Name: הערכת שקיעת ברזל במוחם של עכברי 5xFAD על ידי צביעת Perls/DAB (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: למדו להעריך שקיעת ברזל במוח עכברי 5xFAD באמצעות צביעת Perls/DAB. פרוטוקול זה מספק שיטה רגישה לזיהוי ברזל בהיפוקמפוס ובקורטקס, ומאפשר השוואה בין דגמי אלצהיימר לעכברים פראיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Karlawish, J., Jack, C. R., Rocca, W. A., Snyder, H. M., Carrillo, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+The+next+frontier-special+report+2017%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimer%27s+Dement%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: The next frontier-special report 2017.</a> Alzheimer's Dement. 13 (4), 374-380 (2017).</li>
<li>Praticò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+hypothesis+in+Alzheimer%27s+disease%3A+A+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress hypothesis in Alzheimer's disease: A reappraisal.</a> Trends in Pharmacol Sci. 29 (12), 609-615 (2008).</li>
<li>Sayre, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+oxidative+catalysis+by+neurofibrillary+tangles+and+senile+plaques+in+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">In situ oxidative catalysis by neurofibrillary tangles and senile plaques in alzheimer's disease.</a> J. Neurochem. 74 (1), 270-279 (2001).</li>
<li>Urrutia, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+alters+the+expression+of+dmt1%2C+fpn1+and+hepcidin%2C+and+it+causes+iron+accumulation+in+central+nervous+system+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Inflammation alters the expression of dmt1, fpn1 and hepcidin, and it causes iron accumulation in central nervous system cells.</a> J. Neurochem. 126 (4), 541-549 (2013).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+Progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: Progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297 (5580), 353-356 (2002).</li>
<li>Scheltens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease.</a> Lancet. 397 (10284), 1577-1590 (2021).</li>
<li>Ficiarà, E., Munir, Z., Boschi, S., Caligiuri, M. E., Guiot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+iron+concentration+in+alzheimer%27s+disease+as+a+possible+diagnostic+biomarker+unveiling+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Alteration of iron concentration in alzheimer's disease as a possible diagnostic biomarker unveiling ferroptosis.</a> Int J Mol Sci. 22 (9), 4479(2021).</li>
<li>Yang, W. S., Stockwell, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferroptosis%3A+Death+by+lipid+peroxidation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Ferroptosis: Death by lipid peroxidation.</a> Trends in Cell Biol. 26 (3), 165-176 (2016).</li>
<li>Lane, D. J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+and+Alzheimer%27s+disease%3A+An+update+on+emerging+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Iron and Alzheimer's disease: An update on emerging mechanisms.</a> J Alzheimers Dis. 64 (s1), S379-S395 (2018).</li>
<li>Meadowcroft, M. D., Connor, J. R., Smith, M. B., Yang, Q. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mri+and+histological+analysis+of+beta-amyloid+plaques+in+both+human+Alzheimer%27s+disease+and+app%2Fps1+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Magn+Reson+Imaging%22%5BJournal%5D)">Mri and histological analysis of beta-amyloid plaques in both human Alzheimer's disease and app/ps1 transgenic mice.</a> J Magn Reson Imaging. 29 (5), 997-1007 (2009).</li>
<li>Winterbourn, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+iron+and+hydrogen+peroxide%3A+The+Fenton+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Lett%22%5BJournal%5D)">Toxicity of iron and hydrogen peroxide: The Fenton reaction.</a> Toxicol Lett. 82-83, 969-974 (1995).</li>
<li>Silvestri, L., Camaschella, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+potential+pathogenetic+role+of+iron+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">A potential pathogenetic role of iron in Alzheimer's disease.</a> J Cell Mol Med. 12 (5a), 1548-1550 (2008).</li>
<li>Gamblin, T. C., King, M. E., Kuret, J., Berry, R. W., Binder, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+regulation+of+fatty+acid-induced+tau+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Oxidative regulation of fatty acid-induced tau polymerization.</a> Biochemistry. 39 (46), 14203-14210 (2000).</li>
<li>Meguro, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonheme-iron+histochemistry+for+light+and+electron+microscopy%3A+A+historical%2C+theoretical+and+technical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Nonheme-iron histochemistry for light and electron microscopy: A historical, theoretical and technical review.</a> Arch Histol Cytol. 70 (1), 1-19 (2007).</li>
<li>Lehéricy, S., Roze, E., Goizet, C., Mochel, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mri+of+neurodegeneration+with+brain+iron+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Mri of neurodegeneration with brain iron accumulation.</a> Curr Opin Neurol. 33 (4), 462-473 (2020).</li>
<li>Nabuurs, R. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-field+MRI+of+single+histological+slices+using+an+inductively+coupled%2C+self-resonant+microcoil%3A+Application+to+ex+vivo+samples+of+patients+with+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">High-field MRI of single histological slices using an inductively coupled, self-resonant microcoil: Application to ex vivo samples of patients with Alzheimer's disease.</a> NMR Biomed. 24 (4), 351-357 (2010).</li>
<li>Perl, D. P., Good, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+techniques+for+determining+cellular+iron+distribution+in+brain+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Comparative techniques for determining cellular iron distribution in brain tissues.</a> Ann Neurol. 32 (S1), S76-S81 (1992).</li>
<li>Riemer, J., Hoepken, H. H., Czerwinska, H., Robinson, S. R., Dringen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorimetric+ferrozine-based+assay+for+the+quantitation+of+iron+in+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Colorimetric ferrozine-based assay for the quantitation of iron in cultured cells.</a> Anal Biochem. 331 (2), 370-375 (2004).</li>
<li>Luterotti, S., Kordić, T., Dodig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+iron+and+copper+in+children%27s+sera+by+FAAS%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of iron and copper in children's sera by FAAS.</a> Acta Pharm. 61 (1), 93-102 (2011).</li>
<li>Hill, J. M., Switzer, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regional+distribution+and+cellular+localization+of+iron+in+the+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The regional distribution and cellular localization of iron in the rat brain.</a> Neuroscience. 11 (3), 595-603 (1984).</li>
<li>Meguro, R., Asano, Y., Iwatsuki, H., Shoumura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-perls+and+-turnbull+methods+supplemented+by+dab+intensification+for+nonheme+iron+histochemistry%3A+Demonstration+of+the+superior+sensitivity+of+the+methods+in+the+liver%2C+spleen%2C+and+stomach+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Perfusion-perls and -turnbull methods supplemented by dab intensification for nonheme iron histochemistry: Demonstration of the superior sensitivity of the methods in the liver, spleen, and stomach of the rat.</a> Histochem Cell Biol. 120 (1), 73-82 (2003).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S-nitrosylation+of+divalent+metal+transporter+1+enhances+iron+uptake+to+mediate+loss+of+dopaminergic+neurons+and+motoric+deficit%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">S-nitrosylation of divalent metal transporter 1 enhances iron uptake to mediate loss of dopaminergic neurons and motoric deficit.</a> J Neurosci. 38 (39), 8364-8377 (2018).</li>
<li>Guillemot, J., Canuel, M., Essalmani, R., Prat, A., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implication+of+the+proprotein+convertases+in+iron+homeostasis%3A+Proprotein+convertase+7+sheds+human+transferrin+receptor+1+and+furin+activates+hepcidin%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Implication of the proprotein convertases in iron homeostasis: Proprotein convertase 7 sheds human transferrin receptor 1 and furin activates hepcidin.</a> Hepatology. 57 (6), 2514-2524 (2013).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferritin+light+chain+interacts+with+pen-2+and+affects+%CE%B3-secretase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Ferritin light chain interacts with pen-2 and affects γ-secretase activity.</a> Neurosci Lett. 548, 90-94 (2013).</li>
<li>Jin Jung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+induces+inactivation+of+protein+phosphatase+2a%2C+promoting+proinflammatory+nf-%CE%BAb+in+aged+rat+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress induces inactivation of protein phosphatase 2a, promoting proinflammatory nf-κb in aged rat kidney.</a> Free Radic Biol Med. 61, 206-217 (2013).</li>
<li>Connor, J. R., Menzies, S. L., Martin, S. M. S., Mufson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+distribution+of+transferrin%2C+ferritin%2C+and+iron+in+normal+and+aged+human+brains%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular distribution of transferrin, ferritin, and iron in normal and aged human brains.</a> J Neurosci Res. 27 (4), 595-611 (2004).</li>
</ol>

מחלת אלצהיימר (AD) היא המחלה הנוירודגנרטיבית הנפוצה ביותר והפכה לבעיה רצינית עבור החברה. השכיחות של אלצהיימר עולה באופן דרמטי עם גיל 1,2,3,4. סימני ההיכר הפתולוגיים העיקריים של מחלת אלצהיימר (AD) כוללים שקיעה של פלאק β-עמילואיד (Aβ) וסבכים נוירו-פיברילריים (NFTs) עקב זרחון חריג של חלבוני טאו. Aβ נוצר באמצעות פיצול רציף של חלבון מבשר עמילואיד (APP) על ידי אנזימי β-secretase ו-γ-secretase. חוסר ויסות בייצור או בפינוי Aβ מוביל להצטברותו במוח, ויוצר פלאק עמילואיד, המוכר כאחד הסמנים הפתולוגיים המוקדמים ביותר של אלצהיימר. הפלאק הזה לא רק גורם לנזק ישיר לתאי העצב, אלא גם גורם לשרשרת של השפעות מזיקות, כולל דלקת עצבית, עקה חמצונית והפרעות בתפקוד הסינפטי. באופן קולקטיבי, תהליכים אלה תורמים למוות עצבי ולירידה הקוגניטיבית המתקדמת שנצפתהב-AD5. למרות עשרות שנים של מחקר המתמקד בעיקר בסימני ההיכר הפתולוגיים של מחלת אלצהיימר (AD), כולל שקיעת פלאק β עמילואיד וצבירת חלבון טאו היפר-זרחני, פריצות דרך טיפוליות משמעותיות מבחינה קלינית נותרו חמקמקות, כאשר התערבויות קיימות מוכיחות יעילות מוגבלת בשינוי התקדמות המחלה6.
ברזל הוא מתכת חשובה לשמירה על תפקוד המוח ומעורב בהובלת חמצן, סינתזת DNA, נשימה מיטוכונדריאלית, סינתזת מיאלין, סינתזת מוליכים עצביים וחילוף חומרים. עם זאת, ברזל הופך למזיק כאשר הריכוזים חורגים מיכולת הקיבוע התאית 6,7,8. שקיעת ברזל מוגברת, בדרך כלל במקביל לפלאק Aβ, נצפתה הן בקליפת המוח והן בהיפוקמפוס בחולים עם AD 9,10. באמצעות תגובת פנטון11, ברזל חופשי תוך-תאי יכול לייצר רדיקלים הידרוקסיליים (•OH) כמו גם מיני חמצן תגובתיים. חומרים מזיקים אלה לא רק גורמים לדלקת עצבית על ידי הפעלת תאי גליה, אלא גם תוקפים את הביו-מולקולות של התא באמצעות עקה חמצונית, משבשים את תפקוד התאים התקין ומובילים לתפקוד סינפטילקוי. יתר על כן, עלייה בברזל מעורבת ישירות בהתפתחות סימנים פתולוגיים של אלצהיימר: ברזל תורם לייצור Aβ12 וגם מגביר את תפקוד חלבון הטאו, מה שמוביל לסבכים נוירו-פיברילריים13.
פותחו מספר טכניקות להערכת תכולת הברזל במוח, כולל הדמיית תהודה מגנטית (MRI), כמו גם שיטות כימיות והיסטוכימיות14. כימות in vivo של רמות הברזל התוך מוחי באמצעות MRI חשוב מבחינה קלינית לחולי הזדקנות וניוון עצבי15. ל-MRI יש יתרון בכך שהוא לא פולשני ורגיש מאוד: הוא יכול לזהות שקיעת ברזל בשלבים המוקדמים של המחלה. בפרט, טכניקת הגדלת R2 תלוית שדה (FDRI) יכולה להבחין בין צורות שונות של ברזל, כגון ברזל פריטין וברזל הם16. עם זאת, MRI אינו יכול לזהות הצטברות ברזל ברמה התאית, והוא יקר, ולכן הוא משמש בעיקר במחקרים קליניים17.
מדידה קולורימטרית היא שיטה כימית הקובעת את ריכוז החומר (כגון ברזל) על ידי מדידת עוצמת הצבע המופק מתגובת החומר בתמיסה עם חומר כרומוגני18. שיטה זו קלה לביצוע ומשתמשת בריאגנטים ומכשור בעלות נמוכה, מה שהופך אותה למתאימה למעבדות עם תקציבים מוגבלים18. עם זאת, הדיוק והרגישות של שיטה זו מוגבלים מאוד, שכן התוצאות נתונות להשפעה של גורמים סביבתיים, זמן התפתחות הצבע והשיפוט הסובייקטיבי של המפעיל. ספקטרומטריית ספיגה אטומית להבה (FAAS) היא שיטה נוספת שניתן להשתמש בה כדי להעריך את רמות הברזל19. בשיטה זו מתקבלת תמיסת דגימה מובהרת על ידי שריפת הרקמה המעניינת בתנור בטמפרטורה גבוהה. לאחר מכן הדגימה מומסת באמצעות חומצה הידרוכלורית, וריכוז הברזל בתמיסה נקבע באמצעות ספקטרומטריית ספיגה אטומית. שיטה זו רגישה ביותר ומתאימה לכל סוגי הדגימות הביולוגיות19. עם זאת, התהליך גוזל זמן ודורש ציוד יקר, ולכן השימוש בו מוגבל.
צביעת Perls/DAB לזיהוי ברזל ברזל שאינו הם היא שיטת זיהוי הברזל הנפוצה ביותר בגלל הספציפיות הגבוהה וקלות היישום שלה בהשוואה לשיטות היסטוכימיות אחרות14. בניגוד לניתוח קולורימטרי, הצביעה של פרלס היא שיטת צביעה היסטוכימית איכותית המסתמכת על התגובה בין יוני ברזל לאשלגן פרוציאניד ליצירת משקעים כחולים. הוא משמש להמחשה מיקרוסקופית של נוכחות והפצה של ברזל ברקמות. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת לנו להבחין בשקיעת ברזל בסוגי תאים שונים ולצפות בהתפלגות התת-תאית של שקיעת ברזל, ומספקת שיטה לחקר AD20. הכתם של פרלס מזהה בעיקר ברזל ברזל שאינו הם ותלוי בהיווצרות הקומפלקס הכחול הפרוסי:
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67501/67501eq01.jpg" style="margin: auto;">
(כחול פרוסי)
עם זאת, כתם פרלס המסורתי אינו יעיל לזיהוי לוקליזציה של ברזל ברמות ברזל נמוכות. כאשר מוסיפים diaminobenzidine (DAB), הוא מגיב עם ברזל hexacyanoferrate ליצירת תרכובת חומה, מה שמגדיל את הספציפיות של הבדיקה21.
מטרת הפרוטוקול הזה היא לתאר כיצד להעריך את הכמות וההתפלגות של שקיעת ברזל במוח של מודל עכבר אלצהיימר. בפרוטוקול זה, עכברים טרנסגניים בני 8 חודשים 5×FAD (C57BL/6J) שימשו כמודל עכברי AD והושוו לעכברים מסוג בר באותו גיל. פרטים על ההליכים להכנת המגיב הכימי, חתך המוח, ביצוע צביעת Perls/DAB וניתוח תמונות שצולמו לאחר הצביעה מוצגים כאן.

<table><tbody><tr><td>0.1 M PBS</td><td>biosharp</td><td>BL601A</td><td>הוסף מים נטולי יונים ליצירת תמיסה</td></tr><tr><td>4% PFA&nbsp;</td><td>שחזור Beyotime</td><td>P0099</td><td>ב-4 מעלות; C לשימוש</td></tr><tr><td>20X תמיסת DAB</td><td>Bioss</td><td>C-0003</td><td>Mix 10 &mu; l פתרון A, 10 ו-mu; l פתרון B ו-180 &mu; l אלכוהול PBS</td></tr><tr><td></td><td>Supelco</td><td>107017</td><td></td></tr><tr><td>HCL</td><td>Sigma</td><td>7647-01-0</td><td>הוסף מים מזוקקים ל 50 מ"ל</td></tr><tr><td>קטמין&nbsp;</td><td>תרופות לאומיות</td><td>בסין H20193336</td><td>100 מ"ג/ק"ג להרדמה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>CX43</td><td></td></tr><tr><td>תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT)</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אשלגן פרוציניד</td><td>סיגמא</td><td>14038-43-8</td><td>הוסף מים מזוקקים ל-50 מ"ל</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא</td><td>57-50-1</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין& נ.ב.פ;</td><td>Y-S ביוטכנולוגיה</td><td>YS-(BC)-2842</td><td>15 מ"ג/ק"ג להרדמת</td></tr><tr><td>קסילנים</td><td>סיגמא</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת שקיעת ברזל במוחם של עכברי 5xfad על ידי צביעת perls/dab

Assessing Iron Deposition in the Brains of 5xFAD Mice by Perls'/DAB Staining

כדי לחקור את התפלגות והצטברות הברזל במודל עכבר של אלצהיימר, ביצענו צביעה של Perls/DAB בפרוסות סגיטליות של עכברי 5xFAD בני 8 חודשים. כפי שמוצג באיור 3, אותות הצביעה של Perls/DAB נצפו בעכברים בני 8 חודשים 5xFAD ובעכברים מסוג פרא ובעכברים בני חודשיים. בעכברי 5xFAD נצפו אותות צביעה גבוהים של Perls/DAB בהיפוקמפוס ובקליפת המוח, במיוחד בתת-ההיפוקמפוס. עכברים מסוג בר שימשו כבקרות שליליות מאומתות; שתי הקבוצות בנות 2 ו-8 חודשים הראו אותות שקיעת ברזל מוחלשים באופן משמעותי (איור 3A<...

הערכת שקיעת ברזל במוחם של עכברי 5xFAD על ידי צביעת Perls/DAB

Alzheimer's disease (AD), a common neurodegenerative disease, is the leading cause of dementia in the elderly. Iron deposition is closely linked to the ...

assessing-iron-deposition-brains-5xfad-mice-perls-dab

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אחד המאפיינים הפתולוגיים של אלצהיימר היא היווצרות של חלבון הפלאק עמילואיד β חיובי מדלקת עצבים. בפרוטוקול זה נתאר שתי שיטות לאיתור פלאק מדלקת עצבים בעכברים הטרנסגניים מודל AD: זיהוי immunohistochemical באמצעות ABC ו-DAB שיטת זיהוי פלורסנט באמצעות שיטת מכתים S thioflavin.

איתור של הפלאק מדלקת עצבים במודל מחלת אלצהיימר עכבר

מקור: Mukherjee, K., et. al. ניתוח המיטוכונדריה במוח באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקת פנים סדרתית. J. Vis. exp. (2016){סרטון זה מדגים את ההכנה,  הדמיה וניתוח של רקמת מוח של עכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק בלוק-פנים סדרתי (SBFSEM) כדי להמחיש אולטרה-מבנה מיטוכונדריאלי, המאפשר מיפוי מדויק של המורפולוגיה וההתפלגות המרחבית שלהם בתאים עצביים אקסונליים ודנדריטיים.

 הדמיה של מיטוכונדריה עצבית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק-פנים סדרתי

כתב יד זה מתאר הליך לעקוב אחר השיפוץ של cerebrovasculature במהלך הצטברות פלאק עמילואיד in vivo באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ אורך. הכנה הגולגולת דליל מאפשר הדמיה של צבעי ניאון כדי להעריך את התקדמות הנזק כלי דם במוח במודל של עכברים של מחלת אלצהיימר.

אֹרכִּי<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של Cerebrovasculature: רלוונטיות למחלות של מערכת העצבים המרכזית

כמותית מיפוי מתכות ברקמות ידי אבלציה ליזר - אינדוקטיבי פלזמה מצמידה - ספקטרומטריית מסה (LA-ICP-MS) הנה שיטה אנליטית רגישה שיכול לספק תובנה חדשה איך מתכות להשתתף בתהליכי פונקציה ומחלות נורמלים. כאן אנו מתארים פרוטוקול הדמית מתכות כמותית בסעיפים דקים של רקמת נוירולוגית עכבר.

מתכות הדמיה ברקמת המוח על ידי אבלציה לייזר - פלזמה מצמידים אינדוקטיבי - ספקטרומטריית מסה (LA-ICP-MS)

במחקר זה, אנו מציגים הליך קל ויעיל להערכת שיבוש מחסום הדם - מוח ניווניות בתנאים. כדי להשיג את המטרה שלנו, אנחנו חדורים משקל מולקולרי גבוה fluorescein isothiocyanate מתויג (FITC)-אלבומין לתוך וריד הצוואר העכבר הווריד וההערכה שלה דליפה לתוך parenchyma המוח על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ.

הערכה של חדירות מחסום הדם - מוח על ידי עירוי תוך ורידי של התווית על-ידי FITC אלבומין במודל של עכברים של מחלות ניווניות

פרוטוקול זה מתאר גישה יעילה וניתנת לשחזור למחקרים היסתולוגיים במוח העכבר, כולל זלוף, חתך מוחי, חיסונים צפים חופשיים, הרכבת רקמות והדמיה.

חיסון חופשי של מוחות עכבר

מאמר זה מדגים כיצד להכין ולנהל ברזל איזוטופי לא-רדיואקטיבי הקשור לטרנספרין למחקרים על הובלת ברזל בהריון עכבר. כמו כן מתוארת הגישה לכימות ברזל איזוטופי בתאי fetoplacental.

הובלת ברזל כמותית על פני שליבת העכבר In Vivo באמצעות איזוטופים של ברזל לא רדיואקטיבי

כאן, פרוטוקול למדידת התוכן ברזל שאינו heme ברקמות בעלי חיים מסופק, באמצעות בדיקה צבעונית פשוטה ומבוססת היטב שניתן ליישם בקלות ברוב המעבדות.

מדידה של תוכן ברזל רקמות שאינן Heme באמצעות בדיקת צבע מבוססת Bathophenanthroline

הפרוטוקול הנוכחי מתאר ומשווה את ההליך לביצוע ניתוח של אזור מלא או תת-אזור עניין של מקטעי מוח של עכברי sagittal כדי לכמת את עומס העמילואיד-בטא במודל העכבר המהונדס APP/PS1 של מחלת אלצהיימר.

כימות מלא לעומת תת-אזורי של עומס עמילואיד-בטא על מקטעי מוח של עכבר

לידה מוקדמת (לידה &lt; שבוע 37) היא בעיה בריאותית עולמית דחופה עם אפשרויות מניעה וטיפול לא אופטימליות. אנו מציגים מודל עכברי של לידה מוקדמת הנגרמת על ידי זיהום חיידקי בנרתיק ומתארים כיצד לנתח את התחלואה והתמותה של היילודים כתוצאה מכך.

מידול זיהום נרתיקי עולה, לידה מוקדמת ותחלואה בילודים בעכברים

למדו להעריך שקיעת ברזל במוח עכברי 5xFAD באמצעות צביעת Perls/DAB. פרוטוקול זה מספק שיטה רגישה לזיהוי ברזל בהיפוקמפוס ובקורטקס, ומאפשר השוואה בין דגמי אלצהיימר לעכברים פראיים.

הערכת שקיעת ברזל במוחם של עכברי 5xFAD על ידי צביעת Perls/DAB

גלה סרטונים נוספים