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר; **p &lt; 0.01, ***p &lt; 0.001, ****p &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig04.jpg"> 
איור 4: שינויים בתאי גזע לימבליים במצב דלקתי. תמונות אימונופלואורסצנטיות של (A, אדום) Ki67 ממחישות שינויים בתאים מתרבים לאחר השראת דלקת. ביטוי ה-mRNA של סמן תאי הגזע (B) ABCG2 מופחת משמעותית. סמן תאי האב (C) p63 מתבטא גם הוא. (D) תמונות צביעת סגול קריסטל ו-(E) CFE מראות ירידה במספר תאי הגזע הלימבליים בתנאים דלקתיים. כחול מציין גרעינים מוכתמים ב-DAPI; סרגל קנה המידה הוא 50 מיקרומטר; *p &lt; 0.05, **p &lt; 0.01, ***P &lt; 0.001, ****P &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">שם פריימר</td>
			<td colspan="3">רצף פריימר</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">TNF-a</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-TCAGTTCCATGGCCCAGAC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-GTTGTCTTTGAGATCCATCCATT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">IL-1β</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-CCTCGTCCTAAGTCACTCGC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-GGCTGGTTCCACTAGGCTTT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">פקס6</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-GTGTTCAGTGCAGAGCCTTC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-TTCACCGTTGCTGTTCACTG-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">צרפת</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-AGCTAACGCGGAACTGGAAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-CTCTCCGCTCTCTTGGTGAGGT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">צרפת</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-TCCGGGATCTGGAAGAGTCAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-TTGGGTAAGCTTTGCTAAGTGGAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">ספר1ב</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-CCATCCCAAGGCACCTGAG-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-TGCTGGTATGGTGATGGAGT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">אקטין</td>
			<td>קדימה</td>
			<td colspan="3">5'-CACCCGGAGTACAACCTTC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>הפוך</td>
			<td colspan="3">5'-CCCATACCACACACACC-3'</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: רצף הפריימרים המשמשים ל-RT-PCR כמותי.

Corneal inflammation, especially severe corneal inflammation, plays a significant role in the development of corneal limbal stem cell dysfunction. ...

establishing-severe-corneal-inflammation-model-rats-based-on-corneal

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מתאר פרוטוקול להגדרת מודל ex vivo לקרטיטיס חיידקית באמצעות כפתור corneoscleral שנותח מהעין החזירית. חיידקים מחוסנים חוצים את חתכי אפיתל הקרנית כדי לפלוש לסטרומה הבסיסית וליצור זיהום בתוך רקמות הקרנית המחקה את זיהום in vivo.

מודל הקרנית Porcine Ex vivo של קרטיטיס חיידקית: טכניקה ליצירת זיהום חיידקי בתאי אפיתל בקרנית

תרבות עיקרית של תאי אנדותל קרניים שור שמשה לחקור את המנגנון של מעבר אנדותל-mesenchymal הקרני. יתר על כן, מודל cryoinjury האנדותל עכברוש הקרני שמש להפגין מעבר אנדותל-mesenchymal קרני in vivo.

במבחנה מודלים Vivo ללמוד קרנית האנדותל-mesenchymal מעבר

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי לגרום של שחיקה השטח עינית של העכבר, בצע את לאחר מכן תהליך ריפוי הפצע. הפרוטוקול מנצל burr עינית חלקית להסרת האפיתל פני השטח של העין בעכברים מרדימים.

אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

פרוטוקול עבור אקסית vivo איברים הקרנית תרבות מודל שימושי עבור לימודי ריפוי הפצע מתואר. מערכת מודל זה יכול לשמש כדי להעריך את ההשפעות של סוכני כדי לקדם ריפוי משובי או רעילות התרופה סביבה מאורגנת multicellular תלת-ממד.

Ex-Vivo איברים הקרנית מודל תרבות עבור ריפוי פצעים מחקרים

הגישה הרומן מוצגת כדי לגרום כרונית מחלת עיניים יבשות בארנבים על ידי הסרת בניתוח כל בלוטות מסלולית לקטמאל. שיטה זו, ברורה מאלה שדווחו בעבר, מייצרת מודל יציבה, מובחנות של עין יבשה לקויה מימית מתאים היטב לחקור את הפיזיולוגיה של הקרע ו פתופסיולוגיה therapeutics עינית.

הקמת מודל העין יבש קשה באמצעות השלמת דקרייוקטומיה בארנבונים

כאן מתואר פרוטוקול ליצירת פצע שחיקה מרכזי באפיתל הקרנית בעכבר באמצעות טרפין וספוד של מועדון גולף קהה. מודל זה של ריפוי פצעי הקרנית ניתן לשחזור רב ומשמש כיום להערכת ריפוי פצעי בקרנית שנפגעו בהקשר של מחלות.

מודל שחיקה אפיתליאלית לחקר ריפוי פצעי הקרנית

כאן, מודלים של בעלי חיים המבוססים על עכבר וארנב מפותחים עבור פגיעה מכנית וכימית של אפיתל הקרנית כדי לסנן טיפולים חדשים ואת המנגנון הבסיסי.

מודלים של בעלי חיים של Ex Vivo ו-In Vivo לפציעות מכניות וכימיות של אפיתל הקרנית

פרוטוקול זה מתאר שיטה לגרימת פגיעה אלקלית מדויקת וניתנת לשחזור בקרנית ובגפיים במודל עכבר. לפרוטוקול יש יתרון מכיוון שהוא מאפשר פגיעה מפוזרת באופן שווה בקרנית ובלימבוס של עכבר מעוקל מאוד.

השראת פציעה אלקלית בקרנית ובגפיים בטכניקת אגרוף-טרפין במודל עכבר

כאן, אנו מציעים שלוש שיטות שונות לפגיעה בסיבי החישה המעצבבים את הקרנית. שיטות אלה מקלות על חקר התחדשות האקסון בעכברים. שלוש שיטות אלה, הניתנות להתאמה למודלים אחרים של בעלי חיים, אידיאליות לחקר הפיזיולוגיה וההתחדשות של עצבוב הקרנית.

שלוש אסטרטגיות לגרימת קראטיטיס נוירוטרופית והתחדשות עצבית בקרנית מורין

מוצג פרוטוקול שניתן לשחזור להכנה, העשרה ויישום של הידרוג'ל במיקום באור כחול– קישור צולב של ג'לטין–ריבופלבין לתיקון פצעי סטרומל בקרנית בארנבים, כולל שלבים פרוצדורליים לטיפול כירורגי, טרסורפאה חלקית וטיפול לאחר הניתוח.

ייצור ויישום כירורגי של הידרוג'לים ג'לטין–ריבופלבין מועשרים עם קישור פוטופולינקרי לתיקון פצעי קרנית בארנבים

למדו כיצד לבסס מודל דלקת קרנית חמורה בחולדות באמצעות גרידת אפיתל קרנית בשילוב תפרי קרנית. שיטה זו מאפשרת חקר השפעות הדלקת על תאי גזע לימבליים ללא פגיעה בהם.

ביסוס מודל דלקת קרנית חמורה בחולדות המבוסס על גרידת אפיתל בקרנית בשילוב תפרי קרנית

גלה סרטונים נוספים