Name: בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: למדו בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר לאחר זיהום שפעת. הפרוטוקול מציע אסטרטגיות gating לזיהוי תת-קבוצות תאים ומאפשר חקר מנגנוני תיקון הריאה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>בידוד של תאים חיסוניים ולא חיסוניים מריאות עכברים עבור ציטומטריית זרימה

<ol><li>Wanner, A., Salathé, M., O'Riordan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucociliary+clearance+in+the+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Mucociliary clearance in the airways.</a> Am J Respir Crit Care Med. 154 (6), 1868-1902 (1996).</li>
<li>Mason, R. J., Williams, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+II+alveolar+cell.+Defender+of+the+alveolus%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Type II alveolar cell. Defender of the alveolus.</a> Am Rev Respir Dis. 115 (1), 81-91 (1977).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: defender of the alveolus revisited.</a> Respir Res. 2 (1), 33-46 (2001).</li>
<li>Basil, M. C., Alysandratos, K. -D., Kotton, D. N., Morrisey, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+repair+and+regeneration%3A+Advanced+models+and+insights+into+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lung repair and regeneration: Advanced models and insights into human disease.</a> Cell Stem Cell. 31 (4), 439-454 (2024).</li>
<li>Hussell, T., Bell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+macrophages%3A+plasticity+in+a+tissue-specific+context%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Alveolar macrophages: plasticity in a tissue-specific context.</a> Nat Rev Immunol. 14 (2), 81-93 (2014).</li>
<li>Gschwend, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+macrophages+rely+on+GM-CSF+from+alveolar+epithelial+type+2+cells+before+and+after+birth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Alveolar macrophages rely on GM-CSF from alveolar epithelial type 2 cells before and after birth.</a> J Exp Med. 218 (1), e20210745(2021).</li>
<li>Gillich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+cell-type+specialization+in+the+alveolus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Capillary cell-type specialization in the alveolus.</a> Nature. 586 (7831), 785-789 (2020).</li>
<li>Schyns, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-classical+tissue+monocytes+and+two+functionally+distinct+populations+of+interstitial+macrophages+populate+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Non-classical tissue monocytes and two functionally distinct populations of interstitial macrophages populate the mouse lung.</a> Nat Commun. 10 (1), 3964(2019).</li>
<li>Chakarov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+interstitial+macrophage+populations+coexist+across+tissues+in+specific+subtissular+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two distinct interstitial macrophage populations coexist across tissues in specific subtissular niches.</a> Science. 363 (6432), eaat3773(2019).</li>
<li>Tsukui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-producing+lung+cell+atlas+identifies+multiple+subsets+with+distinct+localization+and+relevance+to+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Collagen-producing lung cell atlas identifies multiple subsets with distinct localization and relevance to fibrosis.</a> Nat Commun. 11 (1), 1920(1920).</li>
<li>Aegerter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza-induced+monocyte-derived+alveolar+macrophages+confer+prolonged+antibacterial+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Influenza-induced monocyte-derived alveolar macrophages confer prolonged antibacterial protection.</a> Nat Immunol. 21 (2), 145-157 (2020).</li>
<li>Johansson, C., Kirsebom, F. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+respiratory+viral+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in respiratory viral infections.</a> Mucosal Immunol. 14 (4), 815-827 (2021).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-derived+alveolar+macrophages+autonomously+determine+severe+outcome+of+respiratory+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte-derived alveolar macrophages autonomously determine severe outcome of respiratory viral infection.</a> Sci Immunol. 7 (71), eabj5761(2022).</li>
<li>Moll, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+transplantation+of+syngeneic+lung+adenocarcinoma+cells+to+study+PD-L1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study PD-L1 expression.</a> J Vis Exp. (143), e58101(2019).</li>
<li>Warshamana, G. S., Corti, M., Brody, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-%CE%B1%2C+PDGF%2C+TGF-%CE%B21+expression+by+primary+mouse+bronchiolar-alveolar+epithelial+and+mesenchymal+cells%3A+TNF-%CE%B1+induces+TGF-%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">TNF-α, PDGF, TGF-β1 expression by primary mouse bronchiolar-alveolar epithelial and mesenchymal cells: TNF-α induces TGF-β1.</a> Exp Mol Pathol. 71 (1), 13-33 (2001).</li>
<li>Corti, M., Brody, A. R., Harrison, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+primary+culture+of+murine+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and primary culture of murine alveolar type II cells.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 14 (3), 309-315 (1996).</li>
<li>Quantius, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus+infects+epithelial+stem%2Fprogenitor+cells+of+the+distal+lung%3A+Impact+on+Fgfr2b-driven+epithelial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Influenza virus infects epithelial stem/progenitor cells of the distal lung: Impact on Fgfr2b-driven epithelial repair.</a> PLoS Pathog. 12 (5), e1005544(2016).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22BIO+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> BIO Protoc. 11 (8), e3988(2021).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
<li>Bijgaart, R. J. E., van den Kong, N., Maynard, C., Plaks, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+live+imaging+of+lung+metastasis+and+their+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ex vivo live imaging of lung metastasis and their microenvironment.</a> J Vis Exp. (108), e53741(2016).</li>
<li>Shi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+immune+cells+from+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of immune cells from the liver.</a> Int Immunopharmacol. 85, 106632(2020).</li>
<li>Short, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus+damages+the+alveolar+barrier+by+disrupting+epithelial+cell+tight+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Influenza virus damages the alveolar barrier by disrupting epithelial cell tight junctions.</a> Eur Respir J. 47 (3), 954-966 (2016).</li>
<li>Laidlaw, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+cell+help+guides+formation+of+CD103%2B+lung-resident+memory+CD8%2B+T+cells+during+influenza+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CD4+ T cell help guides formation of CD103+ lung-resident memory CD8+ T cells during influenza viral infection.</a> Immunity. 41 (4), 633-645 (2014).</li>
<li>D'Agostino, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+isolation+and+characterization+of+lung+tissue-resident+memory+T+cells+and+airway-trained+innate+immunity+after+intranasal+vaccination+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for isolation and characterization of lung tissue-resident memory T cells and airway-trained innate immunity after intranasal vaccination in mice.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101652(2022).</li>
<li>Waal, A. M., de Hiemstra, P. S., Ottenhoff, T. H., Joosten, S. A., vander Does, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+interact+with+immune+cells+and+bacteria+to+shape+the+microenvironment+in+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells interact with immune cells and bacteria to shape the microenvironment in tuberculosis.</a> Thorax. 77 (4), 408-416 (2022).</li>
<li>Bhattacharya, J., Westphalen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-epithelial+interactions+in+pulmonary+alveoli%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage-epithelial interactions in pulmonary alveoli.</a> Semin Immunopathol. 38 (4), 461-469 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מזרק 1 מ"ל עם קצה החלקה</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה 1.7 מ"ל</td><td>DOT Scientific</td><td>RN1700-GMT</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפטות (חד פעמיות)</td> <td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-567-603</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל עם קצה BD Luer-Lok</td><td>VWR</td><td>75846-756</td><td></td></tr><tr><td>123 ספירת חרוזים ספירת חרוזים</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>01-1234-42</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה 12 ערוצים (30-300ul)</td><td>ארה"ב מדעי&nbsp;</td><td>7112-3300</td><td></td></tr><tr><td>16% פרפורמלדהיד</td><td>VWR</td><td>100503-917</td><td></td></tr><tr><td>מחט 23 גרם עם שיפוע רגיל</td><td>VWR</td><td>305194</td><td></td></tr><tr><td>מחט 27 גרם עם שיפוע רגיל</td><td>VWR</td><td>BD305109</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל פיפטות (חד פעמיות)</td> <td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>170373</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה</td><td>אולימפוס&nbsp;</td><td>28-108</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תחתונה עגולה 96 בארות</td><td>Corning</td><td>3797</td><td></td></tr><tr><td>ACK מאגר ליסינג</td><td>Gibco</td><td>A100492-01</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 נגד עכבר CD11c</td><td>BioLegend</td><td>117311</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן חד שבטי נגד F4/80 חולדה (PE (Phycoerythrin)/Cy7)BioLegend</td><td></td> <td>123114</td><td></td></tr><tr><td>APC נגד עכבר CD64 (Fc&gamma; RI)</td><td>BioLegend</td><td>139306</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 נגד עכבר CD45</td><td>BioLegend</td><td>103115</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard Shielded IV צנתרים</td><td>VWR</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>סגול מבריק 421 נגד עכבר I-A/I-E (MHC-II)BioLegend</td><td></td> <td>107632</td><td></td></tr><tr><td>סגול מבריק 421 נגד עכבר/אנושי CD11b</td><td>BioLegend</td><td>101235</td><td></td></tr><tr><td>מבריק סגול 605 נגד עכבר Ly-6C</td><td>BioLegend</td><td>128036</td><td></td></tr><tr><td>סגול מבריק 711 נגד עכבר CD45</td><td>BioLegend</td><td>103147</td><td></td></tr><tr><td>עכברי C57BL/6J&nbsp;</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cd140a (PDGFRA) נוגדן חד שבטי (APA5), PE-Cyanine7, eBioscience</td><td>Life Technologies</td><td>25-1401-82</td><td></td></tr><tr><td>CD170 (Siglec F) נוגדן חד שבטי (1RNM44N), PE</td><td>Life Technologies</td><td>12170280</td><td></td></tr><tr><td>מסנני תאים</td><td>קורנינג</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppenodorf</td><td>5910R</td><td></td></tr><tr><td>דאוקסיריבונוקלאז I מלבלב בקר (DNase)</td><td>Millipore Sigma</td><td>DN25-100MG</td><td>משוחזר ב-20 מ"ג/מ"ל ב-DPBS כתמיסת מלאי המאוחסנת ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>VWR</td><td>76176-668</td><td>הופשר פעם אחת ומאוחסן כ-1 מ"ל ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>מלקחיים לדיסקציה (Dumont #7)</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11297-00</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לדיסקציה</td><td>Fine Science</td><td>Tools 14060-09</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>ערכת קיבוע eBioscience Life</td><td>Technologies</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>VWR</td><td>TX89125170HU</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GeminiBio</td><td>100-106</td><td>הופשר פעם אחת והושבת בחום לפני אחסון לטווח ארוך כציטוטים ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>FITC נגד עכבר CD31 נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>102406</td><td></td></tr><tr><td>Gibco RPMI 1640 Medium</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-875-093</td><td></td></tr><tr><td>מגלשות זכוכית</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-552-3</td><td></td></tr><tr><td>מאגר בוגר</td><td>ארה"ב Scientific&nbsp;</td><td>1930-2235</td><td></td></tr><tr><td>דלי קרח</td><td>קורנינג</td><td>432128</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת הידרוקולוריד קטמין (100 מ"ג/מ"ל)</td>ניתן <td>לשמור את תערובת המתת החסד של דקרה קטמין וקסיאלזין ב-30 מ"ג/מ"ל קטמין הידרוכלוריד ו-4.5 מ"ג/מ"ל קסילזין ב-DPBS סטרילי עד חודש.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401119001</td><td>משוחזר ב-5 מ"ג/מ"ל ב-DPBS כתמיסת מלאי המאוחסנת ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>מכסים לצלחות 96 בארות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>07-201-731</td><td></td></tr><tr><td>חממה אורביטלית שייקר</td><td>בארנסטד קו מעבדה</td><td>SHKE4000</td><td></td></tr><tr><td>p1000 פיפטה</td><td>אפנודורף</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>p1000 טיפים</td><td>ארה"ב מדעי&nbsp;</td><td>1122-1830</td><td></td></tr><tr><td>p200 פיפטה</td><td>Eppenodorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>p200 טיפים</td><td>ארה"ב מדעי&nbsp;</td><td>1110-1700</td><td></td></tr><tr><td>PE נגד עכבר CD326 (Ep-CAM)</td><td>BioLegend</td><td>118206</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cyanine5.5 נגד עכבר CD104 נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>123614</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cyanine5.5 נגד עכבר Ly-6G</td><td>BioLegend</td><td>127616</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid&nbsp;</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>מטוהר נגד עכבר CD16/32 </td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>המכונה "בלוק FC" בטקסט </td></tr><tr><td>בקבוק ריסוס</td><td>VWR</td><td>23609-182</td><td></td></tr><tr><td>תפר (גודל 2-0)</td><td>VWR</td><td>100190-026</td><td></td></tr><tr><td>רפידות תחתונות</td><td>VWR</td><td>56617-014</td><td></td></tr><tr><td>Xysed (קסילזין 100 מ"ג/מ"ל)</td><td>Pivetal</td><td></td><td>ראה הערות הידרוקולוריד קטמין למעלה.&nbsp;</td></tr><tr><td>ערכת כדאיות ניתנת לתיקון זומבי אקווה</td><td>BioLegend</td><td>423102</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר

Isolation of Live Myeloid and Epithelial Cell Populations from the Mouse Lung

עיכול מוצלח יביא לכ-20-25 מיליון תאים עם כדאיות של 90%-95%. אם מתווספים כ-25,000 חרוזי ספירה לחלק של 8% מהריאה, החרוזים אמורים לפגוע ב-1%-3% מהאירועים שנאספו. לאחר השער על סינגלים, כ-90%-95% מהתאים צריכים להיות שליליים ל-Zombie Aqua (מה שמעיד על כדאיות) (איור 2A, איור 3A).
מבין תאי CD45+, תאי CD64+F4/80+ מוגדרים כמקרופאגים (איור 2B). בנקודת ההתחלה, 80%-90% מכל המקרופאגים ב...

The lung is continuously exposed to pathogens and other noxious environmental stimuli, rendering it vulnerable to damage, dysfunction, and the development ...

isolation-live-myeloid-epithelial-cell-populations-from-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

כאן אנו מתארים פרוטוקול לבידוד והתרבות של Murine לתאי אנדותל ריאתי. שיטה זו כוללת מכונאי דיסוציאציה האנזימטית רקמת הריאות, כמו גם תהליך צעד 2-טיהור באמצעות אנטי PECAM-1 ואנטי ICAM-2 נוגדנים מצומדות כדי חרוזים מגנטיים, אשר מייצר אוכלוסיה טהור תא האנדותל של כלי הדם בעיקר מקור.

בידוד תרבות לתאי אנדותל ריאתי מעכברים ילודים

במאמר זה אנו מדגימים את הבידוד של Murine ריאות תושב בתאי גזע mesenchymal (ריאות MSC), הרחבה שלהם, אפיון וניתוח של מאפייני המערכת החיסונית.

בידוד &amp; אפיון Hoechst נמוך CD45 שלילי עכבר mesenchymal ריאות בתאי גזע

הכנה מטוהרים של ריאות תאים דנדריטים עכבר מתואר. דגש ספציפי ניתנת הבידוד של תת קונבנציונאלי תאים דנדריטים.

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

אנו מתארים את הבידוד המהיר של תאים ראשוניים Murine סוג II (אפיתל מכתשיים AECII) על ידי סלקציה שלילית זרימת cytometric. AECII אלה להראות כדאיות וטוהר גבוה ומתאימים למגוון רחב של מחקרים מולקולריים פונקציונליים ובנוגע לתפקידם בתנאי נשימה כגון מחלות אוטואימוניות או זיהומיות.

בידוד Cytometric זרימה של תאים ראשוניים Murine Type II alveolar אפיתל ללימודים פונקציונליים ומולקולריים

סרטון זה מדגים טכניקה במבחנה לזיהוי תאים חיסוניים השוכנים בריאות עכברים. לאחר בידוד תאי חיסון מטרה מרקמת הריאה של העכברים, הם מסומנים על פני השטח באמצעות קוקטייל של נוגדנים מתויגים פלואורופור כנגד סמנים ספציפיים על תאי חיסון מולדים ונרכשים. בנוסף, מונוציטים, מקרופאגים ותאים דנדריטיים מסומנים באמצעות סמן תוך-תאי. לאחר מכן מזוהים סוגי התאים החיסוניים השונים באמצעות ציטומטריית זרימה.

שיטת מבחנה לזיהוי תאים חיסוניים מולדים ונרכשים השוכנים בריאות עכברים

פרוטוקול זה מתאר טכניקת בידוד לקבלת תאי סטרומה mesenchymal תושב ריאה הראשית של חולדות, באמצעות עיכול אנזימטי, הפרדת שיפוע צפיפות, דבקות פלסטיק CD146 + מבחר חרוז מגנטי.

בידוד של CD146<sup&gt; +</sup&gt; תאי סטרומה mesenchymal ריאות התושב מריאות העכברוש

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בציטומטריה של זרימה כדי לזהות את השינויים בהרכב תאי מערכת החיסון, בפרופיל הציטוקינים ובפרופיל הכימוקין בסביבה הריאתית לאחר חסימה חולפת של עורק המוח האמצעי, מודל מוריני של שבץ איסכמי.

אפיון תאי מערכת החיסון ומתווכים פרו-דלקתיים בסביבה הריאתית

מאמר זה מספק מתודולוגיה מפורטת לגישות דיסוציאציה של רקמות ופירוק תאי, המאפשרות העשרה של תאי אפיתל בני קיימא מאזורים פרוקסימליים ודיסטליים של הריאה האנושית. כאן גישות אלה מיושמות לניתוח פונקציונלי של תאי אב אפיתל ריאה באמצעות שימוש במודלים של תרביות אורגנואידים תלת-ממדיות.

בידוד והעשרה של תאי אב אפיתל הריאה האנושיים לתרבית אורגנואידית

במאמר זה, תאי אנדותל ריאתיים ראשוניים בודדו וגודלו בתרבית מעכברים ילודים.

בידוד תאי אנדותל ריאה ראשוניים של עכבר

הפרוטוקול המתואר להלן הוא דרך פשוטה ויעילה לבודד תאים המכילים רטינואיד מאוכלוסיות תאי ריאה הטרוגניות מאוד על ידי שימוש באוטופלואורסצנציה ספציפית של רטינואיד ועל ידי שימוש במיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנט.

בידוד תאים המכילים רטינואיד ריאה על ידי מיון תאים

פרוטוקול זה מציג שיטה מבוססת ציטומטריית זרימה לבידוד תאי אפיתל אלוואולריים מסוג II (AECII) חיוניים מריאות עכבריות יילודים, צעירות או בוגרות (נגועים או לא נגועים). גישה זו מאפשרת מחקרים מולקולריים ו/או פונקציונליים במורד התהליך של AECII לזהות את תפקידם במהלך דלקת וזיהום בריאותיים.

בידוד תאי אפיתל אלוואולריים מסוג II מריאות עכבריות יילודים, צעירים ובוגרים המתאימים לסביבות ניסוי זיהומי

למדו בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר לאחר זיהום שפעת. הפרוטוקול מציע אסטרטגיות gating לזיהוי תת-קבוצות תאים ומאפשר חקר מנגנוני תיקון הריאה.

בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר

גלה סרטונים נוספים