Name: דימות סידן חד-תאי לחקר הפעלת תעלות יוני סידן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-13T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: חקור דימות סידן חד-תאי בזמן אמת לחקר תעלות יוני סידן ומנגנוני כאב באמצעות צבע Fura-2/AM. שיטה זו מאפשרת ניטור כמותי של שינויים בתרכיזי סידן תוך-תאיים בקרטינוציטים ובתאי HEK293T.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הדמיית סידן חד-תאי למחקרי הפעלת ערוצים

<ol><li>Murthy, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+for+contraction+and+relaxation+in+smooth+muscle+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signaling for contraction and relaxation in smooth muscle of the gut.</a> Annu Rev Physiol. 68, 345-374 (2006).</li>
<li>Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+extracellular+fields+and+currents--eeg%2C+ecog%2C+lfp+and+spikes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The origin of extracellular fields and currents--eeg, ecog, lfp and spikes.</a> Nat Rev Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).</li>
<li>Rogers, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+airway+mucus+secretion+and+pathophysiology+of+hypersecretion%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Care%22%5BJournal%5D)">Physiology of airway mucus secretion and pathophysiology of hypersecretion.</a> Respir Care. 52 (9), 1134-1146 (2007).</li>
<li>Mitra, R., Hasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Store-operated+Ca%282%2B%29+entry+regulates+neuronal+gene+expression+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Store-operated Ca(2+) entry regulates neuronal gene expression and function.</a> Curr Opin Neurobiol. 73, 2022(2022).</li>
<li>Landstrom, A. P., Dobrev, D., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+cardiac+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and cardiac arrhythmias.</a> Circ Res. 120 (12), 1969-1993 (2017).</li>
<li>Zheng, C., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+deficiency+of+coagulation+factors+v+and+viii%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Combined deficiency of coagulation factors v and viii: An update.</a> Semin Thromb Hemost. 39 (6), 613-620 (2013).</li>
<li>Ahmadian Elmi, M., Motamed, N., Picard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analyses+of+the+g+protein-coupled+estrogen+receptor+gper1+reveal+constitutive+links+to+endoplasmic+reticulum%2C+glycosylation%2C+trafficking%2C+and+calcium+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Proteomic analyses of the g protein-coupled estrogen receptor gper1 reveal constitutive links to endoplasmic reticulum, glycosylation, trafficking, and calcium signaling.</a> Cells. 12 (21), 2571(2023).</li>
<li>Prakriya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orai1+is+an+essential+pore+subunit+of+the+crac+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Orai1 is an essential pore subunit of the crac channel.</a> Nature. 443 (7108), 230-233 (2006).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+A+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: A heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stim1+thermosensitivity+defines+the+optimal+preference+temperature+for+warm+sensation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Stim1 thermosensitivity defines the optimal preference temperature for warm sensation in mice.</a> Cell Res. 29 (2), 95-109 (2019).</li>
<li>Bharate, S. S., Bharate, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+thermoreceptor+trpm8+by+cooling+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modulation of thermoreceptor trpm8 by cooling compounds.</a> ACS Chem Neurosci. 3 (4), 248-267 (2012).</li>
<li>Coste, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo+proteins+are+pore-forming+subunits+of+mechanically+activated+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Piezo proteins are pore-forming subunits of mechanically activated channels.</a> Nature. 483 (7388), 176-181 (2012).</li>
<li>Behera, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+Ca2%2B+dynamics+using+a+ubiquitin-10+promoter-driven+yellow+cameleon+3.6+indicator+reveal+reliable+transgene+expression+and+differences+in+cytoplasmic+Ca2%2B+responses+in+arabidopsis+and+rice+%28oryza+sativa%29+roots%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Analyses of Ca2+ dynamics using a ubiquitin-10 promoter-driven yellow cameleon 3.6 indicator reveal reliable transgene expression and differences in cytoplasmic Ca2+ responses in arabidopsis and rice (oryza sativa) roots.</a> New Phytol. 206 (2), 751-760 (2015).</li>
<li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+ca%282%2B%29+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+analysis+of+stim1+thermal+sensation%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism analysis of stim1 thermal sensation.</a> Cells. 12 (22), 2613(2023).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATF6+safeguards+organelle+homeostasis+and+cellular+aging+in+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">ATF6 safeguards organelle homeostasis and cellular aging in human mesenchymal stem cells.</a> Cell Discov. 4, 2(2018).</li>
<li>Jiang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanosensitive+piezo1+channel+mediates+heart+mechano-chemo+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The mechanosensitive piezo1 channel mediates heart mechano-chemo transduction.</a> Nat Commun. 12 (1), 869(2021).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Orai1-mediated+store-operated+Ca%282%2B%29+channel%2Fcalpain+signaling+contributes+to+high+glucose-induced+podocyte+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced Orai1-mediated store-operated Ca(2+) channel/calpain signaling contributes to high glucose-induced podocyte injury.</a> J Biol Chem. 298 (6), 101990(2022).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+er+ion+homeostasis+maintained+by+an+er+anion+channel+clcc1+contributes+to+als-like+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Disruption of er ion homeostasis maintained by an er anion channel clcc1 contributes to als-like pathologies.</a> Cell Res. 33 (7), 497-515 (2023).</li>
<li>Gouin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trpv1+and+trpa1+in+cutaneous+neurogenic+and+chronic+inflammation%3A+Pro-inflammatory+response+induced+by+their+activation+and+their+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Trpv1 and trpa1 in cutaneous neurogenic and chronic inflammation: Pro-inflammatory response induced by their activation and their sensitization.</a> Protein Cell. 8 (9), 644-661 (2017).</li>
<li>Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+imaging+of+cortical+neurons+using+fura-2+am%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am.</a> J Vis Exp. (23), e1067(2009).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lever-like+transduction+pathway+for+long-distance+chemical-+and+mechano-gating+of+the+mechanosensitive+piezo1+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A lever-like transduction pathway for long-distance chemical- and mechano-gating of the mechanosensitive piezo1 channel.</a> Nat Commun. 9 (1), 1300(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מצלמה</td><td>ניקון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קפסאיצין</td><td>סיגמא</td><td>211275</td><td></td></tr><tr><td>CL-100 בקר טמפרטורה</td><td>וורנר אינסטרומנטס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה ציקלופיאזונית (CPA)</td> <td>סיגמא</td><td>C1530</td><td></td></tr><tr><td>DG-4 אור</td><td>סאטר אינסטרומנט חברת</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)&nbsp;</td><td>Amresco</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermofisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת הדמיה פלואורסצנטית (MetaFluor, תוכנה בתשלום)&nbsp;</td>מכשירים <td></td><td></td><td>מולקולריים</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fura-2/AM</td><td>Invitrogen</td><td>F1201</td><td></td></tr><tr><td>HBSS buffer</td><td>Gibco</td><td>14175103</td><td></td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>ליפופקטמין 3000</td><td>Invitrogen</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>פלורוניק F-127</td><td>&nbsp; Beyotime</td><td>ST501</td><td></td></tr><tr><td>פולי-D-ליזין</td><td>&nbsp; Beyotime</td><td>ST508</td><td></td></tr><tr><td>SC-20 מכשיר חימום/קירור בזרימת נוזלים&nbsp;</td>מכשיר <td></td><td></td><td>הרווארד</td></tr><tr><td>מקור אור לבן</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

דימות סידן חד-תאי לחקר הפעלת תעלות יוני סידן

Single-Cell Calcium Imaging for Studying the Activation of Calcium Ion Channels

זיהוי תגובת טמפרטורה 
קרטינוציטים ראשוניים קרטינוציטים ראשוניים בודדו מעכברים שזה עתה נולדו והוכנו על פי פרוטוקולים שנקבעו10. תאים אלה נזרעו לתוך לוחות של 24 בארות שהכילו מגלשות זכוכית. בעקבות ההעמסה של הגשושית Fura-2, המיקוד הותאם תחת המיקרוסקופ באורך גל של 380 ננומטר כדי להשיג הדמיה ברורה של המורפולוגיה של התא, כפי שמודגם באיור 2A. אם הגשושית לא נטענה בהצלחה במהלך התהליך, התאים לא יהיו גלויים. החיץ החוץ תאי בתא הוחלף ברציפות באמצעות מערכת זילוח, מה שהבטיח תנאים אופטימליים לתאים. מערכת בקרת הטמפרטורה חוברה למערכת הזילוח, ואפשרה זיהוי תגובות תרמיות תאיות על ידי שליטה בשינויי הטמפרטורה במאגר החוץ תאי. תהליך זה כלל חימום הדרגתי של המאגר החוץ תאי ולאחר מכן קירור הדרגתי שלו.
מערכת ההדמיה החד-תאית Ca2+ שימשה לניטור שינויים בריכוז Ca2+ תוך תאי בתנאי ניסוי שונים. כפי שניתן לראות באיור 2B, קרטינוציטים הציגו תגובה תרמית ברורה כאשר הם נתונים לחימום, כמו גם תגובה מורגשת במהלך שלב הקירור. יש לציין שתגובת הטמפרטורה הזו נעלמה כאשר הגן STIM1, האחראי העיקרי לתגובה הזו, נמחק (איור 2C)10. הדמיית Ca2+ חד-תאית מאפשרת תצפית בזמן אמת על שינויים בריכוז Ca2+ תוך תאי בתגובה לגירויים חיצוניים שונים, ומאפשרת ניתוח מפורט של התנהגות התא ואיתות.
HEK293T תאים המבטאים יתר על המידה את פלסמידים המטרה HEK293T תאים נזרעו לתוך צלחת בת 24 בארות שהכילה שקופיות זכוכית על פי השיטה הניסויית. התאים קיבלו ביטוי יתר באמצעות STIM1/Orai1, והתגובה התרמית המתווכת שלהם זוהתה באותה שיטה שתוארה לעיל עבור תאים ראשוניים. במקרה של תאים המבטאים יתר על המידה את פלסמיד המטרה, העברה מוצלחת אושרה על ידי בחירת תאים המבטאים את הפלסמיד המתאים, כפי שמצוין על ידי חלבונים פלואורסצנטיים אדומים או ירוקים הנישאים על ידי הפלסמיד תחת אורכי גל TRITC או FITC. לצורך ניסוי זה נעשה שימוש בפלסמידים STIM1-GFP/Orai1-DsRed, כאשר GFP זוהה תחת FITC, פולט פלואורסצנטיות ירוקה, ו-DsRed זוהה תחת TRITC, פולט פלואורסצנטיות אדומה. תאים בעלי ביטוי יתר של mCherry ריק (TRITC) שימשו כקבוצת ביקורת שלילית. כפי שניתן לראות באיור 3A, תאים פלואורסצנטיים שנצפו תחת FITC הצביעו על ביטוי מוצלח של STIM1, מה שמאפשר בחירה ורישום של התגובה התרמית שלהם במהלך תהליכי החימום והקירור. תאים שלא עברו טרנספורמציה שימשו כבקרה שלילית. איור 3B מדגים ש-STIM1/Orai1 הפגין תגובה תרמית משמעותית במהלך תהליך הקירור, בניגוד לבקרה השלילית שמוצגת באיור 3C.
זיהוי תגובה לתרופות טכנולוגיית הדמיה Ca2+ של תא יחיד יכולה לשמש גם לזיהוי תגובות תאים לתרכובות. הכנת התא לזיהוי תגובה תרמית זהה לזו שתוארה לעיל. ההבדל בין תגובה תרופתי לתגובה תרמית טמון בעובדה שתגובה תרמית דורשת בדרך כלל הפעלה של תאים על ידי שינוי הטמפרטורה של החיץ החוץ תאי דרך מערכת זילוח, בעוד שתרכובות יכולות להינתן באמצעות זילוח או על ידי הוספתן ישירות באמצעות פיפטה. תוספת ישירה עם פיפטה יכולה לשמר ביעילות את כמות התרכובת בה משתמשים; עם זאת, העקומה המתקבלת לא תמיד עשויה להיות מושכת מבחינה חזותית כמו זו המתקבלת באמצעות זילוח.
אם ניקח את איור 4 כדוגמה, איור 4A מראה את תגובת כניסת הסידן (SOCE) המופעלת בחנות של STIM1/Orai1, שבה ריכוז Ca2+ החוץ-תאי ותכולת החומצה הציקלופיאזונית (CPA) משתנים ברצף באמצעות מערכת זילוח כדי לגרום ל-SOCE. באיור 4B, קפסאיצין אגוניסט TRPV1 מתווסף ישירות באמצעות פיפטה לתאים המבטאים יתר על המידה את פלסמיד TRPV1. קפסאיצין יכול להפעיל TRPV1 ולגרום לשטף Ca2+ חוץ-תאי.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig01.jpg">
איור 1: תרשים סכמטי של Fura-2 AM. Fura-2 היא בדיקה פלואורסצנטית נפוצה Ca2+ בביולוגיה של התא אשר נקשרת באופן סלקטיבי ל- Ca2+ ביחס של 1:1 ופולטת פלואורסצנטיות. בשל טבעו הקוטבי מאוד כתרכובת חומצית, פורה-2 אינו יכול להיכנס לתאים. כדי לשפר את חדירות התא, הוא מצומד עם אצטוקסימתיל (AM) על הקבוצה השלילית שלו כדי ליצור Fura-2/AM. שינוי זה מגביר את מסיסות האסתר שלו ומבטל את המטען השלילי. בתוך התאים, Fura-2/AM עובר הידרוליזה על ידי אסטראזות לתוך Fura-2, אשר יכול להיקשר באופן הפיך עם Ca2+ ציטופלזמי חופשי. בעת הקשירה, אורך גל העירור המרבי משתנה מ-380 ננומטר ל-340 ננומטר (כאשר הוא רווי ב-Ca2+). עוצמת הפלואורסצנטיות הנפלטת קשורה כמותית לריכוז Ca2+ כבול. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig02.jpg"> 
איור 2: זיהוי תגובת טמפרטורה של קרטינוציטים ראשוניים. (A) צביעת Fura-2 של קרטינוציטים מעכברים שזה עתה נולדו, שנצפתה תחת עדשה אובייקטיבית פי 20. (ב,ג) תגובת טמפרטורה של קרטינוציטים WT (B) וקרטינוציטים נוקאאוט STIM1 (C) באמצעות מערכת הדמיה Ca2+ חד-תאית. הגדלה: פי 20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig03.jpg"> 
איור 3: זיהוי תגובת טמפרטורה של STIM1-GFP/Orai1-Dsred מבוטא יתר על המידה בתאי HEK293T. (A) איור מייצג המציג תאים חיוביים המבטאים STIM1-GFP תחת FITC. (ב,ג) תגובת טמפרטורה של תאי HEK293T המבטאים את הפלסמיד המתאים שזוהה על ידי מערכת הדמיה Ca2+ חד-תאית. הגדלה: פי 20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig04.jpg"> 
איור 4: זיהוי תגובה לתרופות באמצעות הדמיית Ca2+ חד-תאית. (A) תגובת SOCE של תאי HEK293T המבטאים יתר על המידה STIM1/Orai1. המאגר החוץ תאי משתנה מ-Ca2+ המכיל ל-Ca2+ ללא שימוש במערכת זילוח. בהיעדר Ca2+, CPA מתווסף כדי לרוקן Ca2+ מהרשתית האנדופלסמית. לאחר מכן, המאגר החוץ-תאי מוחלף במאגר המכיל Ca2+ כדי לגרום לזרם Ca2+ חוץ-תאי, המייצג כניסה של Ca2+ המופעל בחנות. הדמיית Ca2+ חד-תאית משמשת לרישום דינמי של השינויים בריכוז Ca2+ ציטוסולי הנגרמים על ידי תהליכים אלה. (B) HEK293T תאים המבטאים יתר על המידה TRPV1-mRuby, כאשר mRuby הוא חלבון פלואורסצנטי המשמש לבדיקת מצב הטרנספקציה של חלבון TRPV1. קפסאיצין מתווסף באמצעות פיפטה בעוד זרם Ca2+ נרשם על ידי הדמיה חד תאית Ca2+ . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Single cell Ca2+ imaging is essential for the study of Ca2+ channels activated by various stimulations like temperature, voltage, native compound and ...

single-cell-calcium-imaging-for-studying-activation-calcium-ion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פעילות ספונטנית של פיתוח רשתות נוירונים ניתן למדוד באמצעות AM-אסתר צורות של סידן רגיש צבעים אינדיקטור. שינויים סידן תוך תאי, המציין ההפעלה העצבית, מזוהים כמו שינויים חולפות הקרינה אינדיקטור עם אחד או שני פוטונים הדמיה. פרוטוקול זה יכול להיות מותאמים עבור מגוון של רשתות נוירונים התפתחותית...

סידן הדמיה תפקודית בפיתוח רשתות קליפתיים

סרטון זה מציג את המושגים מאחורי דימות סידן וכולל פרוטוקול לדוגמה להדמיית הילוך מהיר של תולעים הכלולות בבארות אגרוז יצוקות.

הדמיית סידן: שיטה להמחשת פעילות עצבית ב- C. elegans חי

עם גוף מערך עצביה הקטנים שקוף, מתועד היטב ומגוון הרחב של טכניקות גנטיות מתאימים...

בהדמיה עצבית סיד vivo ב C. elegans

כאן אנו מציגים טכניקות להדמיית אירועי Ca2+ מקומיים בתיווך IP3 באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בתאי יונקים שלמים הטעונים באינדיקטורים Ca2+ יחד עם אלגוריתם שהופך את הזיהוי והניתוח של אירועים אלה לאוטומטיים.

ההדמיה המקומית Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; אותות בתאי יונקים בתרבית

אנו מציגים שיטת שילוב תאים כל תיקון-קלאמפ הקלטות והדמיה שני הפוטונים להקליט את Ca2 + שנחשולי דנדריטים עצביים במוח חריפה פרוסות.

שני הפוטונים סידן הדמיה של דנדריטים עצביים במוח פרוסות

כאן אנו מציגים פרוטוקול סידן התמונה איתות באוכלוסיות של סוגי תאים בודדים באזור צומת עצב-שריר מאתר.

לשעבר Vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר

הדמיית סידן תאים היא מתודולוגיה רב-תכליתית לחקר איתות דינמי של תאים בודדים, על אוכלוסיות מעורבות בתרבית או אפילו על בעלי חיים מתעוררים, המבוססת על הביטוי של ערוצים / קולטנים חדירים לסידן המעניקים חתימות פונקציונליות ייחודיות.

הדמיה של שינויים במעגל נוירון-גליה בטכניקת הדמיית הסידן

השיטות הנוכחיות מתארות גישה לא רציומטרית להדמיית סידן ברזולוציה גבוהה, תת-מדורית in vivo ב- Caenorhabditis elegans באמצעות מדדי סידן מקודדים גנטית זמינים.

הדמיה תת-תאית של טיפול בסידן עצבי ב-Vivo

מדדי סידן מקודדים גנטית (GECI) מאפשרים ניתוח חזק ברמת האוכלוסייה של איתות נוירונים חושי. כאן, פיתחנו גישה חדשנית המאפשרת הדמיית GECI in vivo של פעילות גרעיני גרעינים של חולדות.

In-Vivo הדמיית סידן של נוירונים חושיים בגנגליון טריגמינלי של חולדה

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מקיף לפתרון אותות Ca2+ מקומיים ראשוניים, המכונים מיקרו-דומיינים Ca2+ , בתאי מורין ראשוניים ובתאי T אנושיים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. פרוטוקול זה משמש כמשאב רב ערך לחוקרים הבוחנים מסלולי איתות Ca2+ בתוך תאי מערכת החיסון ולפענח עוד יותר את תפקודם.

הדמיה ראשונית של מיקרודומיינים Ca2+ בתאי T ראשוניים

חקור דימות סידן חד-תאי בזמן אמת לחקר תעלות יוני סידן ומנגנוני כאב באמצעות צבע Fura-2/AM. שיטה זו מאפשרת ניטור כמותי של שינויים בתרכיזי סידן תוך-תאיים בקרטינוציטים ובתאי HEK293T.

דימות סידן חד-תאי לחקר הפעלת תעלות יוני סידן

גלה סרטונים נוספים