Name: גישה לא ויראלית ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים חולפים באמצעות mRNA לאימונותרפיה לסרטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: למד ליצור תאי T קולטני אנטיגן כימריים חולפים באמצעות mRNA ללא וירוס לאימונותרפיה לסרטן. שיטה זו מציעה גישה בטוחה וחסכונית יותר לטיפול בתאי T מודרכים נגד גידולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>צבע כדאיות 7-AAD&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Novocyte זרימה ציטומטר</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V בינוני</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC עז אנטי אנושי IgG F(ab')2 נוגדן</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>BglII אנזים הגבלה</td><td>ניו אינגלנד BioLabs (NEB)</td><td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3&acute;-O-Me-m7G(5')ppp(5')G מבנה כובע RNA אנלוגי</td><td>NEB</td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, גלוקוז גבוה</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28 חרוזים</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td>ערכת סינתזת RNA <td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe SP6 New</td><td>England BioLabs (NEB)</td> <td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>Human IL-2 חלבון רקומביננטי</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>מילניום סמני RNA</td><td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Monarch RNA ערכת ניקוי (500 &mu; ז)</td> <td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methylpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר טרנספקציה ניאון</td><td>Invitrogen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>מערכת העברת ניאון 100-&mu; L Kit</td><td>Invitrogen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 בינוני</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA (0.05%), פנול אדום</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure פנול:כלורופורם:איזואמיל אלכוהול (25:24:1, v/v)</td><td>Invitrogen</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence מכשיר ניתוח תאים בזמן אמת (RTCA)</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II פלסמיד ערכת Midiprep Zymo</td><td>Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

גישה לא ויראלית ליצירת תאי t קולטני אנטיגן כימריים חולפים באמצעות mrna לאימונותרפיה לסרטן

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

בנינו מכונית ממוקדת HER2 מהדור השני המכילה scFv שנגזר מהנוגדן החד-שבטי המואנש נגד HER2 (mAb) 4D547, אזור טרנסממברנלי, ותחום קוסטימולטורי תוך-תאי 4-1BB ואחריו תחום ההפעלה CD3ζ (איור 1A). רצף הדנ"א המקודד את המכונית הכיל מקדם SP6 בגודל 5' כדי להניע שעתוק של ה-mRNA במבחנה של CAR (איור 1B). אורכו של ה-mRNA של CAR היה כ-2 קילו-בתים, והוא אומת על-ידי אלקטרופורזה בג'ל (איור 1C).
...

גישה לא ויראלית ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים חולפים באמצעות mRNA לאימונותרפיה לסרטן

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

a-nonviral-approach-to-generate-transient-chimeric-antigen-receptor-t

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מדגים טכניקה לייצור קולטן אנטיגן כימרי (CAR) תאי T ex vivo. תאי T אנושיים מודגרים בחרוזים מגנטיים המצופים בנוגדנים נגד CD3 ונגד CD28, יחד עם מדיום בתוספת אינטרלוקין-2 (IL-2), המוביל להפעלה ושגשוג של תאי T. מוצגים וקטורים לנטי-ויראליים טרנסגניים, המאפשרים לרנ"א המהונדס להשתלב בגנום המארח ולבטא את הטרנסגן. התוצאה היא שתאי T המומרים מבטאים קולטני אנטיגן כימריים (CARs) על פני השטח שלהם. תאי T נקצרים בנקודות זמן מוגדרות כדי להעריך ביטוי CAR ושימור בהקפאה.

טכניקת Ex Vivo לייצור תאי T קולטני אנטיגן כימריים

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת תאי T מסוג קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לגידול (CAR). וקטורים רטרו-ויראליים הנושאים RNA מהונדס מעורבבים עם תאי טחול בתווך בתוספת אינטרלוקין-2 כדי לקדם הישרדות ושגשוג של תאי T. לאחר מכן התערובת מועברת לצלחת המצופה במקטעי פיברונקטין אנושיים רקומביננטיים וצנטריפוגה כדי להקל על איחוי הנגיף עם התא, מה שמאפשר לרנ"א להשתלב בגנום המארח ולייצר מכוניות הקשורות לפני השטח המכוונות לאנטיגן הגידול.

טכניקת Ex Vivo ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים ספציפיים לגידול

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת תאי T של קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לאנטיגן (CAR) באמצעות התמרה רטרו-ויראלית. תאי מורין CD8+ T פעילים מתווספים לצלחת מיקרווול המצופה בשברי פיברונקטין רקומביננטיים. לאחר מכן מוצגים וקטורים רטרו-ויראליים המכילים RNA מהונדס המקודד קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לאנטיגן (CAR), והלוחית עוברת צנטריפוגה כדי להקל על הטרנסדוקציה. לאחר הדגירה, התאים המומרים מבטאים CARs ספציפיים לאנטיגן על פני השטח שלהם.

טכניקה ליצירת תאי CAR T ספציפיים לאנטיגן

המשלב בפרוטוקול הנוכחי לתא בודד לזווג אדם TCR אלפא, ביתא שרשרת רצף עם אווירודינמית דור תואם במבחנה ויוו TCR והביטוי retroviral וקטורים.

יעיל בידוד TCR תא בודד, דור של וקטורים Retroviral עבור במבחנה In Vivo הביטוי של האדם TCRs

אנו מתארים גישה מהימנה ליצור הקולטן אנטיגן הצ (רכב) T תאים ולבדוק בידול שלהם ותפקוד מבחנה בvivo.

ייצור בצ הקולטן אנטיגן (רכב) T תאים לטיפול חיסוני המאמצת

פרוטוקול זה מתאר את המתודולוגיה למעקב לא פולשני אחר תאי T שהונדסו גנטית כדי לבטא קולטני אנטיגן כימריים ב- vivo עם פלטפורמה זמינה קלינית.

הדמיה דינמית של תאי T קולטן אנטיגן כימרי עם [18F]טטרפלואורובורט טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים/טומוגרפיה ממוחשבת

מאמר זה מפרט את תהליך הייצור של תאי T קולטני אנטיגן כימריים לשימוש קליני, במיוחד באמצעות מעבד תאים אוטומטי המסוגל לבצע התמרה נגיפית וטיפוח של תאי T. אנו מספקים המלצות ומתארים מלכודות שיש לקחת בחשבון במהלך תהליך הפיתוח והיישום של ניסוי קליני בשלב מוקדם.

ייצור תאי T של קולטן אנטיגן כימרי על מעבד תאים אוטומטי

פרוטוקול זה מייעל את הייצור הווקטורי הרטרו-ויראלי ואת התמרת תאי T מורין, ומאפשר ייצור יעיל של תאי CAR-T בעכבר.

ייצור יעיל של תאי קולטן אנטיגן כימרי (CAR)-T

פרוטוקול זה מספק זרימת עבודה יעילה ליצירה ובדיקה של תאי T רגולטוריים של קולטני אנטיגן כימריים אנושיים (CAR Tregs).

יצירת תאי T רגולטוריים של קולטן אנטיגן כימרי אנושי

פרוטוקול מפורט מסופק לשימוש בטכנולוגיית CRISPR/Cas9 כדי להשיג דפיקה ממוקדת יעילה ביותר של מבנים גדולים ומולטי-ציסטרוניים בתאי T אנושיים ראשוניים באמצעות מסלול תיקון ה-DNA בתיווך הומולוגיה (HMEJ). תאי T המהונדסים עם פרוטוקול זה הניתן להתאמה ל-cGMP שומרים על התרחבות תאים מצוינת, ציטוטוקסיות וייצור ציטוקינים.

הנדסה לא ויראלית של תאי T אנושיים ראשוניים באמצעות אינטגרציה ממוקדת בתיווך הומולוגיה של תבניות DNA גדולות

פרוטוקול זה מתאר את השלבים החיוניים לגידול תאי T ראשוניים, כולל בידדם, הפעלה, התרחבותם וטרנספקציה חולפת באמצעות אלקטרופורציה של mRNA. בנוסף, מוצע תהליך עבודה ופאנל נוגדנים לניתוח ציטומטרי זרימה של פנוטיפ, סמני הפעלה, כדאיות וביטוי קולטני אנטיגן כימרי (CAR).

בידוד, טיפוח והעברה חולפת של תאי T ראשוניים אנושיים ליצירת תאי T של קולטני אנטיגן כימריים (CAR)

למד ליצור תאי T קולטני אנטיגן כימריים חולפים באמצעות mRNA ללא וירוס לאימונותרפיה לסרטן. שיטה זו מציעה גישה בטוחה וחסכונית יותר לטיפול בתאי T מודרכים נגד גידולים.

גישה לא ויראלית ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים חולפים באמצעות mRNA לאימונותרפיה לסרטן

גלה סרטונים נוספים