במבחנה בדיקת פקקת למכשירי עזר לחדרים

אנו מציגים פרוטוקול שולחני לגרימת פקקת במכשירי עזר לחדרים (VAD) בתוך פלטפורמת בדיקה מחזורית. שיטה זו משמשת לזיהוי נקודות חמות טרומבוגניות בנתיב זרימת הדם ויכולה לסייע בשיפור עמידות לפקקת לקראת ניסויים פרה-קליניים במודלים של בעלי חיים.

אנו שואפים לפתח פרוטוקול מעשי ונגיש לזיהוי נקודות חמות טרומבוגניות פוטנציאליות במכשירי עזר לחדר, ולגשר על הפער הקריטי בין אב טיפוס מוקדם לניסויים בבעלי חיים. ניסויים בבעלי חיים המשיכו להיות השיטה העיקרית להערכת פקקת במכשירי עזר לחדר. בעוד שדינמיקת זורמים חישובית הפכה לכלי רב ערך לאימות תכנון, היא עדיין לא יכולה להחליף אימות in vitro ו-in vivo.

האופי המורכב של נוכחות קרישת הדם וגורמים מבלבלים רבים, מקשים על ההבחנה בין פקקת המכשיר בפועל לבין חפצים ניסיוניים. שיטות חוץ גופיות להערכת פקקת ב-VADs נותרו לא מנוצלות, ואין שיטה סטנדרטית עד כה. על ידי הצעת מדריך מקיף לפרוטוקול ווידאו, אנו מקווים להקל על אימוץ רחב יותר של שיטות שולחניות.

שיטה זו נותנת מענה הן לאתגר טכני והן לאתגר אתי בפיתוח מכשור רפואי, מפחיתה את ההסתמכות על ניסויים בבעלי חיים, תוך שיפור היכולת לזהות סיכוני פקקת בשלב מוקדם בתהליך הפיתוח. כדי להתחיל, מלאו את לולאת הבדיקה ב -150 מיליליטר דם. הסר את כל האוויר הכלוא בלולאה.

אם אתה משתמש במשאבת דם עם זרימה צירית, סובב אותה למצב אנכי כדי לשחרר אוויר באמצעות ציפה. אם אתה משתמש במשאבה צנטריפוגלית, הפוך אותה הפוך וסובב אותה כדי להבטיח שאוויר לא נלכד בנתיבי זרימה משניים. הקש בעדינות על משטחי הצינורות והמאגר וסחט את כל בועות האוויר כדי לעקור אותן.

בדוק מקרוב את החלקים האופקיים של הצינורות ואת החיבורים בין צינורות למחברים כדי לוודא שאין בועות אוויר. סחטו את השקית התוך ורידית כדי לקרב את מפלס הנוזל לחלק העליון הצר. לאחר מכן מהדק את השקית עם המוסטט על פני קו הנוזל כדי לחסל את ממשק הנוזל-אוויר, וסגור את תא העצירה של פתח האוורור.

לאחר מכן, סגור את תא העצירה בקצה קווי הלחץ. הסר את צינור המונומטר והצמד מזרק של שלושה מיליליטר. פתח את תא העצירה ושאב מיליליטר עד שניים של נוזלים לקו ההארכה, כארבעה סנטימטרים.

סגור את תא העצירה, נתק את המזרק וחבר מחדש את צינור המונומטר. פתח את תא העצירה כדי לאפשר קריאות לחץ. לבסוף, יש להפעיל את יציאת הדגימה באמצעות מזרק.

לאחר מכן, חותכים או קורעים מגבון נטול מוך לשלושה שברים שווים. סובב את הפינה של שבר אחד ליצירת קצה והכנס אותו לפתח ההזרקה כדי לספוג שאריות דם. סובב את השבר השני.

הרטיבו אותו במי מלח, והכניסו את הקצה הרטוב לפתח כדי להסיר את כל הדם שנותר. השתמש בשבר השלישי כדי לספוג שאריות מלח ביציאה. כעת הפעל את מכשיר העזר לחדר, או VAD, במהירות נמוכה והפעל אותו למשך כחמש שניות כדי לעקור את כל בועות האוויר הכלואות בתוך המשאבה.

עצור את המשאבה. אם מופיעות בועות כלשהן בתיק, חזור על ביטול האוויר. הפעל מחדש את המשאבה במהירות נמוכה כדי להזרים את הדם בלולאה.

העבירו מיליליטר אחד של נתרן הפרין, שני מיליליטר מתמיסת הסידן כלוריד המוכנה ו -1.5 מיליליטר EDTA לצינורות נפרדים. כדי להוסיף הפרין לדם בלולאה, שאפו 75 יחידות של הפרין לתוך מיקרופיפטה, והוציאו אותה למזרק של שלושה מיליליטר על ידי הוצאת הפיפטה ומשיכת בוכנת המזרק מבלי להישפך. השתמש ביציאה הרוחבית של תא העצירה התלת-כיווני כדי לתת חומרים לתוך הלולאה בעזרת מזרק.

סובב את מנעול הפיתוי הגברי על תא העצירה כך שיציאת ההזרקה פונה כלפי מעלה כדי ללכוד בועות אוויר בחלק העליון. כעת חבר את המזרק ליציאת ההזרקה דרך מנעול הפיתוי כשהיציאה פונה כלפי מעלה והמזרק פונה אנכית כלפי מטה. משוך את בוכנת המזרק כדי למלא אותה בדם ולערבב את הפרין עם הדם תוך שאיבת אוויר לתוך המזרק.

הניחו לבועות האוויר לעלות לראש המזרק. לאחר מכן הזריקו את התערובת לתוך הלולאה, וודאו שלא ייכנס אוויר. העבירו דם פנימה והחוצה מהמזרק ארבע עד חמש פעמים כדי להבטיח שהדם ההפריני לא יישאר מוגבל לחלל בנמל.

כדי לטטר את זמן הקרישה המופעל, או ACT, של הדם בלולאה, הוסף תחילה 750 מיקרוליטר של תמיסת סידן כלוריד מולרית אחת ל-150 מיליליטר דם בלולאה. כדי למנוע קרישת דם, הזריק במהירות את הנוזל לאחר הסרת שאריות אוויר. לחלופין, יש לדלל את הסידן כלורי במזרק עם מיליליטר אחד של תמיסת מלח עם טריס כדי להפחית קרישה מוקדמת.

לאחר מתן הסידן המוזרק להסתובב במשך שתי דקות לפחות, חבר מזרק של מיליליטר אחד ליציאת הדגימה. שאבו והשליכו 0.5 מיליליטר של דם פסולת כדי לנקות דם עומד מהיציאה. לאחר מכן, חבר מזרק חדש של מיליליטר ליציאת הדגימה ושאב 0.5 מיליליטר דם לניתוח.

מדוד את זמן הקרישה המופעל באמצעות מערכת קרישת דם מלא בנקודת טיפול. נקה את יציאת הדגימה באמצעות מגבונים נטולי מוך כפי שהודגם קודם לכן. עיין בערכי הטיטרציה כדי ליידע את ריכוז היעד של סידן כלוריד.

הגדל בהדרגה את ריכוז הסידן כדי להשיג זמן קרישה פעיל של 300 שניות. התחל את בדיקת הפקקת במבחנה לאחר השגת ה-ACT של 300 שניות בלולאה. כוונן את המשאבה לקצב הזרימה והלחץ הרצויים על ידי שינוי מהירות הרוטור וויסות ההתנגדות באמצעות מהדק הופמן.

מדוד את ה-ACT כל 15 דקות על ידי שאיבת דגימת דם מהלולאה והנחת טיפת דם לתוך מכשיר ה-ACT, כפי שהודגם קודם לכן. אם ה-ACT יורד מתחת ל-200 שניות, הזריק 25 יחידות נוספות של נתרן הפרין לתוך הלולאה. לאחר שעה, הזריק 1.5 מיליליטר של EDTA 0.5 מולרית לתוך הלולאה כדי לעכב קרישה נוספת.

תנו ל-EDTA להסתובב וערבבו במשך שתי דקות, ואז עצרו את המשאבה. בעזרת המוסטטים, clamp את הצינור המחובר לכניסה ויציאת המשאבה, ומקם את המהדקים במרחק של שלושה עד ארבעה סנטימטרים מדוקרני הכניסה והיציאה. נתק בזהירות את הצינור כדי לשחרר את המשאבה.

לאחר מכן מסננים את הדם מהמשאבה ואת לולאת הזרימה למיכל. לבסוף, פיפטה תמיסת מלח דרך כניסת ויציאת המשאבה כדי לשטוף את שאריות הדם. שקיעת טסיות נצפתה באופן עקבי לאורך שורשי הלהבים באבות הטיפוס של המשאבה.

ליטוש אלקטרו של רכיבי הטיטניום ביטל את היווצרות הפקקת באזורים אלה. לאב הטיפוס היה גם קואופציה לא מושלמת בצומת רכיבי הדיור הקדמי והאחורי, וכתוצאה מכך נוצר סדק שבו דם חלחל פנימה ונקרש. חיפוי וליטוש שיפרו את התאמת הרכיבים והפחיתו את היווצרות הפקקת.

שגיאות פרוצדורליות וביטול שידור לא מלא של הלולאה יכולים להציג חפצים. במקרה זה, שגיאה ניסיונית במהלך הזרקת סידן כלוריד גרמה לקרישה מקומית, והפקקת שנוצרה נכנסה למשאבת המגלב הצנטריפוגלית, וחסמה את נתיב הזרימה. קרישים כדוריים דבוקים באופן רופף הנצפים על משטחים הם לרוב תוצאה של בועות אוויר עטופות בתוך קרישים.

חומר זר ופסולת שהסתובבו בלולאה נעטפו גם הם בפקקת והודבקו למשטחי המשאבה. פקקת טבעת בצמתים של מחברי צינורות העידה על טווח ACT אופטימלי במהלך הבדיקה.