Name: הערכת גלוטמין כמקור דלק למקרופאגים בנאדיות שנחשפו לאתנול כרוני באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: חקור את השפעת האתנול הכרוני על מטבוליזם המיטוכונדריה במקרופאגים אלבאולריים באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי. גלו כיצד גלוטמין משמש מקור דלק קריטי לנשימה מיטוכונדריאלית תחת טיפול באתנול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>אתנול פוגע בביו-אנרגטיקה של AM על ידי מעבר לנשימה תלוית גלוטמין

<ol><li>2021 National Survey on Drug Use and Health (NSDUH). Table 5.6A - Alcohol Use Disorder in Past Year: Among People Aged 12 or Older; by Age Group and Demographic Characteristics, Numbers in Thousands, 2021. , Substance Abuse and Mental Health Services Administration (SAMHSA). At
 <a target="_blank" href="https://www.samhsa.gov/data/sites/default/files/reports/rpt39441/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetTabsSect5pe2021.htm">https://www.samhsa.gov/data/sites/default/files/reports/rpt39441/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetTabsSect5pe2021.htm</a> (2021).</li>
<li>Everts, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nosocomial+pneumonia+in+adult+general+medical+and+surgical+patients+at+Christchurch+Hospital%5BTitle%5D)+AND+%22N+Z+Med+J%22%5BJournal%5D)">Nosocomial pneumonia in adult general medical and surgical patients at Christchurch Hospital.</a> N Z Med J. 113 (1111), 221-224 (2000).</li>
<li>de Roux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+alcohol+abuse+in+the+etiology+and+severity+of+community-acquired+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Impact of alcohol abuse in the etiology and severity of community-acquired pneumonia.</a> Chest. 129 (5), 1219-1225 (2006).</li>
<li>Moss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+sepsis%3A+race%2C+sex%2C+and+chronic+alcohol+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of sepsis: race, sex, and chronic alcohol abuse.</a> Clin Infect Dis. 41 (Suppl 7), S490-S497 (2005).</li>
<li>Fernandez-Sola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+alcohol+intake+as+a+risk+and+prognostic+factor+for+community-acquired+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">High alcohol intake as a risk and prognostic factor for community-acquired pneumonia.</a> Arch Intern Med. 155 (15), 1649-1654 (1995).</li>
<li>Yeligar, S. M., Harris, F. L., Hart, C. M., Brown, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+attenuates+ethanol-induced+alveolar+macrophage+oxidative+stress+and+dysfunction+by+downregulating+NADPH+oxidases%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glutathione attenuates ethanol-induced alveolar macrophage oxidative stress and dysfunction by downregulating NADPH oxidases.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (5), L429-L441 (2014).</li>
<li>Yeligar, S. M., Mehta, A. J., Harris, F. L., Brown, L. A., Hart, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+regulates+chronic+alcohol-induced+alveolar+macrophage+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor gamma regulates chronic alcohol-induced alveolar macrophage dysfunction.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 55 (1), 35-46 (2016).</li>
<li>Liang, Y., Harris, F. L., Brown, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+induced+mitochondrial+oxidative+stress+and+alveolar+macrophage+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Alcohol induced mitochondrial oxidative stress and alveolar macrophage dysfunction.</a> Biomed Res Int. 2014, 371593(2014).</li>
<li>Liang, Y., Harris, F. L., Jones, D. P., Brown, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+induces+mitochondrial+redox+imbalance+in+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Alcohol induces mitochondrial redox imbalance in alveolar macrophages.</a> Free Radic Biol Med. 65, 1427-1434 (2013).</li>
<li>Morris, N. L., Harris, F. L., Brown, L. A. S., Yeligar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+induces+mitochondrial+derangements+in+alveolar+macrophages+by+upregulating+NADPH+oxidase+4%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Alcohol induces mitochondrial derangements in alveolar macrophages by upregulating NADPH oxidase 4.</a> Alcohol. 90, 27-38 (2021).</li>
<li>Crotty, K. M., Kabir, S. A., Chang, S. S., Mehta, A. J., Yeligar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pioglitazone+reverses+alcohol-induced+alterations+in+alveolar+macrophage+mitochondrial+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Pioglitazone reverses alcohol-induced alterations in alveolar macrophage mitochondrial phenotype.</a> Alcohol Clin Exp Res (Hoboken). 48 (5), 810-826 (2024).</li>
<li>Demine, S., Renard, P., Arnould, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+uncoupling%3A+A+key+controller+of+biological+processes+in+physiology+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial uncoupling: A key controller of biological processes in physiology and diseases.</a> Cells. 8 (8), 795(2019).</li>
<li>Hill, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+cellular+bioenergetics+with+mitochondrial+quality+control+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Integration of cellular bioenergetics with mitochondrial quality control and autophagy.</a> Biol Chem. 393 (12), 1485-1512 (2012).</li>
<li>Chacko, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bioenergetic+Health+Index%3A+a+new+concept+in+mitochondrial+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">The Bioenergetic Health Index: a new concept in mitochondrial translational research.</a> Clin Sci (Lond). 127 (6), 367-373 (2014).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+mitochondrial+respiration+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+myeloid+progenitors+using+Seahorse+technology%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analyzing mitochondrial respiration of human induced pluripotent stem cell-derived myeloid progenitors using Seahorse technology.</a> STAR Protoc. 4 (1), 102073(2023).</li>
<li>Gu, X., Ma, Y., Liu, Y., Wan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+mitochondrial+respiration+in+adherent+cells+by+Seahorse+XF96+Cell+Mito+Stress+Test%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of mitochondrial respiration in adherent cells by Seahorse XF96 Cell Mito Stress Test.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100245(2021).</li>
<li>Plitzko, B., Loesgen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+oxygen+consumption+rate+%28OCR%29+and+extracellular+acidification+rate+%28ECAR%29+in+culture+cells+for+assessment+of+the+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of oxygen consumption rate (OCR) and extracellular acidification rate (ECAR) in culture cells for assessment of the energy metabolism.</a> Bio Protoc. 8 (10), e2850(2018).</li>
<li>Winnica, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+differences+in+the+airway+epithelium+of+lean+versus+obese+asthmatics+are+driven+by+nitric+oxide+and+reflected+in+circulating+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic differences in the airway epithelium of lean versus obese asthmatics are driven by nitric oxide and reflected in circulating platelets.</a> Antioxid Redox Signal. 31 (10), 673-686 (2019).</li>
<li>Nickens, K. P., Wikstrom, J. D., Shirihai, O. S., Patierno, S. R., Ceryak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioenergetic+profile+of+non-transformed+fibroblasts+uncovers+a+link+between+death-resistance+and+enhanced+spare+respiratory+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">A bioenergetic profile of non-transformed fibroblasts uncovers a link between death-resistance and enhanced spare respiratory capacity.</a> Mitochondrion. 13 (6), 662-667 (2013).</li>
<li>Mdaki, K. S., Larsen, T. D., Weaver, L. J., Baack, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+related+bioenergetics+profiles+in+isolated+rat+cardiomyocytes+using+extracellular+flux+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Age related bioenergetics profiles in isolated rat cardiomyocytes using extracellular flux analyses.</a> PLoS One. 11 (2), e0149002(2016).</li>
<li>Dranka, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+bioenergetic+function+in+response+to+oxidative+stress+by+metabolic+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Assessing bioenergetic function in response to oxidative stress by metabolic profiling.</a> Free Radic Biol Med. 51 (9), 1621-1635 (2011).</li>
<li>Chacko, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+defining+distinct+bioenergetic+profiles+in+platelets%2C+lymphocytes%2C+monocytes%2C+and+neutrophils%2C+and+the+oxidative+burst+from+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Methods for defining distinct bioenergetic profiles in platelets, lymphocytes, monocytes, and neutrophils, and the oxidative burst from human blood.</a> Lab Invest. 93 (6), 690-700 (2013).</li>
<li>Tyrrell, D. J., Bharadwaj, M. S., Jorgensen, M. J., Register, T. C., Molina, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cell+respirometry+is+associated+with+skeletal+and+cardiac+muscle+bioenergetics%3A+Implications+for+a+minimally+invasive+biomarker+of+mitochondrial+health%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Blood cell respirometry is associated with skeletal and cardiac muscle bioenergetics: Implications for a minimally invasive biomarker of mitochondrial health.</a> Redox Biol. 10, 65-77 (2016).</li>
<li>Shah-Simpson, S., Pereira, C. F., Dumoulin, P. C., Caradonna, K. L., Burleigh, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profiling+of+Trypanosoma+cruzi+life+stages+using+Seahorse+extracellular+flux+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biochem+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profiling of Trypanosoma cruzi life stages using Seahorse extracellular flux technology.</a> Mol Biochem Parasitol. 208 (2), 91-95 (2016).</li>
<li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> J Vis Exp. 46, e2511(2010).</li>
<li>Chance, B., Williams, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+enzymes+in+oxidative+phosphorylation.+I.+Kinetics+of+oxygen+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. I. Kinetics of oxygen utilization.</a> J Biol Chem. 217 (1), 383-393 (1955).</li>
<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Anal Chem. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li>
<li>Yeligar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PPARgamma+regulates+mitochondrial+structure+and+function+and+human+pulmonary+artery+smooth+muscle+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">PPARgamma regulates mitochondrial structure and function and human pulmonary artery smooth muscle cell proliferation.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 58 (5), 648-657 (2018).</li>
<li>Yeligar, S., Tsukamoto, H., Kalra, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-induced+expression+of+ET-1+and+ET-BR+in+liver+sinusoidal+endothelial+cells+and+human+endothelial+cells+involves+hypoxia-inducible+factor-1alpha+and+microrNA-199%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ethanol-induced expression of ET-1 and ET-BR in liver sinusoidal endothelial cells and human endothelial cells involves hypoxia-inducible factor-1alpha and microrNA-199.</a> J Immunol. 183 (8), 5232-5243 (2009).</li>
<li>Yeligar, S. M., Harris, F. L., Brown, L. A. S., Hart, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+reversal+of+post-transcriptional+alterations+implicated+in+alcohol-induced+alveolar+macrophage+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological reversal of post-transcriptional alterations implicated in alcohol-induced alveolar macrophage dysfunction.</a> Alcohol. 106, 30-43 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>צינור חרוטי 15 מ"ל&nbsp;</td><td>VWR אינטרנשיונל, בע"מ</td><td>21008-670</td><td>משמש להכנת ריכוזי מלאי של ריאגנטים הקשורים למיטוכונדריה.</td></tr><tr><td>2-מרקפטואתנול&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ' ושות'</td><td>M6250</td><td>משמש לטיפוח תאי MH-S.</td></tr><tr><td>מגרד תאים</td><td>Dot Scientific, Inc.</td><td>70-1180</td><td>משמש לגירוד תאי MH-S מצלוחיות T-75.</td></tr><tr><td>מכשיר רוזנת 3 FL: מונה תאים</td><td>של חברת פישר סיינטיפיק</td><td>AMQAF2000</td><td>משמש לספירת מספר תאי MH-S לצלחת לניסויים.</td></tr><tr><td>D-גלוקוז&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ' ושות'</td><td>G8270</td><td>משמש למדיום הבסיס של השטף החוץ-תאי.</td></tr><tr><td>חברת אתנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>4355720</td><td>טיפול ניסיוני בתאי MH-S.</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>מעבדות מחקר Sciencell</td><td>500</td><td>משמש לתרבית תאי MH-S.</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma Aldrich Co.</td><td>G1397</td><td>משמש לטיפוח תאי MH-S.</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td>משמש למדיום הבסיס של שטף חוץ-תאי.</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 10.2.3</td><td>תוכנת GraphPad</td><td>N/A</td><td>תוכנה לניתוח סטטיסטי. ניתן להורדה לאחר הרכישה בשעה https://www.graphpad.com/features.</td></tr><tr><td>תאי MH-S</td><td>אוסף תרבית מסוג אמריקאי</td><td>CRL-2019</td><td>קו תאי מקרופאגים מכתשית עכבר.</td></tr><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה&nbsp;</td><td>ארה"ב סיינטיפיק בע"מ</td><td>4036-3212</td><td>משמש להכנת ריכוזי עבודה של ריאגנטים הקשורים למיטוכונדריה.</td></tr><tr><td>Microsoft 365 Excel: תוכנת גיליונות אלקטרוניים ממוחשבת</td><td>של Microsoft</td><td>N/A</td><td>תוכנה לארגון נתונים וחישובי ביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית. ניתן להורדה לאחר הרכישה בשעה https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel.</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>חברת פישר סיינטיפיק</td><td>15140122</td><td>משמש לתרבית תאי MH-S.</td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח</td><td>VWR International, Inc.</td><td>45000-446</td><td>משמש לשטיפת תאי MH-S.</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>VWR אינטרנשיונל, בע"מ</td><td>45000-396</td><td>משמש לתרבית תאי MH-S.</td></tr><tr><td>תוכנת Seahorse Wave Pro: תוכנת מחשב לתכנון וניתוח בדיקות</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>לא ישים</td><td>המחשב מחובר למכשיר Seahorse XF Pro Analyzer. להורדה מ-&nbsp; https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/software-download-for-seahorse-wave-pro-software?productURL=https%3A%2F%2Fwww.agilent.com%2Fen%2Fproduct%2Fcell-analysis%2Freal-time-cell-metabolic-analysis%2Fxf-software%2Fseahorse-wave-pro-software-2007523.</td></tr><tr><td>מדיום בסיס סוסון ים XF: מדיום בסיס שטף חוץ-תאי, pH 7.4</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>103334-100</td><td>משמש להכנת מלאי וריכוזי עבודה של ריאגנטים הקשורים למיטוכונדריה ולתרבית תאי MH-S לפני ריצות ניסוי.</td></tr><tr><td>ערכת בדיקת מתח חמצון גלוטמין של סוסון ים XF</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>103674-100</td><td>מכיל מלאי BPTES, אוליגומיצין, FCCP ורוטנון/אנטימיצין A.</td></tr><tr><td>מנתח Seahorse XF Pro: ביו-אנלייזר שטף חוץ-תאי</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>לא ישים</td><td>ביו-אנלייזר שטף חוץ-תאי.</td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak: מחסניות Pak שטף חוץ-תאיות עם 96 בארות, לוחות מיקרו-תרבות שטף חוץ-תאיים עם 96 בארות ופתרון קליברנט</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>102416-100</td><td>משמש להכנת תאי MH-S לבדיקות באמצעות ביו-אנלייזר שטף חוץ-תאי.</td></tr><tr><td>פיפט סרולוגי&nbsp;</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה, בע"מ</td><td>sc-550678</td><td>משמש להסרת מדיה מתאי MH-S.</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>סיגמא אולדריץ' ושות'</td><td>S6014</td><td>משמש לטיפוח תאי MH-S.</td></tr><tr><td>נתרן פירובט&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ' ושות'</td><td>P4562</td><td>משמש למדיום הבסיס של השטף החוץ-תאי.</td></tr><tr><td>צלוחיות T-75</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה, בע"</td>מ<td>sc-200263</td><td>משמש לתרבית תאי MH-S.</td></tr></tbody></table>

הערכת גלוטמין כמקור דלק למקרופאגים בנאדיות שנחשפו לאתנול כרוני באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי

Assessment of Glutamine as a Fuel Source for Alveolar Macrophages Exposed to Chronic Ethanol Using an Extracellular Flux Bioanalyzer

חשיפה כרונית ל-EtOH מפחיתה את התלות בגלוטמין בתאי MH-S. גלוטמינוליזה הוא מסלול קריטי לנשימה מיטוכונדריאלית, ותומך בגלוטמין כמקור דלק חשוב לביו-אנרגטיקה תאית. כדי לקבוע אם חשיפה כרונית ל-EtOH משנה את התלות של תאי MH-S בגלוטמין כמקור דלק לנשימה מיטוכונדריאלית, תאי MH-S טופלו ללא בקרת EtOH (Con) או EtOH, ו-OCR נמדד לאורך זמן בתגובה לזריקות סדרתיות של ריאגנטים הקשורים לנשימה מיטוכונדריאלית. פרופילים ביואנרגטיים של OCR בתגובה להזרקות סדרתיות של אוליגומיצין (מעכב ATP סינתאז), FCCP (מפריד פרוטונים) ו-R/A (מעכבי קומפלקס מיטוכונדריאלי I וקומפלקס III, בהתאמה) משמשים לחישוב פרמטרים אחרים של ביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית, כגון נשימה מקושרת ATP, נשימה מקסימלית ויכולת נשימה רזרבי. כל הנתונים המוצגים הם שכפולים ביולוגיים נוספים של Con + media, Con + BPTES, ו- EtOH + media, EtOH + BPTES MH-S קבוצות ניסוי תאים שפורסמו ב- Crotty et al.11. כפי שניתן לראות באיור 2A, אוליגומיצין הפחית OCR עקב עיכוב של קומפלקס V, FCCP הגדיל את OCR עקב ביטול צימוד מיטוכונדריאלי של פוטנציאל הממברנה ודורATP 12 תלוי מיטוכונדריה, ו-R/A כיבה ביעילות OCR תלוי מיטוכונדריה. פרופילים אלה של תגובות ביו-אנרגטיות של OCR לזריקות סדרתיות עולים בקנה אחד עם המדריך למשתמש להערכת עקה מיטוכונדריאלית באמצעות ביואנלייזרשטף חוץ-תאי 13,14.
לאחר שנמדד OCR בסיסי בתאי MH-S שטופלו ב-Con וב-EtOH, הועמסה הזרקה של בקרת מדיה או BPTES, מעכב גלוטמינאז 1. Con + media לעומת Con + BPTES תאי MH-S ותאי EtOH + מדיה לעומת EtOH + BPTES תאי MH-S לא הדגימו הבדלים בפרופילים ביו-אנרגטיים של זיהוי תווים אופטי (OCR) (איור 2A). תאי EtOH + BPTES MH-S הראו ירידה בנשימה הבסיסית התלויה בגלוטמין בהשוואה ל- Con + BPTES (מדידה #4 בהשוואה למדידה #3 באיור 2A ובאיור 2B), דבר המצביע על כך ש- EtOH מפחית את חמצון הגלוטמין הבסיסי של תאי MH-S התורם לנשימה מיטוכונדריאלית. תאי EtOH + BPTES MH-S הציגו אובדן של נשימה מיטוכונדריאלית הקשורה לגלוטמין-תלויי-ATP בהשוואה ל-Con + BPTES (איור 2C). אף על פי שתאי EtOH + BPTES MH-S הדגימו אובדן קהה בנשימה מקסימלית תלוית גלוטמין בהשוואה ל-Con + BPTES (איור 2D), תאי MH-S של EtOH + BPTES הראו ירידה ביכולת הנשימה הרזרבית התלויה בגלוטמין בהשוואה ל-Con + BPTES (איור 2E). תוצאות אלה מצביעות על כך שלתאי EtOH MH-S יש את היכולת להיות תלויים יותר בגלוטמין לנשימה, כמו בעת סטרס עם FCCP, אך ייתכן שהם לא יוכלו לעשות זאת עקב עלייה בביקוש לגלוטמין העולה על הירידה בזמינות הביולוגית של גלוטמין.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67579/67579fig01.jpg"> 
איור 1: סקירה כללית של תהליך העבודה למדידת נשימה מיטוכונדריאלית תלוית גלוטמין וביו-אנרגטיקה בתאי MH-S, קו תאי מקרופאגים בנאדיות עכבר. חד-שכבות של תאי MH-S שגודלו בתרבית בארות צלחות מיקרו-תרבית של שטף חוץ-תאי (שלב 3.1) הודגרו עם תווך בסיס שטף חוץ-תאי עם תוספים שנוספו (שלב 3.2) ב-37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח שאינו CO2 למשך 30 דקות-1 שעות (שלב 3.4). תווך בסיס השטף החוץ תאי בתוספת תוספים (שלב 3.2) שימש לבקרת מדיה ולדילול ריכוזי העבודה של מעכב חמצון הגלוטמין BPTES לריכוז סופי של 3 מיקרומטר, אוליגומיצין מעכב V קומפלקס מיטוכונדריאלי לריכוז סופי של 0.5 מיקרומטר, קרבוניל ציאניד-p-טריפלואורומתוקסיפניל-הידרזון מיטוכונדריאלי עד ריכוז סופי של 0.5 מיקרומטר, ותרכובת מיטוכונדריאלית I ומעכבי קומפלקס III רוטנון/אנטימיצין A (R/A) עד 0.5 מיקרומטר ריכוז סופי לטעינת יציאות A-D במחסנית השטף החוץ-תאי העליונה (שלב 3.7). אסטרטגיית ההזרקה לערבוב, המתנה ומדידת זמני ריצת הניסוי באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי הייתה: זמן ערבוב של 3 דקות, זמן המתנה של 0 דקות ו-6 מדידות של זמן מדידה של 3 דקות עבור פורט A (בקרת מדיה או BPTES); זמן ערבוב של 3 דקות, זמן המתנה של 0 דקות ו-3 מדידות של זמן מדידה של 3 דקות עבור יציאה B (אוליגו); זמן ערבוב של 3 דקות, זמן המתנה של 6 דקות ושלוש מדידות של זמן מדידה של 3 דקות עבור יציאה C (FCCP); וזמן ערבוב של 3 דקות, זמן המתנה של 0 דקות ושלוש מדידות של זמן מדידה של 3 דקות עבור Port D (R/A). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67579/67579fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67579/67579fig02.jpg"> 
איור 2: אתנול כרוני (EtOH) מפחית נשימה מיטוכונדריאלית תלוית גלוטמין בתאי MH-S, קו תאי מקרופאגים בנאדיות עכבר. תאי MH-S לא טופלו (Con) או טופלו ב-EtOH (0.08%, 72 שעות), וקצב צריכת החמצן (OCR) לאורך זמן נמדד באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי לפני ואחרי הזרקה עם בקרת מדיה או מעכב חמצון גלוטמין (GLN) (3 מיקרומטר של BPTES), ואחריו הזרקות סדרתיות של מעכב V קומפלקס מיטוכונדריאלי (0.5 מיקרומטר של אוליגומיצין, אוליגו), uncoupler מיטוכונדריאלי (0.5 מיקרומטר של קרבוניל ציאניד-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone, FCCP), קומפלקס מיטוכונדריאלי I ומעכבי קומפלקס III (0.5 מיקרומטר של רוטנון/0.5 מיקרומטר של אנטימיצין A, R/A). (A) פרופילים ביו-אנרגטיים של OCR שימשו לחישוב נשימה בסיסית תלוית גלוטמין, (B) נשימה מקושרת ATP, (D) נשימה מקסימלית ו-(E) יכולת נשימה רזרבי. נקודות ליניאריות מייצגות אמצעים ± SEM (n = 4, #p &lt; 0.05 לעומת Con + media ו- *p &lt; 0.05 לעומת Con + BPTES, ANOVA חד-כיווני עם פוסט הוק של Tukey). עמודות מייצגות פירושו ± SEM (n = 4, *p &lt; 0.05 לעומת Con + BPTES, מבחן t של סטודנט). הנתונים המוצגים הם שכפולים ביולוגיים נוספים עבור קבוצות הניסוי של בקרת מדיה ו- BPTES של תאי MH-S לא מטופלים וכרוניים שנחשפו ל- EtOH, אשר פורסמו ב- Crotty et al.11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67579/67579fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Alveolar macrophages (AMs) are the first line of cellular defense in the lower airway against pathogens. However, chronic and excessive alcohol use ...

assessment-glutamine-as-fuel-source-for-alveolar-macrophages-exposed

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

פרופיל איזוטופים יציבים ידי ניתוח כרומטוגרפיה מסת הגז spectrometric של השטף מטבולית מתווך מתואר...

פרופיל איזוטופים יציבים של שטף מטבולית מתווך בשלב פיתוח למבוגרים Caenorhabditis elegans</em

פרוטוקול זה מספק גישה ביוכימית למדידת קצב החמצה חוץ-תאי (ECAR) וקצב צריכת חמצן (OCR) של תאים לוקמיים ראשוניים עם בדיקת שטף חוץ-תאי. הערכת הפרופיל המטבולי של תאים אלה מסייעת לאפיין את דרישותיהם, מה שמוביל לטיפול מותאם אישית.

בדיקת שטף חוץ-תאי: שיטה למדידת פרופיל מטבולי של תאים

תיאור כיצד לכייל את חיישני העברת פורסטר התהודה האנרגיה משולבים ביולוגיים (FIBS) בפרופיל מטבולי אתר מוצג. FIBS ניתן להשתמש כדי למדוד את הרמות תאית של מטבוליטים noninvasively סיוע בפיתוח מודלים מטבוליים והקרנת תפוקה הגבוהה של תנאי Bioprocess.

FIBS מאופשר פולשנית מטבולית פרופיל

תכנות מחדש מטבולי הוא מאפיין ותנאי מוקדם לקיטוב מקרופאגים M1 ו-M2. כתב יד זה מתאר מבחן למדידת פרמטרים בסיסיים של גליקוליזה ותפקוד מיטוכונדריאלי במקרופאגים שמקורם במח עצם של עכבר. ניתן ליישם כלי זה כדי לחקור כיצד גורמים מסוימים משפיעים על חילוף החומרים והפנוטיפ של המקרופאגים.

אפיון חילוף חומרים של מקוטב M1 והמקרופאגים נגזר מח עצם M2 באמצעות ניתוח תאי שטף בזמן אמת

גליקוליזה היא סמן מטבולי מגדיר במערכות ביולוגיות מרובות. ניטור גליקוליזה על ידי מדידת השטף החוץ-תאי של H+ הוא נפוץ, אך דורש תיקון כמותי וחד משמעי. כאן, אנו מדגימים כיצד לאסוף ולתקן נתוני שטף חוץ-תאי כדי להבחין בין מקורות נשימתיים וגליקוליטיים של החמצה חוץ-תאית.

מדידה וניתוח של תאי ייצור חומצה לקביעת glycolytic דרג

כאן, אנו מציגים פרוטוקול stepwise לחקור את הנשימה מיטוכונדריאלי והתפקוד glycolytic ב קנדידה אלביקנס באמצעות עם מנתח נוסף השטף.

ביו-energetics החקירה של קנדידה אלביקנס משתמש בזמן אמת חוץ-תאית השטף ניתוח

הפרוטוקולים מתארים שיטות כרומטוגרפיה נוזלית בעלות ביצועים גבוהים בשילוב עם אינדקס שבירה או זיהוי ספקטרומטרי מסה לחקר תגובות מטבוליות במערכות מורכבות המבוססות על ליסאט ללא תאים.

כרומטוגרפיה נוזלית בשילוב לאינדקס שבירה או זיהוי ספקטרומטרי מסה ליצירת פרופיל מטבוליט במערכות ללא תאים מבוססות ליסאט

בדיקת שטף מטבולי של תאים בזמן אמת מודדת את קצב צריכת החמצן ואת קצב ההחמצה החוץ-תאית, המתאים לייצור אדנוזין טריפוספט מיטוכונדריאלי וגליקוליטי, באמצעות חיישני pH וחמצן. כתב היד מסביר שיטה להבנת מצב האנרגיה של אוסטאובלסטים ואפיון ופרשנות של המצב הביו-אנרגטי התאי.

שימוש במנתח שטף מטבולי של תאים בזמן אמת לניטור ביו-אנרגיה של אוסטאובלסט

כאן, אנו מתארים בפירוט שיטות לחילוץ מקרופאגים ממח העצם, הטחול והלב האוטם, ולאחר מכן הערכת שטף מטבולי בתאים חיים.

ניתוח שטף מטבולי ex vivo במקרופאגים של הטחול והלב, ומונוציטים של מח העצם

פרוטוקול זה מתאר דרך חסכונית לביצוע בדיקת מאמץ גליקוליזית לכימות תכנות מחדש מטבולי במיקרוגליה ראשונית של העכברים. לאחר בידוד וגירוי דלקתי, נמדד קצב החמצה חוץ-תאית (ECAR) באמצעות מגיבים טריים ומותאמים ל-pH, ולאחר מכן נרמול חלבונים כדי לאפשר הערכה מדויקת וניתנת לשחזור של היסטים גליקוליטיים.

חקר גליקוליזה במיקרוגליה ראשונית באמצעות בדיקת שטף חוץ-תאית

חקור את השפעת האתנול הכרוני על מטבוליזם המיטוכונדריה במקרופאגים אלבאולריים באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי. גלו כיצד גלוטמין משמש מקור דלק קריטי לנשימה מיטוכונדריאלית תחת טיפול באתנול.

הערכת גלוטמין כמקור דלק למקרופאגים בנאדיות שנחשפו לאתנול כרוני באמצעות ביואנלייזר שטף חוץ-תאי

גלה סרטונים נוספים