מתודולוגיה משופרת לאספקת נוזלים לריאת העכבר: אינטובציה באמצעות אוטוסקופ צרכני

[קריין] מתודולוגיה משופרת לאספקת נוזלים לריאות העכבר. אינטובציה באמצעות אוטוסקופ צרכני. כל ההליכים בבעלי חיים ותוכן זה נבדקו על ידי המחלקה לרפואה השוואתית באוניברסיטת טוליין ואושרו על פי פרוטוקול 1810. בקש אישור IACUC והתייעץ עם הצוות הווטרינרי במוסד שלך לפני שתמשיך. הפיתוח של טיפולים ריאתיים חדשים תלוי באספקה אמינה וחוזרת לריאות העכבר, אך באופן מסורתי הסתמך על מתן תוך-אף, שאיבת פה ולוע על ידי לשון מלאה או חיתוך כירורגי. השיטה הבאה הפחיתה את השונות בהשוואה ללשון מלאה, מה שמאפשר קבוצות חיות קטנות יותר. זה גם הרבה פחות פולשני מאשר כריתה. נוהל, שלב ראשון, הגדרה. ערכת אינטובציה של מכרסמים השתמשה בתחילה בספינות עם טריזי בטיחות אינטובציה. מדובר בשרוולים חרוטיים קטנים המתאימים מעל קטטר גמיש בגודל 20 אינץ' אחד. הם מונעים מהקטטר לפגוע בקרינה. נקו טריז בטיחות עם כרית הכנה לאיזופרופנול לפני השימוש בו. החלק את טריז הבטיחות הנקי, ירוק כאן, על הצינורית הגמישה בגודל 20. אסוף את הכלים האחרים הדרושים כולל אוטוסקופ מסחרי, טלפון נייד, מעמד עכבר עם חרוט אף, מלקחיים כפופים ומשוננים דק, הצינור האנדוטרכיאלי ואור הסיבים האופטיים, אם משתמשים. נקו את כל אלה עם פד הכנה לאיזופרופנול לפני השימוש. קח אורך של כ -20 סנטימטר של צינורות גמישים. כופפו אותו בצורת U והוסיפו חיבור מנעול פיתוי בקצה אחד. אבטח את צורת ה-U בעזרת עניבת טוויסט. הוסף שניים עד 300 מיקרוליטר של מים מסוננים סטריליים או דיו הודי לשפופרת. מכאן ואילך, מכלול זה מכונה צינור בועה. קח לולאת תפר על ידי קשירת 13 סנטימטרים של תפר משי מדורג אפס במעגל. הנח לולאה זו בחלק העליון של מעמד העכבר וודא ששני צידי התפר מאובטחים היטב. הנח את מעמד העכבר על גבי בסיס האור המגדיל המתכתי. מקם את הידיים המסייעות סביב המקום שבו יהיה פיו של העכבר. הנח עכבר בתא האינדוקציה. השתמש בחמצן בקצב זרימה קבוע של 0.8 ליטר לדקה ו-2% איזופלורן. להרדים את העכבר מספיק כדי לא להתעורר במהלך הנחת חרוט האף. אל תדכא באופן משמעותי את קצב הנשימה של העכבר. נשימות סדירות מסייעות בהערכת קפלי הקול. חבר את האוטוסקופ לטלפון הנייד וודא שהזנת הווידאו יציבה. זהירות, כדי למזער את החשיפה של החוקר לאיזופלואורן במהלך הליך זה, השתמש במכונת הנשמה כימית אם אתה מבצע אינטובציות מרובות או אימון בשיטה זו. לחלופין, בצע את ההליך בכמה עצים. שלב שני, בימוי בעלי חיים. קח את החיה הראשונה מתא האינדוקציה ברגע שהיא נרדמת. קשקשו אותם והניחו את השיניים העליונות שלהם לאורך התפר. הפעל מתח קל על החיה כדי לשמור על מיקום התפר תוך הנחת העכבר בחזרה על המעמד. כוונן את זווית הצוואר מעט לאחור, והנח את הצוואר בהארכה קלה של חמש עד 15 מעלות. דחף בעדינות את חרוט האף מעל הנארס. אל תדחוף את חרוט האף כלפי מטה בחוזקה מכיוון שהוא עלול להפריע לתפר לתליית העכבר. בעזרת מלקחיים גדולים ומשוננים דק, אחוז בחוזקה את הלשון קרוב ככל האפשר לשפה התחתונה. משכו אותו בחוזקה כלפי מטה והרחק מהשיניים העליונות ומעבר לצד השיניים התחתונות. זהירות, מתיחה ממושכת, מתח מוגזם או ריסוק הלשון עלולים לפגוע בבריאות בעלי החיים. נא לעקוב אחר סימני טראומה כולל שטפי דם, דימום, נפיחות או התייבשות של הלשון. אם נצפו כאלה, בטלו את ההליך והזעיקו את הצוות הווטרינרי. אם משתמשים בידיים עוזרות, תמכו במלקחיים במצב זה. הזינו את אור הסיב האופטי אם אתם משתמשים דרך הצנתר הגמיש עם טריז בטיחות האינטובציה במקומו. שלב שלישי, הערכה חזותית של מיתרי הקול ואינטובציה. כשהאוטוסקופ ביד הלא דומיננטית שלך, לחץ קלות על הלשון. לאחר מכן כוונו את המצלמה ואת מקור האור שלה כדי לדמיין את מיתרי הקול ליד בסיס הלשון. בשל שינויים קלים באנטומיה ובצבע הרקמה, השתמש בתנועה הקשורה לנשימה כדי לאשר זיהוי מבני. כאשר מתחילים לראשונה, התמצאות בפיד הווידאו עשויה להתגלות כקשה. אלה הם קפלי הקול הכוזבים. אלה מיתרי הקול האמיתיים. זוהי השתקפות של רקמת הבוקאלית. זהו אור הגשושית והסיבים האופטיים. זהו האפיגלוטיס. זהו החיך הרך. זהו ה-rima glottidis, היעד שלך לאינטובציה. זוהי שפת האוטוסקופ, המדכאת את הלשון. זה האזור שאסור להיכנס אליו. כאשר אור הסיב האופטי דולק, אם משתמשים, הזינו את הצינורית לצד האוטוסקופ, וצרו מגע קל עם בסיס הלשון או חלק השפתיים של האוטוסקופ. לעיון, התאם את זווית הגישה של הצנתר כך שתהיה רדודה מאוד. מיד לאחר החדרת הקטטר, פחות ממילימטר אחד מעבר לקפלי הקול, הרם את קצה הקטטר כך שיהיה כמעט מקביל לראש הספסל. זה מונע מהאפיגלוטיס לאלץ את הצנתר בגב לתוך הוושט. שימו לב, כמעט ולא אמורה להיות התנגדות בעת קידום הצנתר. אם נתקלים בהתנגדות, הסר מיד את הקטטר ואפשר לנשימה לחזור לקדמותה. אם נצפה דימום, יש להתייעץ עם הצוות הווטרינרי. שלב רביעי, אישור מיקום הצינור האנדוטרכיאלי. בנוסף לאישור חזותי לכך שהצינור נמצא במיקום הנכון באמצעות האוטוסקופ, קנה הנשימה מספק פחות התנגדות במהלך המיקום מאשר הוושט. עומק ההחדרה האופטית הוא כחמישה מילימטרים מעבר לקפלי הקול. ניתן לראות את האור דרך הצוואר כשיטה משנית לאישור שעומק ההחדרה מתאים. שים לב שטריז הבטיחות של האינטובציה אמור למנוע עומק מוגזם במיקום הצינור האנדוטרכיאלי. טריז הבטיחות ימנע טראומה לקורינה, אולם הוא לא חייב למנוע התקדמות. לאחר מכן, תוך כדי החזקת הצינור האנדוטרכיאלי במקומו, הסר את אור הסיב האופטי. ודא את המיקום המתאים של הצנתר בשיטת צינור הבועות. אבטח את צינור הבועות במקומו באמצעות המנעול התחתון. נפח הגאות צריך להיות ברור מיד. אם לא, הצינור האנדוטרכיאלי אינו במקומו. הסר אותו במהירות ואפשר לקצב הנשימה הרגיל של העכבר לחזור. שלב חמישי, אספקה תוך קנה הנשימה. בדומה לשיטת משיכת הלשון ללידה אורו-לועית, לידה באמצעות אינטובציה מסתכנת בטביעת החיה. בעכברים מתבגרים ובוגרים, 50 מיקרוליטר הוא נפח נוזלים בטוח בדרך כלל לאספקה ומספיק כדי להתפשט ברחבי הריאות. אם אתה משתמש בפיפטה למתן פיפטה, יש להחדיר את הנפח הרצוי ישירות לתוך הצנתר ולאפשר לעכבר לשאוף את התמיסה. כדי להבטיח אספקה מפוזרת לריאות, בתוספת הנוזל המועבר לריאות עם עד 500 מיקרוליטר אוויר. אם תרצה, ניתן לבצע שקעים מרובים של הצינור מבלי להסתכן בשאיפה שלילית של הנוזל המועבר. שימו לב, ייתכן שיהיה צורך בשימוש ביותר מנפח הגאות, כ-200 מיקרוליטר, בעת שטיפת החיסון באוויר. עם זאת, השימוש ב-500 מיקרוליטר אינו מסתכן בטראומה מכיוון שהוא מהווה רק כמחצית מהקיבולת החיונית. שלב שישי, הערכת הלידה. אור סיבים אופטיים כף יד יכול להיות עשוי מרכיבים זולים וקלים להשגה. ניתן להשתמש במכלול סיבים אופטיים מסחרי, כפי שמוצג כאן. עם זאת, מספיק מכסה צינור חרוטי בנפח 50 מ"ל עם חור מנוקב בתוכו באמצעות מחט בגודל 20 שדרכה מוזן כבל סיבים אופטיים מפלסטיק בגודל 0.75 מילימטר. בסרטון זה נעשה שימוש במכשירים מסחריים ובעבודת יד. תוצאות מייצגות, אספקה תוך-קנה באמצעות אינטובציה מביאה לשיפור הלידה ולהפחתת השונות בהשוואה לשאיבת הפה והלוע על ידי משיכת הלשון. השוואה ישירה של משיכת לשון ואינטובציה מודרכת. שלושה חוקרים שונים עם רמות קבורות של ניסיון או שהתבקשו לספק באופן עצמאי 50 מיקרוליטר של דיו הודי מדולל או לוע על ידי משיכת לשון לעכברי C57 BL/6J בני 10 עד 12 שבועות משני המינים. שני חוקרים גם העבירו את אותו מלאי ונפח דיו לריאה באמצעות אינטובציה כפי שתואר. הריאות הוסרו זמן קצר לאחר הלידה וצולמו בהגדלה פי 2. התצלומים הוערכו עבור אזור מוכתם על ידי חוקר עיוור עצמאי באמצעות תמונה J. היא גילתה שיותר אזור ריאות היה מוכתם אם נעשה שימוש באינטובציה. יתר על כן, השונות, המתבטאת באחוז סטייה מהממוצע, הצטמצמה אם נעשה שימוש באספקה תוך-קנה לאחר אינטובציה במקום במשיכת לשון. תחנה זו המשמשת לאינטובציה מודרכת מוכנה כפי שמוצג. משמאל, פיפטות למשלוח, צינור בועות לאישור מיקום מתאים של צינור אנדוטרכיאלי, מלקחיים, מרית, ספקולום אף לילדים, ידיים עוזרות, אור מגדיל, מעמד עכבר עם חרוט אף, בדיקה סיבים אופטיים ותא אינדוקציה להרדמה. אינטובציה מניבה אספקה גדולה יותר לריאה עם פחות שונות ביחס לשאיפת זרחנים אורגניים. עכברי מסתם C נקבות בנות 10 שבועות קיבלו מינון של 10 פעמים 10 עד ה-11 VG של AIV 6.2 לוציפראז והוערכו בהדמיה ביולוגית in vivo שבעה ימים לאחר מכן. 10 דקות לפני ההדמיה, הם הוזרקו תת עורית עם לוציפרין. מוצגות תמונות מייצגות של עכברים המקבלים AV 6.2 לוציפראז על ידי שאיבת OP לאחר משיכת לשון או התקנה תוך-קנה על ידי אינטובציה. שאיבת הפה והלוע על ידי משיכת לשון הובילה להפצת האות בחלקים שונים של דרכי הנשימה העליונות, ואילו אינטובציה הובילה לאות מרוכז בריאה. אזורי העניין הם אותו אזור, והבהירות הממוצעת בתוך האזור מוצגת בתמונה. כימות אותות לוציפראז חשף שיפור ביעילות המסירה לריאות על ידי אינטובציה והדגיש עוד יותר את השונות המופחתת באספקה בשיטה זו. מסקנה, כפי שניתן לראות באיורים הקודמים, חיסון בין-ריאתי בשיטת משיכת הלשון המסורתית מראה התפלגות חיסונים לא עקבית ושונות גדולה יותר בכמות המגיעה לריאות. לעומת זאת, שיטת האינטובציה הובילה להעברה עקבית יותר הן לריאה הימנית והן לריאות השמאליות והייתה פחות משתנה. התוצאות החיוביות המוכחות של שיטת אינטובציה זו הן, אחת, התקנה ניתנת לשכפול של עד 50 מיקרוליטר לריאות העכבר, שתיים, פיזור מפוזר של נוזל מוזרק בכל הריאות, ושלישית, התפשטות מופחתת של החיסון מעבר לריאות. שיטה זו מהירה, בטוחה וניתנת לשילוב בהליכי מעבדה ללא ציוד יקר או הכשרה אינטנסיבית.