Name: הפלת גנים יעילה בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המסופקת על ידי נגיף הקשור לאדנו Serotype 8 (AAV8) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: למדו שיטת הפלת גנים בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של AAV8 המספק RNA סיכת ראש קטנה. השיטה מפשטת את התהליך ומפחיתה סיבוכים בהשוואה להזרקה בוריד הפורטל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הזרקת AAV8-shRNA תוך-טחולית להפלת גנים יעילה ובטוחה בכבד

<ol><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenome-wide+analysis+of+aging+effects+on+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Epigenome-wide analysis of aging effects on liver regeneration.</a> BMC Biol. 21 (1), 30(2023).</li>
<li>Jindal, A., Jagdish, R. K., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+regeneration+in+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Exp+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatic regeneration in cirrhosis.</a> J Clin Exp Hepatol. 12 (2), 603-616 (2022).</li>
<li>Meng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+deletion+reveals+an+essential+mechanism+that+maintains+the+genomic+stability+of+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin deletion reveals an essential mechanism that maintains the genomic stability of stem and progenitor cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (28), 11415-11420 (2013).</li>
<li>Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aav-mediated+liver-directed+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Aav-mediated liver-directed gene therapy.</a> Methods Mol Biol. 807, 141-157 (2011).</li>
<li>Tenney, R. M., Bell, C. L., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV8+capsid+variable+regions+at+the+two-fold+symmetry+axis+contribute+to+high+liver+transduction+by+mediating+nuclear+entry+and+capsid+uncoating%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">AAV8 capsid variable regions at the two-fold symmetry axis contribute to high liver transduction by mediating nuclear entry and capsid uncoating.</a> Virology. 454-455, 227-236 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y., Mckay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nucleolar+mechanism+controlling+cell+proliferation+in+stem+cells+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A nucleolar mechanism controlling cell proliferation in stem cells and cancer cells.</a> Genes Dev. 16 (23), 2991-3003 (2002).</li>
<li>Tsai, R. Y., Meng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin%3A+A+latecomer+with+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin: A latecomer with new tricks.</a> Int J Biochem Cell Biol. 41 (11), 2122-2124 (2009).</li>
<li>Zhu, Q., Yasumoto, H., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+delays+cellular+senescence+and+negatively+regulates+trf1+protein+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin delays cellular senescence and negatively regulates trf1 protein stability.</a> Mol Cell Biol. 26 (24), 9279-9290 (2006).</li>
<li>Qu, J., Bishop, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+maintains+self-renewal+of+embryonic+stem+cells+and+promotes+reprogramming+of+somatic+cells+to+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin maintains self-renewal of embryonic stem cells and promotes reprogramming of somatic cells to pluripotency.</a> J Cell Biol. 197 (6), 731-745 (2012).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Li, Y., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-initiating+function+of+nucleostemin-enriched+mammary+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor-initiating function of nucleostemin-enriched mammary tumor cells.</a> Cancer Res. 70 (22), 9444-9452 (2010).</li>
<li>Maki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+accumulation+of+nucleostemin+in+nucleolus+during+newt+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Rapid accumulation of nucleostemin in nucleolus during newt regeneration.</a> Dev Dyn. 236 (4), 941-950 (2007).</li>
<li>Siddiqi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+induction+of+nucleostemin+in+response+to+postnatal+growth+and+pathological+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Myocardial induction of nucleostemin in response to postnatal growth and pathological challenge.</a> Circ Res. 103 (1), 89-97 (2008).</li>
<li>Lin, T., Ibrahim, W., Peng, C. -Y., Finegold, M. J., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+of+nucleostemin+in+maintaining+the+genome+integrity+of+dividing+hepatocytes+during+mouse+liver+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A novel role of nucleostemin in maintaining the genome integrity of dividing hepatocytes during mouse liver development and regeneration.</a> Hepatology. 58 (6), 2176-2187 (2013).</li>
<li>Shugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+in+injury-induced+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin in injury-induced liver regeneration.</a> Stem Cells Dev. 21 (16), 3044-3054 (2012).</li>
<li>Lin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+reveals+a+dichotomous+nature+of+genome+maintenance+in+mammary+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin reveals a dichotomous nature of genome maintenance in mammary tumor progression.</a> Oncogene. 38 (20), 3919-3931 (2019).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+modulates+outcomes+of+hepatocellular+carcinoma+via+a+tumor+adaptive+mechanism+to+genomic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin modulates outcomes of hepatocellular carcinoma via a tumor adaptive mechanism to genomic stress.</a> Mol Cancer Res. 18 (5), 723-734 (2020).</li>
<li>Crawford, M., Liu, X., Cheng, Y. L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+upregulation+and+stat3+activation+as+early+events+in+oral+epithelial+dysplasia+progression+to+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin upregulation and stat3 activation as early events in oral epithelial dysplasia progression to squamous cell carcinoma.</a> Neoplasia. 23 (12), 1289-1299 (2021).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Wu, L. J., Pederson, T., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+and+gnl3l+exercise+distinct+functions+in+genome+protection+and+ribosome+synthesis%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin and gnl3l exercise distinct functions in genome protection and ribosome synthesis, respectively.</a> J Cell Sci. 127 (10), 2302-2312 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+self-renewal+against+genome+preservation+in+stem+cells%3A+How+do+they+manage+to+have+the+cake+and+eat+it+too%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Balancing self-renewal against genome preservation in stem cells: How do they manage to have the cake and eat it too.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (9), 1803-1823 (2016).</li>
<li>Meng, L., Hsu, J. K., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gnl3l+depletion+destabilizes+mdm2+and+induces+p53-dependent+G2%2Fm+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gnl3l depletion destabilizes mdm2 and induces p53-dependent G2/m arrest.</a> Oncogene. 30 (14), 1716-1726 (2011).</li>
<li>Huang, G., Meng, L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+configures+the+G2%2Fm+arrest+response+of+nucleostemin-deficient+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">P53 configures the G2/m arrest response of nucleostemin-deficient cells.</a> Cell Death Discov. 1, e15060(2015).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Wu, L. J., Trinh, B., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IMPDH+inhibition+decreases+TERT+expression+and+synergizes+the+cytotoxic+effect+of+chemotherapeutic+agents+in+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">IMPDH inhibition decreases TERT expression and synergizes the cytotoxic effect of chemotherapeutic agents in glioblastoma cells.</a> Int J Mol Sci. 25 (11), 5992(2024).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Li, F., Timchenko, N., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+a+stem+cell+factor+nucleostemin+in+liver+regeneration+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of a stem cell factor nucleostemin in liver regeneration and aging.</a> PLoS One. 19 (9), e0310219(2024).</li>
<li>Mayra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+AAV9-shRNA+inhibits+target+expression+in+neonatal+skeletal+and+cardiac+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal AAV9-shRNA inhibits target expression in neonatal skeletal and cardiac muscles.</a> Biochem Biophys Res Commun. 405 (2), 204-209 (2011).</li>
<li>Cohen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus-mediated+shRNA+knockdown+of+prodynorphin+in+the+rat+nucleus+accumbens+attenuates+depression-like+behavior+and+cocaine+locomotor+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Virus-mediated shRNA knockdown of prodynorphin in the rat nucleus accumbens attenuates depression-like behavior and cocaine locomotor sensitization.</a> PLoS One. 9 (5), e97216(2014).</li>
<li>Jeon, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topbp1+deficiency+causes+early+embryonic+lethality+and+induces+cellular+senescence+in+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Topbp1 deficiency causes early embryonic lethality and induces cellular senescence in primary cells.</a> J Biol Chem. 286 (7), 5414-5422 (2011).</li>
<li>Smith, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+expression+of+therapeutic+plasma+levels+of+human+factor+IX+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated expression of therapeutic plasma levels of human factor IX in mice.</a> Nat Genet. 5 (4), 397-402 (1993).</li>
<li>Nakai, H., Iwaki, Y., Kay, M. A., Couto, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+recombinant+adeno-associated+virus+vector-cellular+DNA+junctions+from+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of recombinant adeno-associated virus vector-cellular DNA junctions from mouse liver.</a> J Virol. 73 (7), 5438-5447 (1999).</li>
<li>Jung, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viral+vector-mediated+gene+transfer+results+in+long-term+enzymatic+and+functional+correction+in+multiple+organs+of+Fabry+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viral vector-mediated gene transfer results in long-term enzymatic and functional correction in multiple organs of Fabry mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (5), 2676-2681 (2001).</li>
<li>Hurford, R. K., Dranoff, G., Mulligan, R. C., Tepper, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+metastatic+cancer+by+in+vivo+retroviral+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of metastatic cancer by in vivo retroviral gene targeting.</a> Nat Genet. 10 (4), 430-435 (1995).</li>
<li>Sarkar, R., Xiao, W., Kazazian, H. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+adeno-associated+virus+%28AAV%29-murine+factor+viii+vector+partially+corrects+the+hemophilia+a+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">A single adeno-associated virus (AAV)-murine factor viii vector partially corrects the hemophilia a phenotype.</a> J Thromb Haemost. 1 (2), 220-226 (2003).</li>
<li>Czekaj, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+intrasplenic+administration+of+human+amniotic+epithelial+cells+in+order+to+perform+safe+and+effective+cell-based+therapy+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for intrasplenic administration of human amniotic epithelial cells in order to perform safe and effective cell-based therapy for liver diseases.</a> Stem Cell Rev Rep. 20 (6), 1599-1617 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>יחידות צנטריפוגה מסנן Amicon</td><td>MilliporeSigma UFC9100</td><td></td><td>אולטרה-סינון מהיר</td></tr><tr><td>AV5-siRNA-GFP&nbsp;</td><td>אדג'ן&nbsp;</td><td>#124972</td><td>פלסמיד</td></tr><tr><td>מוכשר DH5 ואלפא; חיידקים&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>#18265-017</td><td>זן מוכשר כימית לשיבוט&nbsp;</td></tr><tr><td>HpaI&nbsp;</td><td>ניו אינגלנד Biolabs</td><td>R0105</td><td>אנזים הגבלה</td></tr><tr><td>iMFectin transfection reagnt&nbsp;</td><td>GenDepot</td><td>I7100-101</td><td></td></tr><tr><td>M-MLV טרנסקריפטאז הפוך&nbsp;</td><td>Promega</td><td>M1708</td><td>DNA פולימראז תלוי RNA&nbsp;</td></tr><tr><td>מערכת זיהוי PCR בזמן אמת בצבע יחיד MyiQ&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>BUN9740RAD</td><td>qRT-PCR</td></tr><tr><td>ערכה נטולת אנדוטוקסין אומגה&nbsp;</td><td>Bioteck</td><td>D6915-03</td><td>הכנת מידי DNA פלסמיד&nbsp;</td></tr><tr><td>הקסמרים אקראיים&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>48190-011</td><td></td></tr><tr><td>סופרמיקס SYBR ריאגנט ירוק&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1708882</td><td>יישומי PCR בזמן אמת</td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>Promega</td><td>M1801</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>15596-018</td><td>בידוד של אנזים הגבלה RNA כולל באיכות גבוהה</td></tr><tr><td>XhoI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0146</td><td></td></tr></tbody></table>

הפלת גנים יעילה בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של rna סיכת ראש קטנה המסופקת על ידי נגיף הקשור לאדנו serotype 8 (aav8)

Efficient Gene Knockdown in the Liver via Intrasplenic Injection of Adeno-Associated Virus Serotype 8 (AAV8)-Delivered Small Hairpin RNA

יעילות הגן KD בכבד על ידי תוך-טחול לעומת הזרקת וריד פורטל של AAV8-shRNA מלאי נגיף AAV8 דולל לריכוז עבודה של 2E+12 עותקי גנום (gc) למיליליטר (gc/mL). לעכברים בודדים הוזרקו 1E+11 gc של AAV8-shNS1 או AAV8-shScr (50 מיקרוליטר) באמצעות הזרקה תוך טחולית או וריד פורטלי. שבועיים לאחר ההזרקה, נאספו רקמות כבד לבידוד RNA, סינתזת cDNA גדיל אחד וניתוח qPCR. התוצאות הראו כי שיטת ההזרקה התוך-טחולית השיגה סטטיסטית את אותה יעילות NSKD (20.8% ± 4.4%) כמו שיטת הזרקת וריד הפורטל (16.3% ± 3.6%) תוך שימוש ב-Rsp3 ו-Rplp0 כהתייחסות פנימית (איור 2). חשוב מכך, ניתן היה להשלים את הליך ההזרקה התוך-טחולית תוך 15 דקות כמעט ללא מוות שנגרם מההליך, בעוד ששיטת הזרקת וריד הפורטל דרשה בדרך כלל 25-30 דקות עם הרבה תרגול והייתה קשורה לשיעור תמותה גבוה יותר (שיעור תמותה של ~25%-30%).
תגובה דלקתית ברקמות רקמות כבד נאספו מעכברים שקיבלו הזרקה לווריד הפורטל או הזרקה תוך-טחולית של AAV8-shScr (איור 3A) או AAV8-shNS1 (איור 3B), והושוו לזו של עכברי ביקורת (איור 3C). תגובות דלקתיות נבדקו על ידי צביעת H&amp;E4. התוצאות הראו כי לא AAV8-shScr ולא AAV8-shNS1 עוררו תגובות דלקתיות בולטות בפרנכימת הכבד בהשוואה ל-PBS שהוזרקו בשיטת הזרקה תוך-טחולית (Spl) או הזרקת וריד פורטלי (PV) (איור 3A-C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig01.jpg"> 
איור 1: איורים של עיצוב AAV8-shRNA והליך ההזרקה התוך-טחולית. (A) (למעלה) תרשים של הפלסמיד AV5-siRNA-GFP שנועד ליצור סרוטיפ 8 של וירוס הקשור לאדנו-(AAV8) עבור ניסויי נוקדאון in vivo . AV5-siRNA-GFP מכיל רצף shRNA מונע על ידי מקדם CMV ו-EGFP. (למטה) מבני RNAi סיכות ראש קטנות המיועדים לטיפול ברצפי 21 נוקלאוטידים על עכבר NS (shNS1) או רצף מקושקש של 21 נוקלאוטידים (Scr). (B) דיאגרמת זרימת עבודה סכמטית בהליך הזרקת AAV8 תוך טחול. (ג) תצוגות מדורגות של ההליך הכירורגי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig02.jpg"> 
איור 2: היעילות של נוקדאון בתיווך AAV8-shRNA של נוקלאוסטמין (NS) בכבד באמצעות הזרקת וריד תוך טחול לעומת וריד פורטלי. מבחני qRT-PCR של ביטוי NS בדגימות כבד שנלקחו מעכברים שבועיים לאחר קבלת הזרקה תוך-טחולית (Spl) או וריד פורטלי (PV) של AAV8-shScr או AAV8-shNS1 (1E+11 gc). גרפים מראים תוצאות בהתייחס לשני בקרות פנימיות, Rps3 (A) ו-Rplp0 (B). עמודות מראות ממוצע ± SEM של ארבעה שכפולים ביולוגיים, כל אחד עם שלוש חזרות טכניות PCR; *עמ' &lt; 0.01; **עמ' &lt; 0.001; עמ' &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig03.jpg"> 
איור 3: היסטולוגיה של רקמות כבד לאחר הזרקה תוך טחולית או הזרקת וריד פורטלי של PBS, AAV8-shScr או AAV8-shNS1. צביעת H&amp;E של רקמות הכבד שבועיים לאחר הזרקה תוך-טחולית (Spl) או הזרקת וריד פורטל (PV) של AAV8-shScr (A) או AAV8-shNS1 (B), בהשוואה לזו של דגימות ביקורת שאינן מוזרקות AAV8 (C). פסי קנה מידה: 100 מיקרומטר. החלוניות הימניות מציגות תצוגות מוגדלות של הכניסות בחלוניות השמאליות. מוטות קנה מידה: 50 מיקרומטר. שישה עד תשעה חלקים משני בעלי חיים שונים נבדקו בכל קבוצה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

הפלת גנים יעילה בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המסופקת על ידי נגיף הקשור לאדנו Serotype 8 (AAV8)

The liver is a major organ that performs essential metabolic functions. Developing an efficient and safe method to knock down gene expression in the liver ...

efficient-gene-knockdown-liver-via-intrasplenic-injection-adeno

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

במאמר זה, אנו מתארים את הזיהוי של adeno הקשורים וירוס סרוטיפ 3 (AAV3) כווקטור היעילה ביותר להכוונת האדם תאים סרטניים בכבד.

יעילות גבוהה התמרה של תאים סרטניים בכבד על ידי סרוטיפ Adeno-Associated וירוס רקומביננטי 3 וקטורים

אנחנו מדגימים את הטכניקה הבסיסית מולקולרי מהנדס ולהתפתח סינתטיים Adeno הקשורים נגיפיים (AAV) טיפול וקטורים גנים באמצעות DNA המשפחה גרירת רגליים. יתר על כן, אנו מספקים הנחיות כלליות ודוגמאות נציג לבחירת וניתוח של capsids chimeric בודדים בעלי תכונות משופרות על תאים היעד בתרבות או בעכברים.

הנדסה האבולוציה של הנגיף Adeno הקשורים סינתטי (AAV) בריפוי גנטי באמצעות וקטור משפחת ה-DNA של גרירת רגליים

התערבות RNA (RNAi) הוא בעל יתרונות רבים על פני בנוקאאוט הגן נעשה שימוש נרחב ככלי במחקרים גנים תפקודיים. המצאת ה-DNA וקטור מבוססי RNAi הטכנולוגיה הפכה לטווח ארוך הגן מושרה מציאה אפשרי, גם הגדילה את הכדאיות של השתקת...

וקטור מבוסס DNA התערבות RNA ללמוד לתפקד גנים סרטן

בסרטון זה, אנו מדגימים שיטה לביצוע התמרה של וקטורים לנטי-ויראליים של shRNA כדי להשיג קווי תאים יציבים בתאי גזע ותאי אב המטופויטיים אימורטליים (iHSPCs).

הפלה גנטית בתיווך RNA קצר ב- iHSPCs In Vitro: מערכת ביטוי shRNA מבוססת לנטיוירוס העוברת ל- iHSPCs להפלה של ביטוי גנים ספציפי

בסרטון זה, אנו מדגימים העברת גנים רקומביננטיים מבוססי וירוס הקשורים לאדנו בגור העכבר. שיטה זו מסייעת בחקר ביטוי גנים בתאי היעד.

Recombinant Adeno Associated Virus Based Gene Delivery: טכניקה להעברת טרנסגנים וביטוי ספציפי ללב במודל מכרסם

בכתב יד זה, מתוארת שיטה להכנת וקטורים רקומביננטיים של נגיף 9 הקשור לאדנו-9 (rAAV9) למניפולציה של ביטוי גנים בלב העכבר.

גני הכנת rAAV9 כדי overexpress או מציאת עכבר לבבות

כאן נתאר את המסירה של microRNA באמצעות serotype של וירוס רקומביננטי adeno-הקשורים 9 במודל של עכברים של מחלה עצב-שריר. ניהול היקפיים יחידה בעכברים כתוצאה miRNA מתמשכת ביטוי שריר, מוטורי לגלוקוז, מתן הזדמנות טיפולית פוטנציאל vivo בתוךותפקוד miRNA של המחקר.

משלוח מערכתית של MicroRNA באמצעות וירוס רקומביננטי Adeno-הקשורים Serotype 9 לטיפול מחלות נוירומוסקולריות אצל מכרסמים

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים מסרטן המעי הגס (CRC) יוצרת גרורות כבד עשירות בסטרומה. מודל עכבר זה של גרורות כבד CRC מייצג כלי שימושי לחקר אינטראקציות בין גידול לסטרומה ולפיתוח טיפולים חדשניים המכוונים לסטרומה כגון טיפולים גנטיים בתיווך וירוסים הקשורים לאדנו.

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים לסרטן המעי הגס לחקר סטרומה גרורות בכבד

כאן אנו מפרטים פרוטוקול אופטימלי להזרקת וריד זנב רוחבי של עכבר לניהול מערכתי של וירוס הקשור לאדנו (AAV) בעכברים בוגרים. בנוסף, אנו מתארים פרוטוקולים של בדיקות נפוצות להערכת התמרה AAV.

אספקה עקבית של וירוס הקשור לאדנו באמצעות הזרקת וריד זנב לרוחב בעכברים בוגרים

דוח זה מפרט את שיטת ההזרקה המקומית של וקטורי AAV דרך אגן הכליה להעברת גנים יעילה ובטוחה לכליות העכבר.

העברת גנים יעילה ובטוחה לכליות העכבר באמצעות הזרקת אגן כליה רטרוגרדית איטית של וקטורים של וירוסים הקשורים לאדנו.

למדו שיטת הפלת גנים בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של AAV8 המספק RNA סיכת ראש קטנה. השיטה מפשטת את התהליך ומפחיתה סיבוכים בהשוואה להזרקה בוריד הפורטל.

הפלת גנים יעילה בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המסופקת על ידי נגיף הקשור לאדנו Serotype 8 (AAV8)

גלה סרטונים נוספים