Name: הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם דרוזופילה לאחר הסרת פופריום (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: למד הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם Drosophila לאחר הסרת פופריום. שיטה זו מאפשרת לחקור את דינמיקת צורת התאים האפיתליים ואת תפקיד המבנה הדמוי-פרתנון במורפוגנזה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הדמיה חיה מורחבת של מורפוגנזה של רגל גולם דרוזופילה ללא פופריום

<ol><li>Koto, A., Kuranaga, E., Miura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+regulation+of+Drosophila+IAP1+determines+caspase+functions+in+sensory+organ+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Temporal regulation of Drosophila IAP1 determines caspase functions in sensory organ development.</a> J Cell Biol. 187 (2), 219-231 (2009).</li>
<li>Ninov, N., Martín-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+epidermal+morphogenesis+during+the+development+of+the+adult+abdominal+epidermis+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live imaging of epidermal morphogenesis during the development of the adult abdominal epidermis of Drosophila.</a> Nat Protoc. 2 (12), 3074-3080 (2007).</li>
<li>Chiba, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activatable+photosensitizer+for+targeted+ablation+of+lacZ-positive+cells+with+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Cent+Sci%22%5BJournal%5D)">Activatable photosensitizer for targeted ablation of lacZ-positive cells with single-cell resolution.</a> ACS Cent Sci. 5 (11), 1676-1681 (2019).</li>
<li>Umetsu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+increases+in+mechanical+tension+shape+compartment+boundaries+by+biasing+cell+intercalations%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Local increases in mechanical tension shape compartment boundaries by biasing cell intercalations.</a> Curr Biol. 24 (16), 1798-1805 (2014).</li>
<li>Tran, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+disassembly+of+a+microtubule-based+membrane+protrusion+network+coordinates+3D+epithelial+morphogenesis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Programmed disassembly of a microtubule-based membrane protrusion network coordinates 3D epithelial morphogenesis in Drosophila.</a> EMBO J. 43 (6), 568-594 (2024).</li>
<li>Hellerman, M. B., Choe, R. H., Johnson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-imaging+of+the+Drosophila+pupal+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Live-imaging of the Drosophila pupal eye.</a> J Vis Exp. (95), e52120(2015).</li>
<li>O'Connor, J. T., Shannon, E. K., Hutson, M. S., Page-McCaw, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mounting+Drosophila+pupae+for+laser+ablation+and+live+imaging+of+the+dorsal+thorax%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Mounting Drosophila pupae for laser ablation and live imaging of the dorsal thorax.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101396(2022).</li>
<li>Ziserman, D., Roegiers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+imaging+of+sensory+organ+precursor+cells+in+intact+Drosophila+pupae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Live-cell imaging of sensory organ precursor cells in intact Drosophila pupae.</a> J Vis Exp. (51), e2706(2011).</li>
<li>Tögel, M., Pass, G., Paululat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+Drosophila+wing+heart+development+during+pupal+stages%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of Drosophila wing heart development during pupal stages.</a> Int J Dev Biol. 57 (1-2), 13-24 (2013).</li>
<li>Weavers, H., Franz, A., Wood, W., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+tracking+of+inflammatory+cell+dynamics+within+Drosophila+pupae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo tracking of inflammatory cell dynamics within Drosophila pupae.</a> J Vis Exp. (136), e57871(2018).</li>
<li>Kojima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+mechanism+of+the+tarsus+in+insect+legs%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Developmental mechanism of the tarsus in insect legs.</a> Curr Opin Insect Sci. 19, 36-42 (2017).</li>
<li>Mirth, C., Akam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+development+in+the+Drosophila+leg%3A+Cell+movements+and+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Joint development in the Drosophila leg: Cell movements and cell populations.</a> Dev Biol. 246 (2), 391-406 (2002).</li>
<li>Mirth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecdysteroid+control+of+metamorphosis+in+the+differentiating+adult+leg+structures+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Ecdysteroid control of metamorphosis in the differentiating adult leg structures of Drosophila melanogaster.</a> Dev Biol. 278 (1), 163-174 (2005).</li>
<li>Tajiri, R., Misaki, K., Yonemura, S., Hayashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+shape+changes+of+ECM-producing+cells+drive+morphogenesis+of+ball-and-socket+joints+in+the+fly+leg%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dynamic shape changes of ECM-producing cells drive morphogenesis of ball-and-socket joints in the fly leg.</a> Development. 137 (12), 2055-2063 (2010).</li>
<li>Hiraiwa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unveiling+the+cell+dynamics+during+the+final+shape+formation+of+the+tarsus+in+Drosophila+adult+leg+by+live+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Unveiling the cell dynamics during the final shape formation of the tarsus in Drosophila adult leg by live imaging.</a> Dev Genes Evol. , (2024).</li>
<li>ImageJ plugin page. , Signaling RIKEN. Available at: 
 <a target="_blank" href="https://signaling.riken.jp/en/en-tools/imagej/629/">https://signaling.riken.jp/en/en-tools/imagej/629/</a> (2024).</li>
<li>Pandey, R., Heidmann, S., Lehner, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+re-organization+and+dynamics+of+progression+through+mitosis+in+Drosophila+separase+complex+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Epithelial re-organization and dynamics of progression through mitosis in Drosophila separase complex mutants.</a> J Cell Sci. 118 (4), 733-742 (2005).</li>
<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J Cell Biol. 149 (2), 471-490 (2000).</li>
<li>Ashburner, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1989).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>35 מ"מ/צלחת בסיס זכוכית</td><td>IWAKI</td><td>3911-035</td><td></td></tr><tr><td>מגבוני ניקוי</td><td>NIPPON PAPER CRECIA</td><td>S-200</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3c מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus 2-20 & micro; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000098</td><td></td></tr><tr><td>זן זבוב: His2Av-mRFP, sGMCA</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center</td><td>59023</td><td></td></tr><tr><td>FV3000</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>מיקרוסקופ קונפוקלי הפוך</td></tr><tr><td>FV31S-SW</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>תוכנה עבור FV3000</td></tr><tr><td>G40L</td><td>Shin-Etsu סיליקון</td><td></td><td>סיליקון גריז</td></tr><tr><td>מיקרו כיסוי זכוכית 18 x 18 מ"מ 0.13-0.17 מ"מ</td><td>MATSUNAMI</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו שקופיות זכוכית 76 x 26 מ"מ 0.9-1.2 מ"מ</td><td>MATSUNAMI</td><td>S7213</td><td></td></tr><tr><td>NEO-SABLE גודל 0 עגול, משובח</td><td>Pentel</td><td>XZBNR-0</td><td>מברשת</td></tr><tr><td>צבע SIL300CS-30CC</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>שמן סיליקון</td></tr><tr><td>מערכת סטריאומיקרוסקופ SZX7</td><td>EVIDENT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מזרק Terumo 50 מ"ל</td><td>Terumo</td><td>SS-50ESZ</td><td></td></tr><tr><td>סרט דו צדדי שקוף</td><td>סקוץ'&nbsp;</td><td>665-1-12</td><td>מכיוון שלשכבה הפנימית יש הידבקות חזקה יותר מהשכבה החיצונית, יש להשתמש בשכבה הפנימית לקיבוע גלמים.</td></tr><tr><td>UPLSAPO10x</td><td>EVIDENT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UPLSAPO40XS</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>עדשת טבילה סיליקון</td></tr><tr><td>Vannas מספריים קפיציים - 2.5 מ"מ</td><td>Cutting Edge Fine Science</td><td>Tools 15000-08</td><td>אופציונלי</td></tr></tbody></table>

הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם דרוזופילה לאחר הסרת פופריום

Long-Term Live Imaging of Drosophila Pupal Leg Development After Puparium Removal

כאן, מתוארת דוגמה להדמיה חיה של 44 שעות של הרגל הבוגרת המתפתחת של דרוזופילה בשלב הגולם. זבובים המבטאים His2Av-mRFP17 (גרעיני תיוג) ו-sGMCA18 (חלבון קושר אקטין מתויג GFP מוזין, תיוג אקטין) נאספו בשלב הגולם הלבן והודגרו במשך 15 שעות ב-25 מעלות צלזיוס. הגולם הוסר והורכב בהתאם לפרוטוקול (איור 2). תמונות מחסנית Z של הטרסוס והפרטרסוס, ליד קצה הרגל, התקבלו בהצלחה כל 15 דקות מ-16 שעות עד 60 שעות APF בטמפרטורת החדר (לא מחמיר, אבל קרוב ל-25 מעלות צלזיוס). המחצית הראשונה של סדרת התמונות מוצגת באיור 3, החצי השני באיור 4, והסרט כולו בסרט 1. כאשר רקמת הרגליים הצטמצמה במהירות, תאי האפיתל יצרו באופן ארעי מבנה מסקרן, המבנה דמוי הפרתנון, המאופיין על ידי הקרנות אפיקובזאליות וחיבורים בסיסיים (איור 3). הקטנת עובי האפיתל נצפתה גם לאחר שהמתאר כמעט הושלם (איור 4). התהליך כולו נסקר באיור 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig1.jpg"> 
איור 1: סקירה כללית של היווצרות הצורה הסופית של הטרסוס הבוגר Drosophila במהלך שלב הגולם. התהליך כולו חולק לחמישה שלבים בהתבסס על השינויים המורפולוגיים הן ברמת הרקמה והן ברמת התא שנצפו בניסויי הדמיה חיים ארוכי טווח. תמונות מייצגות או תמונות מעובדות על פני השטח (אות sGMCA) המתאימות למספר נקודות זמן מוצגות בצד שמאל. תיאורים קצרים של האירועים בכל שלב כתובים בצד ימין. נתון זה שונה מ-Hiraiwa et al.15. ראה גם סרט 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig2.jpg"> 
איור 2: הסרת Puparium והרכבת הרכבה עבור הדמיה חיה. (A) גולם לבן שנאסף בצלחת. (B) הגולם הופיע ב-(A) אחרי דגירה במשך 15 שעות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. האזור בצבע ציאן מציין את האופרקולום. (C) תצלום שמראה גולם מודבק לפיסת סרט דו-צדדי. (ד-ג'יי) סדרת תמונות המציגות את הליך הסרת הגולם. (D) האופרקולום מורם בעזרת מלקחיים. (E) האופרקולום מוסר. (F) קצה מלקחיים מוחדר בין ציפורן הגולם לבין הגולם. (ז) הגולם פתוח חלקית. (H) מוחדר שוב קצה מלקחיים. (I) הגולם נפתח והשאיר רק חלק קטן מהקצה האחורי. (J) הגולם מורם על ידי מכחול. (K) דוגמה לדליפת נוזל גוף של הגולם. הנוזל היוצא מהפצע שננעץ על ידי קצה מלקחיים מסומן על ידי ראש חץ. (ל-נ) תמונות ואיורים המציגים את מכלול התושבת. (L) תמונה שצופה מהצד ההפוך ומראה גלמים מונחים ומים מזוקקים על תחתית צלחת עם תחתית זכוכית. (M) המנה לאחר השלמת הרכבת ההרכבה. גריז סיליקון הונח לאורך הקצה סביב חלק הזכוכית, וכיסוי הונח על השומן כדי לאטום אותו. (N) שרטוט סכמטי של מכלול ההרכבה של גולם הדרוזופילה להדמיה חיה לטווח ארוך. (O) גולם רכוב התפתח כמעט בוגר. (P) גולם רכוב הסוגר אותו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig3.jpg"> 
איור 3: שינויי צורה דינמיים בתאי האפיתל הטרסליים ב-APF של 16-27.5 שעות. (A) איור של הגולם שנראה מהצד הגחוני. המלבן המקווקו מתאים לאזור הנצפה ב-(B-E). L1: רגל ראשונה, L2: רגל שנייה, L3: רגל שלישית. (B,C,D,E) סטילס מהדמיה חיה של החלק הדיסטלי של הטרסוס ב-sGMCA (ירוק) ו-His2Av-mRFP (מג'נטה) המבטא זבוב. הרקמה מצטמצמת במהירות, והכניסה של אזורי המפרקים מתקדמת. (ב',ג',ד',ה') הגדלה של אזורים המוקפים בקווים מקווקווים ב- (B,C,D,E), בהתאמה. החץ וראש החץ ב-(C') מראים דוגמה להקרנות אפיקובזאליות ולמיקום הקשרים הבסיסיים, בהתאמה. המבנה דמוי הפרתנון מתחיל להיווצר ב-(B'), נוצר במלואו ב-(C'), מתחיל להיעלם ב-(D') והופך להיות קשה לראייה ב-(E'). דיסטלי מימין וגב למעלה בכל הדמויות. השלבים מוצגים בפינות הימניות התחתונות ב- (B,C,D,E). פסי קנה מידה: B, C, D, E: 50 מיקרומטר; B',C',D',E': 10 מיקרומטר. נתון זה שונה מ-Hiraiwa et al.15. ראה גם סרט 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig4.jpg"> 
איור 4: שינויי צורה בשכבת תאי האפיתל הטרסליים ב-APF של 41-60 שעות. (A,B,C,D) תמונות סטילס מאותו מערך נתונים רציף של הדמיה חיה כמו איור 3. מלבנים מקווקווים ב- (A,B,C,D) מוגדלים ב-(A',B',C',D'), בהתאמה. בסביבות 48 שעות APF (A-B'), היווצרות הצורה החיצונית, כגון התארכות הזיפים, הטפרים והפולווילי, כמעט הושלמה. החלק התחתון של המפרק המוחדר נע קרוב אליו, ולאחר מכן, היווצרות מבנה הכדור והשקע התקדמה לאחר כ-54 שעות APF. ההבדל המורפולוגי בין האפיתל הגבי והגחוני ניכר (חיצים כפולים וחצים כפולים פתוחים ב-B',C',D'). לאחר 54 שעות APF (C-D'), שכבת האפיתל הפחיתה את עוביה מבלי לשנות כמעט את קווי המתאר של הקטעים. הגב נמצא למעלה ודיסטלי מימין בכל הדמויות. פסי קנה מידה: A, B, C, D: 50 מיקרומטר; A',B',C',D': 20 מיקרומטר.נתון זה צוטט מ-Hiraiwa et al.15. ראה גם סרט 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig5.jpg"> 
איור 5: דוגמה לתצפית על הרגליים באמצעות פונקציית Bright Z. (א,ב) תמונות של האזור, העומק והשלב המתאימים של הרגל השלישית של sGMCA (ירוק) ו-His2Av-mRFP (מג'נטה) המבטאים זבוב, עם (B) או בלי (A) באמצעות פונקציית Bright Z. (A) מישור XY בעומק 59.1 מיקרומטר שחולץ מהתצפית על אזור הטרסל ברגל השלישית ב-16 שעות APF שנרכש ללא שימוש בפונקציית Bright Z. (א') תצוגת החתך תואמת לקו האנכי הצהוב ב-(A). הקו האנכי ב-(A') מציין את מישור המוקד של (A). (B) מישור XY בעומק 61.6 מיקרומטר שחולץ מהתצפית על אזור הטרסל ברגל השלישית ב-16 שעות APF שנרכש באמצעות פונקציית Bright Z. גם מתח PMT וגם עוצמת הלייזר הותאמו. נראות התמונה משופרת בהשוואה ל-(A). (ב') תצוגת החתך תואמת לקו האנכי הצהוב ב-(B). הקו האנכי הצהוב ב-(B') מציין את מישור המוקד של (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
קובץ משלים 1: דוגמה להגדרת המיקרוסקופ הקונפוקלי להדמיה חיה של אזור טרסל הרגל בין 15-30 שעות APF. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597_Supplementary%20File%201.docx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
סרט 1: הדמיה חיה לטווח ארוך של החלק הדיסטלי של הטרסוס למשך 44 שעות. נעשה שימוש בזבוב המבטא sGMCA (ירוק) ו-His2Av-mRFP (מג'נטה). מישור ה-XY המייצג ביותר חולץ מאותו מערך נתונים כמו איור 3 ואיור 4. ראשי חץ מציינים דוגמאות לאזורי מפרקים עתידיים. תאים הנעים במהירות ברקמה הם תאים דמויי מקרופאגים. האות דמוי המיתר המשתרע לאורך מקטעי הטרסל הוא חלק מהמחיצה. חותמת הזמן מראה hh: mm. דיסטלי מימין, וגב למעלה. סרט זה עובד מ-Hiraiwa et al.15<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/Movie%201.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>

Over the past decades, significant progress has been made in understanding the mechanisms of cell fate determination. However, the process by which ...

long-term-live-imaging-drosophila-pupal-leg-development-after

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

Mesoscopic הקרינה טומוגרפיה פועלת מעבר לגבולות חדירה של מיקרוסקופיה רקמות חתך פלואורסצנטי. הטכניקה מבוססת על תאורה השלכה רב ותיאור תחבורה פוטון. אנו להדגים ב-vivo כל הגוף 3D להדמיה של המורפוגנזה ה-GFP-לבטא דיסקים דמותי האגף...

Mesoscopic Fluorescence טומוגרפיה עבור In-vivo הדמיה של פיתוח תסיסנית</em

בסרטון הזה, אנו מתארים שיטת הדמיה של תא חי להתחלק סימטרית חושי אבי איברים ותאי אפידרמיס ב...

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

מקור: Hellerman, M. B., et al. Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye. J. Vis. Exp. (2015)הסרטון מדגים טכניקת הדמיה חיה לחקר דפוסי עיניים בגולם Drosophila melanogaster. סמנים מתויגים בחלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) מאפשרים הדמיה של ארגון התאים והתמיינות במהלך היווצרות מבנה העין המתפתח.

הדמיה חיה של עין הגולם של דרוזופילה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית

מסמך זה מדגים את השימוש במיקרוסקופ confocal סריקה מהירה לתמונת התנהגות תא ישירות דרך הגולם. מאת עוזב את המקרה גלמי שלם, שיטה זו מאפשרת תצפית ומדידה של תהליכים בתא דינמיים בשלב של פיתוח דרוזופילה שקשה ללמוד באופן ישיר.

הדמיה באמצעות המקרה גלמי של<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מציג שיטה יעילה להדמיה של נוירואפיתל עין גולם חי של דרוזופילה. שיטה זו מפצה על תנועת רקמות וטופולוגיה לא אחידה, משפרת את ההדמיה של גבולות התא באמצעות שימוש בחלבוני צומת מרובים המתויגים ב-GFP, ומשתמשת במתקן הדמיה המורכב בקלות.

Live-הדמיה של דרוזופילה גלמי עין

פרוטוקול זה מתאר שיטה מפורטת עבור תרבות הדמיה חיה vivo לשעבר לטווח ארוך של דיסק דמותי דרוזופילה. זה מדגים בידול קולטי אור וסיבוב ommatidial בתוך התקופה 10 שעות של הדמית חיה של דיסק העין. הפרוטוקול הוא פשוט ואינו דורש התקנה יקרה.

הדמיה לטווח ארוך בשידור חי של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; דיסק העין

כאן, אנו מציגים שיטה קלה לשימוש, רב-תכליתי לביצוע חי הדמיה של תהליכים התפתחותיים מורפוגנזה הכללי של גיד השריר בפרט חי הגלמים דרוזופילה .

אין ויוו הדמיה של גיד השריר מורפוגנזה ב דרוזופילה הגלמים

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור הדמיה לחיות הפצע ותיקון ההיענות דלקתיות המשויך ברזולוציה גבוהה-עתיים ויוו. שיטה זו משתמשת השלב הגולמי של פיתוח דרוזופילה כדי לאפשר לטווח ארוך הדמיה ומעקב של אוכלוסיות תאים מסוים לאורך זמן והוא תואם עם איון יעיל מציאה RNAi בתיווך גנים.

לטווח ארוך In Vivo מעקב של תאים דלקתיים הדינמיקה בתוך דרוזופילה הגלמים

פרוטוקול זה מיועד הדמיה וניתוח של הדינמיקה של כיוון התאים ואת צמיחת רקמות בתוך הבטן הדרוזולה epithelia כמו זבוב הפרי עובר מטמורפוזה. המתודולוגיה המתוארת כאן ניתנת להחלה על חקר שלבים, רקמות ומבנים תת-סלולאריים שונים בדרוזופילה או באורגניזמים אחרים במודל.

הדמיה וניתוח של כיוון רקמות ודינמיקה בפיתוח הדרוזולה אפיתליה במהלך שלבי pupal

פרוטוקול זה מתאר שיטה להרכבת הזחלים של דרוזוהילה כדי להשיג יותר מ-10 שעות של הדמיה של הפרעות זמן בבעלי חיים חיים שלמים. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לדמות תהליכים ביולוגיים רבים קרוב לקיר הגוף הזחל.

LarvaSPA, שיטה להרכבה ממושכת על זחל לטווח ארוך הדמיה לזמן קצר

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לביצוע הדמיה חיה של החלוקה הא-סימטרית של תאי גזע של קו הנבט (GSCs) בנישת השחלות של דרוזופילה. אנו משתמשים בקו טרנסגני המבטא בכל מקום היתוך חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) של חלבון הספקטרוזום Par-1.

הדמיה חיה מורחבת של נישות תאי גזע נקבות Drosophila melanogaster

למד הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם Drosophila לאחר הסרת פופריום. שיטה זו מאפשרת לחקור את דינמיקת צורת התאים האפיתליים ואת תפקיד המבנה הדמוי-פרתנון במורפוגנזה.

הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם דרוזופילה לאחר הסרת פופריום

גלה סרטונים נוספים