תכולת פלבנואידים במהלך הצמיחה והתפתחות הפרחים של קלנדולה רפואית L.

המחקר שלנו משתמש בשיטה קולורימטרית נגישה ואמינה לכימות סך הפלבנואידים, מה שמקל על ניתוח נתונים במעבדות פיטוכימיה ותומך במחקר של תרכובות בעלות תכונות טיפוליות.

תכולת הפלבנואידים בקלנדולה נחקרת במהלך התפתחות הפרחים כדי לזהות את זמן הקציר האופטימלי ולמקסם את הפוטנציאל הרפואי והמסחרי שלו.

הפרוטוקול שלנו הוא מיקרו-טכניקה רגישה ויעילה המאפשרת כימות של פלבנואידים באמצעות כמויות דגימה קטנות, אופטימיזציה של השימוש בממס וניתוח עם חומר צמחי מוגבל.

[מדריך] כדי להתחיל, יבש את החומר הצמחי בתנור אוויר מאולץ בחום של 40 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות. לאחר הייבוש מוציאים אותו מהתנור, מעבירים את החומר המיובש למעטפות נייר ושומרים אותם בחושך בטמפרטורת החדר. הקפיאו את החומר הצמחי באמצעות חנקן נוזלי כדי להתכונן לטחינה. לאחר מכן, טוחנים את החומר הקפוא במכתש חרסינה עד שהוא מגיע למרקם אחיד. הכן את הדגימות על ידי שקילת 25 מיליגרם של החומר המרוסק מכל דגימה. הוסף 500 מיקרוליטר של 80% מתנול לחומר השקול. כדי לחלץ פלבנואידים, דגרו על התערובת בטמפרטורה של 70 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר הדגירה, צנטריפוגה את התערובת בחום של 731 גרם למשך 13 דקות. כעת, הכינו אליקוטים על ידי נטילת 150 מיקרוליטר מהתמצית המתקבלת, והוספת 37 מיקרוליטר של 80% מתנול אליו. קח 50 מיקרוליטר מהתמצית והוסף 100 מיקרוליטר של אשלגן אצטט טוחנת אחת, ו -100 מיקרוליטר של 10% אלומיניום כלוריד. השלם את התמיסה על ידי הבאת הנפח הכולל של התערובת עד חמישה מיליליטר באמצעות מים מזוקקים. הגדר את אורך גל הספיגה של ספקטרופוטומטר ל-415 ננומטר, ומדוד את ספיגת התמיסה. צרו את עקומת הכיול על ידי הכנת תמיסות קוורצטין בטווח של 50, 100, 175 ו-350 מיליגרם למיליליטר. להכנת דגימות כיול, פיפטה 500 מיקרוליטר מתמיסת הקוורצטין מהנקודה האחרונה של עקומת הכיול, והוסף לתמיסה 100 מיקרוליטר של 10% אלומיניום כלוריד, ו-100 מיקרוליטר של אשלגן אצטט טוחנת אחת. לאחר מכן, הוסיפו 1.5 מיליליטר של 80% מתנול ו-2.8 מיליליטר מים מזוקקים. הניחו לתמיסות הכיול לנוח 40 דקות בטמפרטורת החדר. הגדר את אורך גל הספיגה של הספקטרופוטומטר ל-415 ננומטר, ומדוד את הספיגה של דגימות הכיול כדי לבנות את עקומת הכיול. לבסוף, חשב את ריכוז הפלבנואידים ותכולת הפלבנואידים לגרם של חומר יבש. טבלה זו מסכמת כיצד ריכוז הפלבנואידים וייצור הפלבנואידים לצמח משתנים מהיווצרות הניצנים הראשונית ועד לפריחה מלאה והתפתחות פרי בראשי פרחי קלנדולה. רמות גבוהות יותר של ריכוז פלבנואידים כולל נצפו בין השלבים 8 ל-11, בהתאמה לניצנים עם עלי גביע מופרדים לראשי פרחים שנפתחו במלואם. בשלבים מוקדמים יותר, כמו ניצנים עם עלי גביע מאוחדים, ובשלבים מאוחרים יותר כמו ראשי פרחים מזדקנים, ריכוזי הפלבנואידים היו נמוכים ב-22% עד 27% בהשוואה לראשי פרחים שנפתחו במלואם. איור זה מציג את מדידת ריכוז הפלבנואידים הכולל בחומר יבש של ראשי פרחי קלנדולה, פרחי ליגולט ופרחים צינוריים לאורך שלבי התפתחות הפרחים. התוצאות מצביעות על כך שהבנת השונות של ריכוז הפלבונואידים בין מבנים ושלבים שונים של פרחים שימושית לקביעת זמן הקציר האופטימלי כדי למקסם את תכולת הפלבנואידים בראשי פרחי קלנדולה.