Name: הערכה של גנים חריגים הקשורים לגדילה של תאי גזע ואב המטופויאטיים על ידי שילוב של טכנולוגיית CRISPR/Cas9 עם ספירת תאים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: חקור זיהוי גנים קריטיים להתרבות חריגה של תאי גזע ואב המטופויאטיים באמצעות CRISPR/Cas9 וספירת תאים CCK-8. השיטה מסייעת לחוקרים לחשוף מטרות תרפויטיות ללוקמיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo.</a> Nat Rev Genet. 21 (9), 541-554 (2020).</li>
<li>Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cells%3A+Concepts%2C+definitions%2C+and+the+new+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cells: Concepts, definitions, and the new reality.</a> Blood. 125 (17), 2605-2613 (2015).</li>
<li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell%3A+Self-renewal+versus+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell: Self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 2 (6), 640-653 (2010).</li>
<li>Vetrie, D., Helgason, G. V., Copland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+leukaemia+stem+cell%3A+Similarities%2C+differences+and+clinical+prospects+in+cml+and+aml%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The leukaemia stem cell: Similarities, differences and clinical prospects in cml and aml.</a> Nat Rev Cancer. 20 (3), 158-173 (2020).</li>
<li>Chopra, M., Bohlander, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+of+origin+and+the+leukemia+stem+cell+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Chromosomes+Cancer%22%5BJournal%5D)">The cell of origin and the leukemia stem cell in acute myeloid leukemia.</a> Genes Chromosomes Cancer. 58 (12), 850-858 (2019).</li>
<li>Cox, C. V., Diamanti, P., Evely, R. S., Kearns, P. R., Blair, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CD133+on+leukemia-initiating+cells+in+childhood+all%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Expression of CD133 on leukemia-initiating cells in childhood all.</a> Blood. 113 (14), 3287-3296 (2009).</li>
<li>González-García, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-7R+is+essential+for+leukemia-initiating+cell+activity+of+T-cell+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">IL-7R is essential for leukemia-initiating cell activity of T-cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 134 (24), 2171-2182 (2019).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-rna-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-rna-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Porteus, M. H., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+nucleases+stimulate+gene+targeting+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chimeric nucleases stimulate gene targeting in human cells.</a> Science. 300 (5620), 763-763 (2003).</li>
<li>Wang, S. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+and+future+perspective+of+CRISPR%2FCas9+gene+editing+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Current applications and future perspective of CRISPR/Cas9 gene editing in cancer.</a> Mol Cancer. 21 (1), (2022).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIT-Cas9%3A+A+CRISPR%2Fcas9+genome-editing+device+under+tight+and+effective+drug+control%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">HIT-Cas9: A CRISPR/cas9 genome-editing device under tight and effective drug control.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 13, 208-219 (2018).</li>
<li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nat Protoc. 12 (4), 828-863 (2017).</li>
<li>Kühn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+gene+targeting+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Inducible gene targeting in mice.</a> Science. 269 (5229), 1427-1429 (1995).</li>
<li>Arnheiter, H., Skuntz, S., Noteborn, M., Chang, S., Meier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+with+intracellular+immunity+to+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice with intracellular immunity to influenza virus.</a> Cell. 62 (1), 51-61 (1990).</li>
<li>Randall, T. D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+changes+induced+at+the+clonal+level+in+hematopoietic+stem+cells+after+5-fluorouracil+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional changes induced at the clonal level in hematopoietic stem cells after 5-fluorouracil treatment.</a> Blood. 89 (10), 3596-3606 (1997).</li>
<li>Gavrilescu, L. C., Van Etten, R. A. Murine retroviral bone marrow transplantation models for the study of human myeloproliferative disorders. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGavrilescu%2C+LC+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 14 (Unit 14.10), (2008).</li>
<li>Pinello, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+CRISPR+genome-editing+experiments+with+CRISPResso%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Analyzing CRISPR genome-editing experiments with CRISPResso.</a> Nat Biotechnol. 34 (7), 695-697 (2016).</li>
<li>Cai, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+long+noncoding+RNA+CRISPRi+screen+identifies+PRANCR+as+a+novel+regulator+of+epidermal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">A genome-wide long noncoding RNA CRISPRi screen identifies PRANCR as a novel regulator of epidermal homeostasis.</a> Genome Res. 30 (1), 22-34 (2020).</li>
<li>Ng, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-mediated+modeling+and+functional+validation+of+candidate+tumor+suppressor+genes+in+small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">CRISPR-mediated modeling and functional validation of candidate tumor suppressor genes in small cell lung cancer.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 117 (1), 513-521 (2020).</li>
<li>Crowther, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR-Cas9+screening+reveals+ubiquitous+T+cell+cancer+targeting+via+the+monomorphic+MHC+class+i-related+protein+MR1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR-Cas9 screening reveals ubiquitous T cell cancer targeting via the monomorphic MHC class i-related protein MR1.</a> Nat Immunol. 21 (2), 178-185 (2020).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+labeling+of+genomic+loci+with+dCas9+and+engineered+sgRNAs+using+CRISPRainbow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed labeling of genomic loci with dCas9 and engineered sgRNAs using CRISPRainbow.</a> Nat Biotechnol. 34 (5), 528-530 (2016).</li>
<li>Szlachta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+knockout+screening+identifies+combinatorial+drug+targets+in+pancreatic+cancer+and+models+cellular+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">CRISPR knockout screening identifies combinatorial drug targets in pancreatic cancer and models cellular drug response.</a> Nat Commun. 9 (1), 4275(2018).</li>
<li>Baeten, J. T., Liu, W., Preddy, I. C., Zhou, N., Mcnerney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crispr+screening+in+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+reveals+an+enrichment+for+tumor+suppressor+genes+within+chromosome+7+commonly+deleted+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Crispr screening in human hematopoietic stem and progenitor cells reveals an enrichment for tumor suppressor genes within chromosome 7 commonly deleted regions.</a> Leukemia. 36 (5), 1421-1425 (2022).</li>
<li>Korkmaz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genetic+screens+for+enhancer+elements+in+the+human+genome+using+crispr-cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Functional genetic screens for enhancer elements in the human genome using crispr-cas9.</a> Nat Biotechnol. 34 (2), 192-198 (2016).</li>
<li>Heckl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+mouse+models+of+myeloid+malignancy+with+combinatorial+genetic+lesions+using+CRISPR-Cas9+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Generation of mouse models of myeloid malignancy with combinatorial genetic lesions using CRISPR-Cas9 genome editing.</a> Nat Biotechnol. 32 (9), 941-946 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 &mu; m קרום מיקרוסינון</td><td>Sartoriu</td><td>16533K-1</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינור EP</td><td>LABLEAD</td><td>MCT-150-CLD-1</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 10 ס"מ</td><td>קורנינג</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינור</td><td>LABLEAD</td><td>LXG1500</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td></td><td></td><td></td>סטרילי</tr><tr><td>2x מדויק Taq Master Mix (צבע פלוס)</td> <td>AG11010</td> <td>ביולוגיה מדויקת</td><td>עבור PCR מושבה</td></tr><tr><td>צינור 50 מ"ל</td><td>LABLEAD</td><td>LXG5000</td><td></td></tr><tr><td>5-Fluorouracil</td><td>Sigma</td><td>F6627-1</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 6 בארות</td><td>קורנינג</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>70 ומיקרו; מסננת תא m</td><td>Falcon&reg;</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 96 בארות</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lysis Buffer</td><td>Leagene</td><td>CS0001</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>BIODEE</td><td>DE0010</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Solarbio</td><td>A8180</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems Thermal Cyclers עבור PCR</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting Kit-8</td><td>Bimake</td><td>B34304</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>אפנדורף</td><td>צנטריפוגה 5810R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 אינקובטור</td><td>תרמו מדעי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>DNA Clean& רכז-5</td><td>ZYMO</td><td>D4014</td><td></td></tr><tr><td>Dneasy דם & ערכת Tissure</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I (BsmbI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>ExCell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 9.3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK-293T</td><td>ATCC; וירג'יניה, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPEs</td><td>Sigma</td><td>V900477</td><td></td></tr><tr><td>KOD-Plus-Neo</td><td>TOYOBO</td><td>KOD-401</td><td></td></tr><tr><td>lentiGuide-Puro</td><td>Addgene</td><td>52963</td><td>וקטור עמוד השדרה</td></tr><tr><td>עכברי LSL-Cas9</td><td>מודל Animal מרכז המחקר של אוניברסיטת נאנג'ינג&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר ספיגת מיקרו-פלטות</td><td>T002249 BIO-RAD</td><td>xMark&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Nacl</td><td>Rhawn</td><td>R019772</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>P1003</td><td></td></tr><tr><td>PEI</td><td>Proteintech</td><td>B600070</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין, 100x</td><td>Solarbio</td><td>P1400</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G פלסמיד</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>פוליברן</td><td>Beyotime</td><td>C0351</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוליאינוסינית-פוליציטידילית מלח נתרן</td><td>Sigma</td><td>P1530</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>RecombinantMurineIL-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13-10ug</td><td></td></tr><tr><td>RecombinantMurineIL-6</td><td>Peprotech</td><td>216-16-2ug</td><td></td></tr><tr><td>RecombinantMurineSCF</td><td>Peprotech</td><td>250-03-10ug</td><td></td></tr><tr><td>אגרוז רגיל</td><td>BIOWEST</td><td>BY-R0100</td><td></td></tr><tr><td>שרימפס פוספטאז אלקליין (rSAP)</td><td>NEB</td><td>M0371S</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר SpectraMax QuickDrop אולטרה-מיקרו</td><td>MOLECULAR DIVICES</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stbl3 תאים מוכשרים</td><td>BioMed</td><td>BC108-01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>T4 פולינוקלאוטיד קינאז</td><td>NEB</td><td>M0201L</td><td></td></tr><tr><td>T4-Ligase</td><td>Takara</td><td>2011B</td><td></td></tr><tr><td>TIANprep ערכת מיני פלסמיד מהירה TIANGEN</td><td></td><td>DP105-03</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפאן</td><td>LABLEAD</td><td>C0040-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>טריפטון</td><td>OXOID</td><td>LP0042</td><td></td></tr><tr><td>WEHI-CM</td><td>נאנג'ינג פוקסאי ביוטכנולוגיה&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CBP50079 תמצית שמרים</td><td>אוקסואיד</td><td>LP0021</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה של גנים חריגים הקשורים לגדילה של תאי גזע ואב המטופויאטיים על ידי שילוב של טכנולוגיית crispr/cas9 עם ספירת תאים

Evaluation of Abnormal Growth-related Genes of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Combining CRISPR/Cas9 Technology with Cell Counting

השפעת נוקאאוט Trp53 על יכולת ההתפשטות של HSPCs של עכברים כאן, השתמשנו בנוקאאוט Trp53 כדוגמה כדי להדגים את הפרוטוקול הזה. כדי לחקור את ההשפעה של נוקאאוט Trp53 על יכולת ההתפשטות של HSPCs בעכברים, השתמשנו בטרנספקציה לנטי-ויראלית כדי להכניס Trp53 sgRNA לתאי מח עצם המבטאים Cas9 המועשרים ל-HSPCs לאחר טיפול ב-5-FU. במקביל, sgRNAs לא קשורים הועברו לתאי מח עצם מחברי המלטה כדי לשמש כקבוצת ביקורת. לאחר מכן התאים שעברו טרנספטציה תורבתו במשך 0,...

הערכה של גנים חריגים הקשורים לגדילה של תאי גזע ואב המטופויאטיים על ידי שילוב של טכנולוגיית CRISPR/Cas9 עם ספירת תאים

Hematopoietic stem cells possess the ability for long-term self-renewal and the potential to differentiate into various types of mature blood cells. ...

evaluation-abnormal-growth-related-genes-hematopoietic-stem

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

ג'ין יישוב עריכה באמצעות CRISPR/Cas9 הנחתה במידה רבה את ההבנה של פונקציות ביולוגיות של גנים. כאן, אנו מנצלים את המתודולוגיה CRISPR/Cas9 כדי דגם calreticulin מוטציות בתאים hematopoietic תלויי-ציטוקין לשם פעילותם oncogenic למידה.

שימוש CRISPR/Cas9 ג'ין עריכה כדי לחקור את פעילות Oncogenic Calreticulin מוטציה בתאים Hematopoietic תלויי ציטוקין

עבור פרוטוקול מהיר CRISPR/Cas9-מתווכת ' שיבוש גנטי עכבר, התאים hematopoietic העיקרי של האדם מתואר במאמר זה. Cas9-sgRNA ribonucleoproteins הם הציגו ויה אלקטרופורציה עם sgRNAs שנוצר דרך במבחנה שעתוק ו Cas9 מסחרי. יעילות העריכה גבוהה מושגות עם זמן מוגבל ועלות פיננסיים.

שיבוש גנטי יעילים ביותר מאתר ואנושי Hematopoietic ובתאים מאת CRISPR/Cas9

כתב יד זה מתאר שיטה CRISPR-Cas9 מבוססי מקובצים באופן קבוע Interspaced קצר Palindromic חוזר (CRISPR) לחקירה פשוט ומהיר של התפקיד של גנים מרובים המועמד בהתפשטות תאים לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) ב במקביל. טכניקה זו היא מדרגית, יכול להיות מיושם במבנים אחרים סרטן התא גם כן.

החקירה של תלות גנטית באמצעות מבחני תחרות המבוססות על CRISPR-Cas9

ספרייה CRISPR/sgRNA הוחל כדי לחקור חלבונים. עם זאת, הכדאיות של ספרייה sgRNA לחשוף את הפונקציה של גבול CTCF ב הכונה נשאר נחקרו. כאן, אנו מתארים ספרייה ספציפית sgRNA לוקוסים HOX התירי את הפונקציה של גבולות CTCF HOX לוקוסים.

HOX לוקוסים Focused CRISPR/sgRNA ספריית הקרנת זיהוי קריטי CTCF גבולות

תיאר הם פרוטוקולים עבור עריכת הגנום יעיל מאוד של גזע המטפאות מורקיים ומחולל קדמון (HSPC) על ידי מערכת CRISPR/Cas9 כדי לפתח במהירות מערכות מודל העכבר עם המטפאות ספציפיים שינויים גנים.

לנטינגיו CRISPR/Cas9 בתיווך הגנום עריכה לחקר התאים המטפאות במודלים למחלות

מסירה ישירה של טרום התאספו Cas9/מדריך RNA ribonuאופאנפרוטאין מתחמי הוא אמצעי מהיר ויעיל לעריכת הגנום בתאי המטפאות. כאן, אנו מנצלים את הגישה הזאת כדי למחוק משתיק RUNX1 ביטרוניק ולבחון את התגובות הטרנדיות בתאי OCI-AML3 לוקמיה.

חקירת התפקיד הטרנססאני של משתיק הRUNX1 נית על ידי CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein בתאי לוקמיה מיאלואיד חריפה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הליך אופטימלי של תרבית גזע ותאי אב המטופויאטיים (HSPC) לחריטה חזקה של תאים שעברו עריכה גנטית in vivo.

עריכת גנים CRISPR/Cas9 של תאי גזע ותאי אב המטופויאטיים ליישומי ריפוי גנטי

אסטרטגיות חדשניות למודל נאמן של מוטציות סומטיות בתאי גזע ותאי אב המטופויאטיים (HSPCs) נחוצות כדי לחקור טוב יותר ביולוגיה של תאי גזע המטופויאטיים וממאירויות המטולוגיות. כאן מתואר פרוטוקול למודל מוטציות רווח הטרוזיגוטיות ב-HSPCs על ידי שילוב השימוש ב-CRISPR/Cas9 והתמרה כפולה של תורמי rAAV.

הנדסת מוטציות הטרוזיגוטיות אונקוגניות בתאי גזע המטופויאטיים אנושיים ובתאי אב

השיטה המוצגת מתארת את יצירתו של נוקאאוט גנטי בתיווך קריספר בקו תאי גזע עובריים אנושיים (hESC) H9, המבטא ביציבות sgRNA המכוון לגן L2HGDH באמצעות מערכת העברת גנים בתיווך לנטיויראלי יעילה ביותר.

CRISPR-Cas9 תיווך מחיקת גנים בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים שגודלו בתרבית בתנאים נטולי הזנה

פיתחנו פרוטוקול סקר CRISPR-Cas9 אופטימלי לתאי CAR T ראשוניים. על ידי הפחתת העברת ה-gDNA באמצעות עיכול אנזימטי ומשיכת קלטת sgRNA, גישה זו ממזערת ארטיפקטים של PCR, ומבטיחה זיהוי מדויק של sgRNA וזיהוי חזק של מטרות גנים פונקציונליות.

שיפור מסכי CRISPR-Cas9 בתאי CAR T – שיטה משופרת להכנת ספרייה

חקור זיהוי גנים קריטיים להתרבות חריגה של תאי גזע ואב המטופויאטיים באמצעות CRISPR/Cas9 וספירת תאים CCK-8. השיטה מסייעת לחוקרים לחשוף מטרות תרפויטיות ללוקמיה.

הערכה של גנים חריגים הקשורים לגדילה של תאי גזע ואב המטופויאטיים על ידי שילוב של טכנולוגיית CRISPR/Cas9 עם ספירת תאים

גלה סרטונים נוספים