Name: חיסון תוך עורי של Mycobacterium avium באוזן העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: למדו את שיטת החיסון התוך עורי של Mycobacterium avium באוזן העכבר לחקירת תגובות חיסוניות למיקובקטריות שאינן גורמות שחפת. מודל זה מאפשר מחקר מבוקר של זיהום מיקובקטריאלי מתמשך בביולוגיה של התפתחות חיסון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
<li>Baldwin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complexities+and+challenges+of+preventing+and+treating+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">The complexities and challenges of preventing and treating nontuberculous mycobacterial diseases.</a> PLoS Negl Trop Dis. 13 (2), p. e0007083(2019).</li>
<li>Falkinham, J. O. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+nontuberculous+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of nontuberculous mycobacteria.</a> Clin Chest Med. 36 (1), 35-41 (2015).</li>
<li>Honda, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+and+transmission+of+nontuberculous+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental sources and transmission of nontuberculous mycobacteria.</a> Clin Chest Med. 44 (4), 661-674 (2023).</li>
<li>Pfaller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+revisited%3A+Mycobacterium+avium+and+Mycobacterium+intracellulare+in+potable+water+in+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Occurrence revisited: Mycobacterium avium and Mycobacterium intracellulare in potable water in the USA.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 106 (7), 2715-2727 (2022).</li>
<li>Mercaldo, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+risk+of+nontuberculous+mycobacterial+infection%3A+Strategies+for+advancing+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Environmental risk of nontuberculous mycobacterial infection: Strategies for advancing methodology.</a> Tuberculosis (Edinb). 139, 102305(2023).</li>
<li>Marshall, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nontuberculous+mycobacteria+testing+and+culture+positivity+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Nontuberculous mycobacteria testing and culture positivity in the United States.</a> BMC Infect Dis. 24 (1), 288(2024).</li>
<li>Ghasemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+non-tuberculous+mycobacteria+on+BCG+vaccine+efficacy%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Tuberc+Other+Mycobact+Dis%22%5BJournal%5D)">Effects of non-tuberculous mycobacteria on BCG vaccine efficacy: A narrative review.</a> J Clin Tuberc Other Mycobact Dis. 36, 00451(2024).</li>
<li>Njagi, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+tuberculin+skin+test+responses+associated+with+Mycobacterium+intracellulare+sputum+colonization+in+an+adolescent+TB+prevalence+survey+in+Western+Kenya%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Attenuated tuberculin skin test responses associated with Mycobacterium intracellulare sputum colonization in an adolescent TB prevalence survey in Western Kenya.</a> Tuberculosis (Edinb). 147, 102514(2024).</li>
<li>Larsen, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+vaccine+protects+against+a+clinical+isolate+of+Mycobacterium+avium+in+wild+type+and+immunocompromised+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Subunit vaccine protects against a clinical isolate of Mycobacterium avium in wild type and immunocompromised mouse models.</a> Scientific Reports. 11 (1), 9040-9040 (2021).</li>
<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
<li>Thomson, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+climate+variables+on+the+rising+incidence+of+nontuberculous+mycobacterial+%28NTM%29+infections+in+Queensland%2C+Australia+2001-2016%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Influence of climate variables on the rising incidence of nontuberculous mycobacterial (NTM) infections in Queensland, Australia 2001-2016.</a> Sci Total Environ. 740, 139796(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05% Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>פישר</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 אגר triplates</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G מחט קהה</td><td>פישר</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>קבינט בטיחות ביולוגית</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 חממה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>קלטת דו צדדית</td><td>סקוטש</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>המילטון 701N מזרק מיקרוליטר</td><td>פישר</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>רקמות קשות אומני טיפים</td><td>פישר</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>קנט סיינטיפיק</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>מחט אינסולין</td><td>פישר</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית מגדלת מוארת</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר רקמות</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>מעמד הומוגנייזר רקמות</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

חיסון תוך עורי של mycobacterium avium באוזן העכבר

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

השתמשנו בפרוטוקול המפורט לעיל כדי לקבוע אם ניתן לבסס מודל אתגר NTM הניתן לשחזור המשתמש בדרמיס האוזן כדרך זיהום או חשיפה. אוזניים נאספו משני בעלי חיים בנקודת זמן של 28 יום לאחר האתגר, הומוגניות ומצופות כמתואר במדיה הסלקטיבית של מיקובקטריה. ראינו כי M. avium החזיק מעמד עד 28 ימים באוזניים שאותגרו תוך עורית והיעדר M. avium באוזן הבלתי מעורערת (איור 2).
בעוד שלא ראינו התפשטות לאוזן הבלתי מאותגרת עד 28 ימים לאחר ההדבקה, אחרים המשתמשים במודל זה של דרמיס אוזניים למודלים של שחפת סמויה הבחינו בהתפשטות לאתרי איברים מרוחקים אחרים14. שיערנו כי מינון נמוך יותר של אתגר ושימוש בבידוד M. avium עשויים להפחית את ההפצה לנקודות זמן מאוחרות יותר שעשויות לשקף טוב יותר חשיפה לעומת זיהום כרוני. לכן, המתת חסד בוצעה בקבוצות של n=5 M. avium מאותגרים בעכברים 28, 56, 90 ו-132 ימים לאחר ההדבקה. האיברים הבאים הומוגניים באותו פרוטוקול המתואר עבור רקמות האוזן: ריאות, טחול, בלוטת לימפה מנקזת (DLN) ומוח. מסלול אתגר זה הביא להתפשטות ספורדית לאורך זמן, כאשר פחות ממחצית מבעלי החיים הראו CFU שניתן לספור באיברים שנבדקו 56 או 90 יום לאחר ההדבקה (טבלה 1). עד 132 ימים לאחר האתגר, לכל העכברים היה M. avium שניתן לזהות בטחול שלהם (n = 5/5 בעלי חיים שהוערכו) אך נראה שהם מכילים חיידקים מינימליים (n = 1/5 ב-DLN) או ללא חיידקים (n = 0/5 בריאות או במוח) באיברים אחרים עד לנקודת זמן זו (טבלה 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
איור 1: כיוון של מחט כשהצד המשופע כלפי מעלה. לפני החדרת המחט, הצד המשופע חייב להיות פונה כלפי מעלה כדי לנהל כראוי את החיסון. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
איור 2: קולוניזציה של רקמת האוזן על ידי M. avium 28 ימים לאחר האתגר. נקבות עכברי C57BL/6 אותגרו באוזן עם 102 CFU של Mycobacterium avium. האוזן המאותגרת (+) הושוותה לאוזן הבלתי מאותגרת (-) לאחר 28 ימים, n=2 חיות בודדות מניסוי יחיד שהוצגו, כאשר כל חיה בצבע וסמל שונים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">שעה (יום)</td>
			<td colspan="4">יומן איברים10 יחידות יוצרות מושבה</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ריאה</td>
			<td>טחול</td>
			<td>נמל התעופה דל.ל.ן</td>
			<td>מוח</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2.81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.78, 0.90, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.53, 3.43, ND, ND, ND</td>
			<td>2.78, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.20, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, 3.35, 3.26, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = בלוטת לימפה מנקזת, ND = לא זוהה</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: התפשטות של M. avium מהאוזן לאורך זמן לאחר האתגר. ריאות, טחול, בלוטות לימפה מנקזות (DLN) ומוח נאספו מ-n=5 עכברים לנקודת זמן לאחר האתגר. רקמות הומוגניות צופו והוערכו לצמיחת חיידקים. איבר CFU שהוצג כ-log10 ערכי טרנספורמציה שבהם חיידקים נספרו ולא זוהו (ND) כאשר לא נצפו CFU בשום ריכוז מצופה. נתוני מהלך הזמן מייצגים ניסוי אחד.

חיסון תוך עורי של Mycobacterium avium באוזן העכבר

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים השראת דלקת מערכתית בעכבר מורדם. הזרקה של מחסני אנטיגן-אדג'ובנט מיקובקטריאליים מעוררת שחרור ציטוקינים ודלקת מקומית. כלי הלימפה נפתחים ומאפשרים כניסת תאי מערכת החיסון לבלוטות הלימפה והפעלת תאי T, המשחררים ציטוקינים מעודדי דלקת, מה שמוביל לדלקת נרחבת.

הזרקה תת עורית של אנטיגן חיידקי לגרימת דלקת מערכתית במודל מורין

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל עכברי של אובאיטיס מיקובקטריאלית דרומית (PMU) לחקר אובאיטיס פוסט-זיהומית. עם השראת PMU על ידי הזרקה תוך ויטריאלית של Mycobacterium tuberculosis שהומתו בחום בעכבר שחוסן בעבר באותו אימונוגן, ההתקדמות של דלקת כרונית בעין מנותחת באמצעות הדמיה ובדיקה...

מודל מורין של אובאיטיס מיקובקטריאלית ראשונית לחקר אובאיטיס פוסט-זיהומיות

הסרטון מדגים השראת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי על ידי הזרקת שילוב של גליקופרוטאינים אוליגודנדרוציטים מיאלין ושחפת מיקובקטריום בלתי פעילה. המודל מאפשר לחוקרים לחקור מנגנוני מחלה ולבחון התערבויות טיפוליות.

אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

סרטון זה מדגים בדיקה לחיסון מודל עכבר עם ספורוזואיטים חיים מוחלשים. הפלסמודיום ספורוזואיטים המוחלשים בקרינה מוזרקים לצד הגבי של אוזנו של העכבר. לאחר הזרקות במספר מקומות בשתי האוזניים, העכבר רשאי להתאושש.

חיסון תוך עורי עם ספורוזואיטים חיים מוחלשים במודל עכבר

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

המטריצה ​​תאית עוברת שיפוץ משמעותי בריפוי פצעים, דלקות והיווצרות גידול. אנו מציגים גישה מיקרוסקופית immunofluorescence intravital רומן כדי להמחיש את הדינמיקה של סיבי, כמו גם רכיבי מטריצת רשת כמו עם רזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה באמצעות epifluorescence או שני פוטונים במיקרוסקופ.

לטווח ארוך Intravital Immunofluorescence הדמיה של רקמות מטריקס רכיבים עם Epifluorescence ומיקרוסקופי שני פוטונים

המנגנונים ששולטים תנועתיות ביניים של תאי T מסוג CD4 מפעיל באתרים של דלקת הם יחסית לא ידועים. אנו מציגים גישה לא פולשנית לדמיין ולטפל בתאים במבחנה -primed CD4 T בדרמיס האוזן הדלקתית, המאפשר חקר את ההתנהגות הדינמית של תאים אלה באתרו.

הדמית תא CD4 T גירת ביניים בדרמיס המוסת

מתואר מבחן בעכברים למעקב אחר נדידת תאים מהעור לבלוטת הלימפה המנקזת המאפשר אפיון של תאים דנדריטיים בעור המגויסים לבלוטת הלימפה לאחר זיהום כרית כף הרגל ב-Bacille Calmette-Guérin.

Assay CFSE המבוסס לחקר נדידת תאי דנדריטים עור Murine לתוך ניקוז בלוטות הלימפה במהלך זיהום<em&gt; Mycobacterium בוביס</em&gt; Bacille Calmette-גרן

בדו"ח זה אנו מציגים פרוטוקול המאפשר לחוקר ליצור מודל עכבר של אובאיטיס תוך עינית. מודל מבוסס זה, המכונה בדרך כלל אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU), לוכד היבטים רבים של מחלות אנושיות. במאמר זה נתאר כיצד לגרום ולנטר את התקדמות המחלה באמצעות מספר קריאות.

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

פרוטוקול זה מתאר את השלבים לגרימת דלקת אובאיטיס מיקובקטריאלית (PMU) בעכברים. שיטה זו מתארת את השלבים שיעזרו לייצר דלקת עיניים אמינה וחזקה במערכת מודל העכבר. באמצעות פרוטוקול זה, יצרנו עיניים אוביטיות ועיניים של עמיתים לא מודלקים מחיות בודדות לצורך הערכה נוספת עם מבחנים אימונולוגיים, תעתיקיים ופרוטאומיים.

דלקת אובאיטיס מיקובקטריאלית ראשונית (PMU) כמודל לאובאיטיס פוסט-זיהומית

עכברים בדרך כלל עמידים לזיהומים על ידי Mycobacterium abscessus, מה שמסבך את הגילוי והפיתוח של אנטיביוטיקה נחוצה מאוד נגד זיהומים ריאתיים. כאן, אנו מתארים שיטה להכנת חיסון וזיהום תוך-קנה שהוכח כגורם לזיהום מתמשך בעכברים בעלי יכולת חיסונית.

הכנת מורסה מיקובקטריום משובצת חרוז אגר לחיסון עכברים בעלי יכולת חיסונית תוך קנה הנשימה

למדו את שיטת החיסון התוך עורי של Mycobacterium avium באוזן העכבר לחקירת תגובות חיסוניות למיקובקטריות שאינן גורמות שחפת. מודל זה מאפשר מחקר מבוקר של זיהום מיקובקטריאלי מתמשך בביולוגיה של התפתחות חיסון.

חיסון תוך עורי של Mycobacterium avium באוזן העכבר

גלה סרטונים נוספים