Name: הדמיה תוך ניתוחית של הזרקה תת-רשתית והיפרדות רשתית בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: למד שיטת הזרקה תת-רשתית בחולדות עם הדמיה תוך ניתוחית לבקרת אתר ההזרקה והיפרדות הרשתית. פרוטוקול זה משפר את השחזרות והבטיחות במחקר ניוון הרשתית ומאפשר מעקב אחר מנגנוני מוות תאי בפוטורצפטורים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Guymer, R. H., Campbell, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Lancet. 401 (10386), 1459-1472 (2023).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li>
<li>Cheung, N., Mitchell, P., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Lancet. 376 (9735), 124-136 (2010).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+death+and+rescue+in+retinal+detachment+and+degenerations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell death and rescue in retinal detachment and degenerations.</a> Prog Retin Eye Res. 37, 114-140 (2013).</li>
<li>Russell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+voretigene+neparvovec+%28AAV2-hRPE65v2%29+in+patients+with+RPE65-mediated+inherited+retinal+dystrophy%3A+A+randomised%2C+controlled%2C+open-label%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of voretigene neparvovec (AAV2-hRPE65v2) in patients with RPE65-mediated inherited retinal dystrophy: A randomised, controlled, open-label, phase 3 trial.</a> Lancet. 390, 849-860 (2017).</li>
<li>Gagliardi, G., Ben M'Barek, K., Goureau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+replacement+in+macular+degeneration+and+retinitis+pigmentosa%3A+A+pluripotent+stem+cell-based+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell replacement in macular degeneration and retinitis pigmentosa: A pluripotent stem cell-based approach.</a> Prog Retin Eye Res. 71, 1-25 (2019).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+experimental+mouse+model+of+retinal+detachment%3A+Complete+functional+and+histologic+recovery+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel experimental mouse model of retinal detachment: Complete functional and histologic recovery of the retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. 79, e50660(2013).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+Effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: Effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol Vis. 7, 131-137 (2001).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. 101, 672-681 (1994).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+findings+in+a+mouse+model+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence findings in a mouse model of retinal detachment.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subretinal+injection+on+retinal+structure+and+function+in+a+rat+oxygen-induced+retinopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model.</a> Mol Vis. 23, 832-843 (2017).</li>
<li>Sene, A., Apte, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+photoreceptor+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced photoreceptor cell death.</a> Adv Exp Med Biol. 1074, 203-208 (2018).</li>
<li>Zhang, Z. Y., Sun, Y. J., Song, J. Y., Fan, B., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+and+examination+methods+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Experimental models and examination methods of retinal detachment.</a> Brain Res Bull. 169, 51-62 (2021).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am J Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Dentel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+flood+illumination+ophthalmoscopy+in+nonhuman+primates%3A+Findings+in+normal+and+short-term+induced+detached+retinae%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics flood illumination ophthalmoscopy in nonhuman primates: Findings in normal and short-term induced detached retinae.</a> Ophthalmol Sci. 3 (4), 100316(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Atipemazole (אנטידורם 4.27 מ"ג/מ"ל)</td><td>Axience SAS, פנטין, צרפת</td><td>/</td><td>התעוררות</td></tr><tr><td>כלורמפניקול-רטינול (אופטלון 10 מ"ג/גרם)</td><td>TVM, Lempdes, צרפת</td><td>FR/V/3787889 6/1989</td> כיסוי טיפול <td>לאחר הניתוח</td></tr><tr><td>מחליק Mini 8mm</td><td>World Precision Instruments, סרסוטה, פלורידה</td><td>/</td><td>https://www.wpiinc.com/var-1040-cover-slips-pkg-100.html?srsltid=AfmBOoraZfMhuUuY_7rQbM5YKfqM2VR1PT0L-UHQ5uQUdjaeZuogbKP1&utm_source=chatgpt.com</td></tr><tr><td>הידרוקסיפרופיל מתיל צלולוז</td><td>FCI S.A.S., פריז, צרפת</td><td>/</td><td>אספקה תת-רשתית צמיגה</td></tr><tr><td>קטמין (קטמידור 100 מ"ג/מ"ל)</td><td>Axience SAS, פנטין, צרפת</td><td>/</td><td>הרדמה כללית</td></tr><tr><td>Lumera 700</td><td>Carl Zeiss, Oberkochen, גרמניה</td><td>https://www.zeiss.com/meditec/en/products/surgical-microscopes/ophthalmic-microscopes/opmi-lumera-700.html?utm_source=chatgpt.com</td><td>מיקרוסקופ עיניים</td></tr><tr><td>Medetomidine (Domitor 0.85 mg/mL)</td><td>Vetoquinol SA, פריז, צרפת</td><td>https://www.vetoquinol.com/en</td><td>הרדמה כללית</td></tr><tr><td>Microinjector Micro 4</td><td>World Precision Instruments, סרסוטה, FL</td><td>הזרקת</td> <td>SYS-MICRO4</td></tr><tr><td>אוקסיבופרוקאין 1.6 מ"ג/0.4 מ"ל</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, France</td><td>https://www.laboratoires-thea.com/en/chlorhydrate-doxybuprocaine-thea?utm_source=chatgpt.com</td><td>הרדמה מקומית</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies Europe B.V., Bleiswijk, הולנד</td><td>14190-094</td> מזרק <td>תת-רשתית מימי</td></tr><tr><td>(10 או 20 ומיקרו; L)</td><td>Hamilton, Reno, NV</td><td>80300</td><td>הזרקת</td></tr><tr><td>ג'ל דמעות (Lubrithal)</td><td>Dechron, Shrewsbury, בריטניה</td><td>https://www.dechra.ca/our-products/ca/companion-animal/dog/non-prescription/lubrithal?utm_source=chatgpt.com</td><td>הגנה מפני הקרנית</td></tr><tr><td>טרופיקמיד (Mydriaticum 1 מ"ג/מ"ל)</td><td>Th&eacute; a, קלרמון-פראן, צרפת</td><td>/</td><td>הרחבת אישונים</td></tr></tbody></table>

הדמיה תוך ניתוחית של הזרקה תת-רשתית והיפרדות רשתית בחולדות

Intraoperative Visualization of Subretinal Injection and Retinal Detachment in Rats

הצלחת הזרקה תת-רשתית מסתמכת על אספקה מדויקת ובלעדית לחלל התת-רשתית (כלומר, בין קולטני האור לשכבות ה-RPE) דרך הרטינוטומיה, תוך הימנעות מדימום תת-רשתית, שכן הדם רעיל לקולטני האור ולתאי RPE. לידה מוצלחת מאושרת על ידי הדמיה תוך ניתוחית (איור 2L), צילום פונדוס מיידי לאחר הניתוח וטומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT). צילום פונדוס שולל דימום תת-רשתית, בעוד שסריקות OCT B מאשרות היפרדות רשתית (RD) עם נוזל תת-רשתית שקוף (איור 1 ואיור 3). נוסף על כך, צילום פונדוס יכול לזהות מגע בעדשה או קטרקט מושרה שעשוי להיות בלתי מורגש במהלך ההליך (איור 3C,D). גם צילום וגם סריקת OCT יכולים להעריך את גודל האזור המנותק (איור 1B-E).
מספר גורמים משפיעים על גודל הבלב: (1) מיקום אתר ההזרקה: ככל שאתר ההזרקה רחוק יותר מהדיסק האופטי, כך האזור המנותק קטן יותר; (2) נפח מוזרק: נפח הזרקה של 20-25 מיקרוליטר יכול לנתק כמחצית מהרשתית בחולדות; (3) איכות הרשתית המנותקת: במודלים של ניוון רשתית (למשל, P23H, RCS), היפרדות עשויה להיות מאתגרת עקב עמידות מוגברת בין קולטני אור לתאי RPE הנגרמת על ידי תהליכים ניווניים, כגון גליוזיס והצטברות חומר תת-רשתית. במקרים כאלה, היפרדות רשתית מושרית היא בדרך כלל שטוחה, וסריקות OCT חיוניות לתיחום ברור של האזור המנותק.
דימום תוך-זגוגי קל עשוי להתרחש באתר ההזרקה מכיוון שלא תמיד ניתן להימנע לחלוטין מכלי דם זעירים ברשתית (איור 3E). עם זאת, דימומים כאלה בדרך כלל אינם מתפשטים לחלל התת-רשתית.
במקרים של ניתוק לא מספיק, יש להכיר בבעיה תוך ניתוחית, מה שמחייב הזרקה חוזרת מיידית דרך הרטינוטומיה המוכנה מראש. במהלך מפגש ניסיוני עם 20 חולדות, שני מנתחים (אחד מנוסה ואחד מתחיל) ביצעו את השיטה שלב אחר שלב. המנתח המנוסה השיג הצלחה ב-9 מתוך 10 פרוצדורות, בעוד שהמתחיל הצליח ב-6 מתוך 10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig1.jpg"> 
איור 1: סקירה כללית של התהליך והתוצאות. (A) ייצוג סכמטי של תהליך ההזרקה התת-רשתית בעין חולדה, המראה את הנפח המשמעותי של העדשה. (ב,ג) צילום פונדוס מיד לאחר ההזרקה (B) ו-6 ימים לאחר ההזרקה (C). ראשי חצים מציינים את מקום ההזרקה. אזור ניתוק הרשתית מסומן בקו מקווקו. (ד,ה) טומוגרפיה קוהרנטית אופטית סריקות B מיד לאחר ההזרקה (D) ו-6 ימים לאחר ההזרקה (E). ON: עצב הראייה. הגדלה: פי 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig2.jpg"> 
איור 2: השלבים של פרוטוקול ההזרקה התת-רשתית. הפרוטוקול מודגם בחולדת לונג אוונס בת 8 שבועות בהרדמה כללית. לתיאור מפורט של כל שלב, עיין בסרטון או בסעיף "פרוטוקול" בטקסט. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig3.jpg"> 
איור 3: דוגמאות לתוצאות שונות של צילום פונדוס לאחר הניתוח. (A) מראה נורמלי לאחר הניתוח עם פיזור פיגמנט קל באתר ההזרקה (חץ). (B) מראה נורמלי לאחר הניתוח עם בועת אוויר תוך-זגוגית קטנה במקום ההזרקה. בועות אוויר קטנות אלו מקורן במזרק ואינן מזיקות, אפילו בחלל התת-רשתית. (ג,ד) מגע עדשה הגורם לאטימות עדשה קלה (C) או משמעותית (D) (קטרקט). (ה,ו) דימום תוך-זגוגי קל (E) או נרחב יותר (F) הממוקם בסמוך למקום ההזרקה, ללא התפשטות לחלל התת-רשתית. (G) דימום במקום ההזרקה מתפשט בעיקר לתוך החלל התת-רשתית. במקרה זה, רטינוטומיה גרמה לפגיעה בכלי דם ברשתית. (H) דימום תוך זגוגי נרחב שנובע מחדירה סקלרלית. הגדלה: פי 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Subretinal injection, the delivery of a solution between the photoreceptors and the retinal pigment epithelium (RPE), creates a subretinal space where ...

intraoperative-visualization-subretinal-injection-retinal-detachment

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מקור: Park, S. W., et al. גישה לימבלית - הזרקה תת-רשתית של וקטורים נגיפיים לטיפול גנטי באפיתל פיגמנט רשתית של עכברים. J. Vis. Exp. (2015)הסרטון מתאר את השיטה להזרקה תת-רשתית של וקטורים נגיפיים לאפיתל פיגמנט הרשתית (RPE) במודל עכבר. הוא מפרט את ההליך מהרדמה והכנת עיניים ועד לאספקה מדויקת של וקטור לנטי-ויראלי, מה שמבטיח אינטגרציה וביטוי גנים ב-RPE.

הזרקה תת-רשתית של וקטורים נגיפיים לאפיתל פיגמנט הרשתית במודל עכבר

יצירת הפרדות רשתית ניסיונית עם גובה לשעתק ומתמשך של ניתוק, וללא דימום subretinal, היא חשובה ללימוד הפתופיזיולוגיה של אובדן תאי קולטי אור ברשתית מחלה והערכה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. כאן אנו מדווחים שיטה כזו בפירוט.

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

כאן אנו מציגים פרוטוקול מקובל על הקהילה בפורמט מולטימדיה להזרקה תת-רשתית של תאי RPE בחולדות ועכברים. גישה זו יכולה לשמש לקביעת פוטנציאל הצלה, פרופילי בטיחות ויכולות הישרדות של תאי RPE מושתלים עם השתלה במודלים של ניוון רשתית בבעלי חיים.

ביצוע subretinal זריקות במכרסמים כדי לספק תאי הרשתית פיגמנט האפיתל בהשעיה

הזרקה ישירה לעצב הראייה של החולדה שימושית למחקר רגנרטיבי. אנו מדגימים טכניקה זעיר פולשנית להזרקה ישירה לעצב הראייה של חולדה שאינה כרוכה בפתיחת הגולגולת. בשיטה זו, סיבוכים כירורגיים ממוזערים וההחלמה מהירה יותר.

טכניקה זעיר-פולשני להזרקה לתוך עצב העכברוש אופטי

זריקות תת-רשתית הן הטכניקה הנפוצה ביותר להעברת חומרים טיפוליים גדולים כגון חלבונים ווקטורים נגיפיים לקולטני האור ולאפיתל הפיגמנט ברשתית. שיטה חלופית בעכברים המכוונת בהצלחה לחלל התת-רשתית עם נזק אגבי מינימלי וזמני התאוששות מהירים מתוארת כאן.

שיטת הזרקה אלטרנטיבית והמאומתת עבור גישת שטח subretinal<i&gt; דרך</i&gt; בגישה אחורית Transcleral

הזרקת subretinal הוחל נרחב במחקרים פרה של טיפול בתאי גזע חלופי עבור ניוון מקולרי הקשור לגיל. במאמר זה דמיינו, נתאר טכניקה הזרקת subretinal פחות מסוכן, הדירים בדיוק ששונתה באמצעות הגישה הטרנס-scleral להעביר תאים לתוך עיניו חולדה.

פיתוחו של פרוטוקול מעודן עבור השתלת Subretinal טרנס-scleral של תאי אפיתל הפיגמנט ברשתית האנושי בעיניים עכברוש

כאן אנחנו מדגימים גישה מוזרה לשימוש טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (HR-SD-אוקטובר) כדי לסייע משלוח של סוכנים טיפול גנטי לחלל subretinal להעריך את פעולתה אמיתיות, לאפיין את קולט אור חיוניות.

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית יכול לשמש כטיפול חלופי תא עבור הטופס מתקדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש. פרוטוקול זה מתאר את הדור של מודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית והשתלות את subretinal של תאי אפיתל כנגד האדם מתחלקים נגזר תאי הפיגמנט ברשתית לתוך מודל זה של המחלה.

השתלת subretinal של תאי גזע עובריים אנושיים לתאי האפיתל של פיגמנט הרשתית נגזר למודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית

פרוטוקול זה מתאר טכניקה ייחודית המשתמשת בגישה טרנס-לחמית לגישה לעצב הראייה של החולדה לצורך זריקות.

גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה

מחקר זה מציג מתודולוגיה להעברת טיפולים לרשתית ולעצבי הראייה של החולדה הבוגרת. בנוסף, מוצגת שיטה ייחודית לאחזור רקמות לאיסוף מלמעלה למטה של עצב הראייה והרשתית בחולדה בוגרת.

מתן טיפולי בעיניים ושליפת רקמות מתקדמת בחולדות בוגרות

למד שיטת הזרקה תת-רשתית בחולדות עם הדמיה תוך ניתוחית לבקרת אתר ההזרקה והיפרדות הרשתית. פרוטוקול זה משפר את השחזרות והבטיחות במחקר ניוון הרשתית ומאפשר מעקב אחר מנגנוני מוות תאי בפוטורצפטורים.

הדמיה תוך ניתוחית של הזרקה תת-רשתית והיפרדות רשתית בחולדות

גלה סרטונים נוספים