Electroporation-Based CRISPR-Cas9-Mediated Gene Knockout in THP-1 Cells and Single-Cell Clone Isolation

Mathieu Pinaud; Alessia Zamborlini

doi:10.3791/67469

נוקאאוט גנים בתיווך CRISPR-Cas9 מבוסס אלקטרופורציה בתאי THP-1 ובידוד שיבוט של תא בודד

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Electroporation-Based CRISPR-Cas9-Mediated Gene Knockout in THP-1 Cells and Single-Cell Clone Isolation

נוקאאוט גנים בתיווך CRISPR-Cas9 מבוסס אלקטרופורציה בתאי THP-1 ובידוד שיבוט של תא בודד

Full Text

3,733 Views

09:29 min

February 28, 2025

DOI: 10.3791/67469-v

Mathieu Pinaud¹, Alessia Zamborlini¹

¹INSERM, CEA, Center for Immunology of Viral, Auto-immune, Hematological and Bacterial diseases (IMVA-HB/IDMIT),Université Paris-Saclay

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

קו התאים THP-1 נמצא בשימוש נרחב כמודל לחקירת התפקודים של מונוציטים/מקרופאגים אנושיים בתחומי מחקר שונים הקשורים לביולוגיה. מאמר זה מתאר פרוטוקול עבור הנדסה יעילה מבוססת CRISPR-Cas9 ובידוד שיבוטים של תא יחיד, המאפשר ייצור של נתונים פנוטיפיים חסונים וניתנים לשחזור.

פעילות המחקר שלי מתמקדת בהבנת המנגנונים שהופכים את המקרופאגים לעמידים בפני זיהום על ידי HIV, הנגיף האחראי למגפת האיידס. בפרט, אנו מתמקדים בפעילות של אנזים שנקרא HT-1 כלשהו שמפרק את ה-NTPs, אבני הבניין של הגנום הנגיפי. אבל לאנזים הזה יש גם פעילויות אחרות שאנו מנסים להבהיר.

הקמנו פרוטוקול להנדסה גנטית של תאי THP1. תאים אלה הם תחליף מבוסס היטב למקרופאגים אנושיים למחקר. למשל, שכפול של HIV-1.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos