Name: אסטרטגיית הפרעות CRISPR כפולות למיקוד אינטראקציות קטלניות סינתטיות בין RNA לא מקודדים בתאים סרטניים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: למד אסטרטגיית CRISPRi כפולה לזיהוי אינטראקציות קטלניות סינתטיות בין RNA ארוך לא מקודד בתאי מלנומה. שיטה זו מאפשרת הכפלה משולבת של גנים ומסייעת בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות בסרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lander, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+sequencing+and+analysis+of+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Initial sequencing and analysis of the human genome.</a> Nature. 409 (6822), 860-921 (2001).</li>
<li>ENCODE Project Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+encyclopedia+of+DNA+elements+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An integrated encyclopedia of DNA elements in the human genome.</a> Nature. 489 (7414), 57-74 (2012).</li>
<li>Szcześniak, M. W., Wanowska, E., Mukherjee, N., Ohler, U., Makałowska, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+deeper+annotation+of+human+lncRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Gene+Regul+Mech%22%5BJournal%5D)">Towards a deeper annotation of human lncRNAs.</a> Biochim Biophys Acta Gene Regul Mech. 1863 (4), 194385(2020).</li>
<li>Fang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NONCODEV5%3A+a+comprehensive+annotation+database+for+long+non-coding+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">NONCODEV5: a comprehensive annotation database for long non-coding RNAs.</a> Nucl Acids Res. 46 (D1), D308-D314 (2018).</li>
<li>Lin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-specific+lncRNAs+contributed+critically+to+human+evolution+by+distinctly+regulating+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Human-specific lncRNAs contributed critically to human evolution by distinctly regulating gene expression.</a> eLife. 12, RP89001.2(2023).</li>
<li>Sarropoulos, I., Marin, R., Cardoso-Moreira, M., Kaessmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+dynamics+of+lncRNAs+across+mammalian+organs+and+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Developmental dynamics of lncRNAs across mammalian organs and species.</a> Nature. 571 (7766), 510-514 (2019).</li>
<li>Melé, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+genomics.+The+human+transcriptome+across+tissues+and+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human genomics. The human transcriptome across tissues and individuals.</a> Science. 348 (6235), 660-665 (2015).</li>
<li>Cabili, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+annotation+of+human+large+intergenic+noncoding+RNAs+reveals+global+properties+and+specific+subclasses%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Integrative annotation of human large intergenic noncoding RNAs reveals global properties and specific subclasses.</a> Genes Dev. 25 (18), 1915-1927 (2011).</li>
<li>Liu, S. J., Dang, H. X., Lim, D. A., Feng, F. Y., Maher, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+noncoding+RNAs+in+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Long noncoding RNAs in cancer metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 21 (7), 446-460 (2021).</li>
<li>Ahmad, M., Weiswald, L. B., Poulain, L., Denoyelle, C., Meryet-Figuiere, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lncRNAs+in+cancer+cells+migration%2C+invasion+and+metastasis%3A+cytoskeleton+and+ECM+crosstalk%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Involvement of lncRNAs in cancer cells migration, invasion and metastasis: cytoskeleton and ECM crosstalk.</a> J Exp Clin Cancer Res. 42 (1), 173(2023).</li>
<li>Jain, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LncPRESS1+Is+a+p53-Regulated+LncRNA+that+Safeguards+Pluripotency+by+Disrupting+SIRT6-Mediated+De-acetylation+of+Histone+H3K56%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">LncPRESS1 Is a p53-Regulated LncRNA that Safeguards Pluripotency by Disrupting SIRT6-Mediated De-acetylation of Histone H3K56.</a> Mol Cell. 64 (5), 967-981 (2016).</li>
<li>Bergmann, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+ESC+transcriptome+by+nuclear+long+noncoding+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of the ESC transcriptome by nuclear long noncoding RNAs.</a> Genome Res. 25 (9), 1336-1346 (2015).</li>
<li>Kretz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+somatic+tissue+differentiation+by+the+long+non-coding+RNA+TINCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Control of somatic tissue differentiation by the long non-coding RNA TINCR.</a> Nature. 493 (7431), 231-235 (2013).</li>
<li>Yoon, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LincRNA-p21+suppresses+target+mRNA+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">LincRNA-p21 suppresses target mRNA translation.</a> Mol Cell. 47 (4), 648-655 (2012).</li>
<li>Huarte, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+lncRNAs+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">The emerging role of lncRNAs in cancer.</a> Nat Med. 21 (11), 1253-1261 (2015).</li>
<li>Badowski, C., He, B., Garmire, L. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-derived+lncRNAs+as+biomarkers+for+cancer+diagnosis%3A+the+Good%2C+the+Bad+and+the+Beauty%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precis+Oncol%22%5BJournal%5D)">Blood-derived lncRNAs as biomarkers for cancer diagnosis: the Good, the Bad and the Beauty.</a> NPJ Precis Oncol. 6 (1), 40(2022).</li>
<li>Zong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockdown+of+nuclear-retained+long+noncoding+RNAs+using+modified+DNA+antisense+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Knockdown of nuclear-retained long noncoding RNAs using modified DNA antisense oligonucleotides.</a> Meth Mol Biol. 1262, 321-331 (2015).</li>
<li>Gagnon, K. T., Li, L., Chu, Y., Janowski, B. A., Corey, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAi+factors+are+present+and+active+in+human+cell+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">RNAi factors are present and active in human cell nuclei.</a> Cell Rep. 6 (1), 211-221 (2014).</li>
<li>Zeng, Y., Cullen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+human+cells+is+restricted+to+the+cytoplasm%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">RNA interference in human cells is restricted to the cytoplasm.</a> RNA. 8 (7), 855-860 (2002).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9-mediated+noncoding+RNA+editing+in+human+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22RNA+Biol%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9-mediated noncoding RNA editing in human cancers.</a> RNA Biol. 15 (1), 35-43 (2018).</li>
<li>Liu, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPRi-based+genome-scale+identification+of+functional+long+noncoding+RNA+loci+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CRISPRi-based genome-scale identification of functional long noncoding RNA loci in human cells.</a> Science. 355 (6320), aah7111(2017).</li>
<li>Tsung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPRi+screen+of+long+non-coding+RNAs+identifies+LINC03045+regulating+glioblastoma+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">CRISPRi screen of long non-coding RNAs identifies LINC03045 regulating glioblastoma invasion.</a> PLoS Genet. 20 (6), e1011314(2024).</li>
<li>Gilbert, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-mediated+modular+RNA-guided+regulation+of+transcription+in+eukaryotes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcription in eukaryotes.</a> Cell. 154 (2), 442-451 (2013).</li>
<li>Boettcher, M., McManus, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+the+right+tool+for+the+job%3A+RNAi%2C+TALEN%2C+or+CRISPR%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Choosing the right tool for the job: RNAi, TALEN, or CRISPR.</a> Mol Cell. 58 (4), 575-585 (2015).</li>
<li>Yeo, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enhanced+CRISPR+repressor+for+targeted+mammalian+gene+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">An enhanced CRISPR repressor for targeted mammalian gene regulation.</a> Nat Meth. 15 (8), 611-616 (2018).</li>
<li>Parrish, P. C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+synthetic+lethal+and+tumor+suppressor+paralog+pairs+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Discovery of synthetic lethal and tumor suppressor paralog pairs in the human genome.</a> Cell Rep. 36 (9), 109597(2021).</li>
<li>Najm, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthologous+CRISPR-Cas9+enzymes+for+combinatorial+genetic+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Orthologous CRISPR-Cas9 enzymes for combinatorial genetic screens.</a> Nat Biotechnol. 36 (2), 179-189 (2018).</li>
<li>Petroulia, S., et al. CRISPR-inhibition screen for lncRNAs linked to melanoma growth and metastasis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPetroulia%2C+S+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Hsu, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+targeting+specificity+of+RNA-guided+Cas9+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">DNA targeting specificity of RNA-guided Cas9 nucleases.</a> Nat Biotechnol. 31 (9), 827-832 (2013).</li>
<li>New England Biolabs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22NEBuilder+HiFi+DNA+Assembly+Reaction+%28E2621%29+v2%22">NEBuilder HiFi DNA Assembly Reaction (E2621) v2</a>. , (2020).</li>
<li>Cortés-Ríos, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+quantification+by+bicinchoninic+acid+%28BCA%29+assay+follows+complex+kinetics+and+can+be+performed+at+short+incubation+times%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Protein quantification by bicinchoninic acid (BCA) assay follows complex kinetics and can be performed at short incubation times.</a> Anal Biochem. 608, 113904(2020).</li>
<li>Junior, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJunior%2C+N+%22Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis+%28SDS-PAGE%29+v1%22">Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) v1</a>. , (2019).</li>
<li>Chen, X., Liu, J., Janssen, J. M., Gonçalves, M. A. F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chromatin+structure+differentially+impacts+high-specificity+CRISPR-Cas9+Nuclease+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucl+Acids%22%5BJournal%5D)">The chromatin structure differentially impacts high-specificity CRISPR-Cas9 Nuclease strategies.</a> Mol Ther Nucl Acids. 8, 558-563 (2017).</li>
<li>Schep, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+chromatin+context+on+Cas9-induced+DNA+double-strand+break+repair+pathway+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Impact of chromatin context on Cas9-induced DNA double-strand break repair pathway balance.</a> Mol Cell. 81 (10), 2216-2230.e10 (2021).</li>
<li>Daer, R. M., Cutts, J. P., Brafman, D. A., Haynes, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+chromatin+dynamics+on+Cas9-Mediated+genome+editing+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Syn+Biol%22%5BJournal%5D)">The impact of chromatin dynamics on Cas9-Mediated genome editing in human cells.</a> ACS Syn Biol. 6 (3), 428-438 (2017).</li>
<li>Chavez, M., Rane, D. A., Chen, X., Qi, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+expression+of+large+transgenes+via+the+knock-in+of+an+integrase-deficient+lentivirus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Stable expression of large transgenes via the knock-in of an integrase-deficient lentivirus.</a> Nat Biomed Eng. 7 (5), 661-671 (2023).</li>
<li>Ellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+and+variegation+of+gammaretrovirus+and+lentivirus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Silencing and variegation of gammaretrovirus and lentivirus vectors.</a> Human Gene Ther. 16 (11), 1241-1246 (2005).</li>
<li>Shrestha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomics+and+epigenetics+guided+identification+of+tissue-specific+genomic+safe+harbors%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Genomics and epigenetics guided identification of tissue-specific genomic safe harbors.</a> Genome Biol. 23 (1), 199(2022).</li>
<li>Chu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+gene+transfection+and+induction+of+apoptosis+in+melanoma+cells+by+branched+poly%28%CE%B2-amino+ester%29s+with+uniformly+distributed+branching+units%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Enhanced gene transfection and induction of apoptosis in melanoma cells by branched poly(β-amino ester)s with uniformly distributed branching units.</a> J Control Release. 367, 197-208 (2024).</li>
<li>Han, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleofection+is+a+highly+effective+gene+transfer+techfnique+for+human+melanoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Nucleofection is a highly effective gene transfer techfnique for human melanoma cell lines.</a> Exp Dermatol. 17 (5), 405-411 (2008).</li>
</ol>

למרות שפחות מ-3% מהגנום האנושי מקודד חלבונים, כ-80% מהגנום מועתק 1,2. מבין יחידות השעתוק הלא מקודדות, עשרות אלפים מסווגים כ-RNA ארוך שאינו מקודד (lncRNAs) העולה על 200 נוקלאוטידים, והמספר הכולל של lncRNAs אנושיים מוערך בלמעלה מ-100,000 3,4. בניגוד לגנים מקודדים, lncRNAs נשמרים פחות בין מינים. בהתחשב בכך שבני אדם חולקים 99% מהגנום שלהם עם פרימטים כמו שימפנזים, ההשערה היא של-lncRNA יש השפעה הרבה יותר גדולה על האבולוציה הפנוטיפית 5,6. ממצאים אלה מצביעים על תפקודים תאיים חשובים של lncRNAs. למרות שהרגולציה של lncRNAs והאינטראקציות שלהם עם חלבונים קושרי RNA ו-RNA אחרים נותרו לא מובנים לחלוטין, ו-lncRNAs רבים עדיין לא הוסברו במלואם, ברור ש-lncRNAs מציגים דפוסי ביטוי ספציפיים לתאים ולרקמות בבריאות ובמחלות, כגון סרטן 7,8,9,10. הם מעורבים בפונקציות מגוונות, כולל ויסות שעתוק גנים, מעורבות באינטראקציות כרומטין11, עיבוד RNA12, ייצוב RNA13 וויסות תרגום14.
בסרטן, lncRNAs מגוונים מאוד ספציפיים לסוג התא משפיעים על התפתחות הגידול והגרורות על ידי ויסות ביטוי הגנים, ומדגישים את הפוטנציאל שלהם כמטרות טיפוליות חשובות15. מעבר לזיהוי lncRNAs כסמנים ביולוגיים בדגימות גידול16, התמקדות ב-lncRNAs ספציפיים לגידול כדי לשבש את תפקודיהם במורד הזרם טומנת בחובה פוטנציאל משמעותי הן ביישומים קליניים והן במחקר בסיסי. גישות מבוססות RNA להבהרת התפקידים של lncRNAs כוללות אוליגונוקלאוטידים אנטיסנס (ASOs), RNA סיכת ראש קצרה ו-RNA מפריע קטן (siRNA)17,18. בעוד ש-siRNA משמש בדרך כלל למסכי השתקת גנים, הנוקדאון מבוסס siRNA מוגבל לציטופלזמה19. עם זאת, lncRNA פועל לעתים קרובות בתוך הגרעין.
לחלופין, ניתן להשתמש בהפרעות פלינדרומיות קצרות (CRISPRi) כדי לעכב lncRNAs בסרטן אנושי20. יתר על כן, ניתן לתכנת בקלות מסכי CRISPRi ברחבי הגנום ולמקד למגוון רחב של גנים מקודדים ולא מקודדים כדי לבחון את השפעתם התפקודית21,22. ב-CRISPRi חסר קטליטי Cas9 (dCas9) מאוחה לתחום מדכא שעתוק, כגון תחום הקופסה הקשורה לקרופל (KRAB)23. דיכוי גנים על ידי dCas9-KRAB מונחה על ידי RNA מנחה (gRNA) לאזור העניין. CRISPRi שולט בגנים ברמות ה-DNA, מה שמוביל ליעילות גבוהה יותר ולפנוטיפים רצויים של אובדן תפקוד בניגוד להפרעות RNA, הפעיל ברמה שלאחר השעתוק24. בתגובה ליעילות המוגבלת של KRAB בהשתקת מטרה, מיזוג של KRAB ו-MeCP2 עם dCas9 הוצג כאסטרטגיית דיכוי יעילה יותר25.
למרות שהשתקת גן בודד עשויה להשפיע על כדאיות הסרטן, אינטראקציות סינתטיות כפולות או מרובות קטלניות יכולות להציל תאים סרטניים ממוות תאי26. קטלניות סינתטית מערבת שני גנים או יותר, שכל אחד מהם יכול לפצות על תפקודו של השני. כדי להתגבר על בעיות עם מסכי נוקדאון של גן בודד, אסטרטגיות CRISPR כפולות המכוונות לזוגות גנים מקודדי חלבון קטלניים מציעות גישה מבטיחה27.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול לשימוש קומבינטורי של מיקוד מבוסס CRISPRi אורתוגונלי של lncRNA או זוגות RNA אחרים שאינם מקודדים באמצעות Staphylococcus aureus ו-Streptococcus pyogenes dCas9 שהתמזגו ל-KRAB-MeCP2 בתאי מלנומה אנושיים (ראה איור 1). ניתן להשתמש בפרוטוקול להפלת CRISPR קלאסית קומבינטורית או כהקרנה מבוססת CRISPRi של זוגות קטלניים סינתטיים בסרטן. השימוש בשני מינים שונים של dCas9, SpCas9 ו-SaCas9, בגישת CRISPRi מאפשר מיקוד עצמאי של מיקומים גנומיים מובחנים עם תגובתיות צולבת מינימלית, שיפור הספציפיות והגמישות תוך הבטחת סלקטיביות גבוהה על המטרה. נעשה שימוש במוטיבים סמוכים שונים של פרוטו-ספייסר (PAMs): NGG עבור SpCas9 ו-NNGRRT עבור SaCas9. מערכת ה-dCas9 הכפולה מתמודדת עם אתגרים כגון תאימות sgRNA מוגבלת על ידי מתן אפנון מדויק בו-זמני והפחתת תחרות מורכבת sgRNA-RNP בעת שימוש בסוג יחיד של dCas9. חידוש זה משפר את החוסן והרבגוניות של סינון ספריית sgRNA כפולה. לסיכום, אנו מספקים מערכת CRISPRi כפולה מתפקדת במלואה בתאי מלנומה כמודל סרטני.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67752/67752fig01.jpg"> 
איור 1: סכימה של מערכת CRISPRi הכפולה להתמקדות באינטראקציות קטלניות סינתטיות של RNA לא-מקודדים. (A) הליך שיבוט של וקטור ה-gRNA הכפול. (ב) תאי HEK293 הועברו עם פלסמיד מעטפת VSV-G, אריזת פלסמיד PAX2 וקטור העברה לייצור לנטי-וירוסים להעברה לאחר מכן לתאי 501-mel. לנטי-וירוסים המכילים את המידע הגנטי עבור SpdCas9-KRAB-MeCP2 (כחול) ו-SadCas9-KRAB-MeCP2 (אדום) שולבו בתאי 501-mel בו זמנית. לאחר בחירת האנטיביוטיקה, בוצעה התמרה שנייה של לנטי-ויראלי כדי לשלב את ה-gRNA הכפול הרצוי (ירוק זית). (C) תאי 501-mel המבטאים את גרסאות dCas9 מקיימים אינטראקציה עם ה-gRNAs המתאימים להם כדי להשתיק את ביטוי גן המטרה, וכתוצאה מכך מוות של תאי סרטן. נוצר עם BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/67752fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table><tbody><tr><td>מסנן אולטרה צנטריפוגלי Amicon, 100 kDa MWCO</td><td>Millipore</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן חד שבטי לעכבר anti-Cas9 (S. aureus) (6H4)</td> טכנולוגיית <td>איתות תאים</td><td>48989</td><td></td></tr><tr><td>anti-Cas9 (S. pyogenes) (7A9-3A3) נוגדן חד שבטי</td> טכנולוגיית <td>איתות תאים</td><td>14697</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן חד שבטי לעכבר anti-GAPDH&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8795</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse IgG (מולקולה שלמה)&ndash; נוגדן פרוקסידאז המיוצר בארנב</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>A9044</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad ChemiDoc MP Imaging System&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blasticidine S hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15205-25MG</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo בדיקת כדאיות תאים זוהרים</td><td>Promega</td><td>G7570</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5415R</td><td></td></tr><tr><td>CFX Connect מערכת זיהוי PCR בזמן אמת</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מצע Clarity Western ECL, 500 מ"ל</td><td>Bio-Rad</td><td>1705061</td><td></td></tr><tr><td>CO2 אינקובטור דגם CB 170</td><td>קלסר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cOmplete מעכב פרוטאז קוקטייל</td><td>רוש</td><td>11697498001</td><td></td></tr><tr><td>אנזים הגבלה Esp3I (BsmB1) Thermo</td><td>Scientific</td><td>ER0451</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 10 מ"ל סרולוגי פיפט</td><td>קורנינג</td><td>356551</td><td></td></tr><tr><td>פלקון 25 מ"ל פיפט סרולוגי</td><td>קורנינג</td><td>357525</td><td></td></tr><tr><td>פלקון 5 מ"ל סרולוגי פיפט</td><td>קורנינג</td><td>356543</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>F9665-500 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>ג'יבקו דולבקו' s שונה Eagle' s בינוני (DMEM), גלוקוז גבוה, פירובט</td><td>Gibco</td><td>41966029</td><td></td></tr><tr><td>קו תאי מלנומה אנושית 501-mel</td><td>סופק באדיבות על ידי מעבדת Aifantis (אוניברסיטת ניו יורק)</td><td>RRID: CVCL_4633</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon -P PVDF ממברנה</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td></td></tr><tr><td>Lenti-X 293T קו תאים HEK</td><td>Takara Bio</td><td>632180</td><td></td></tr><tr><td>מערכת תאי טרנס-בלוט&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra מערכת יציקה ידנית</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NEBuilder HiFi DNA Assembly Reaction&nbsp;</td><td>ניו אינגלנד Biolabs</td><td>E2621</td><td></td></tr><tr><td>אבקת חלב ללא שומן&nbsp;</td><td>Biomol</td><td>54650</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE LDS מאגר דגימה (4x)</td> <td>Invitrogen</td><td>NP0008</td><td></td></tr><tr><td>One Shot Stbl Chemical Qualified E. coli</td><td>Invitrogen</td><td>C737303</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I סרום מופחת</td><td>בינוני Gibco</td><td>31985062</td><td></td></tr><tr><td>צינורות PCR 0.5 מ"ל (מכסה שטוח)</td> <td>VWR International</td><td>732-3207</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצץ פוספט (PBS)</td><td>Corning</td><td>45000-446</td><td></td></tr><tr><td>Phusion High-Fidelity PCR Master Mix עם HF Buffer</td><td>Thermo Scientific</td><td>F531L</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA ערכת בדיקת חלבון&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Sigma Aldrich</td><td>TR-1003-G</td><td></td></tr><tr><td>פוליאתילנימין, מסועף</td><td>Sigma Aldrich</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin dihydrochloride</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-108071A</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>SafeSeal Microcentrifuge Tube 1.5 מ"ל</td><td>Sarstedt</td><td>72,706</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי, 5 M תמיסת אקווה, ללא RNase</td><td>Alfa Aesar</td><td>J60434.AE</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט (SDS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3771</td><td></td></tr><tr><td>מסנן מזרק PES 33 מ"מ 0.2 &mu; M</td><td>Fisher Scientific</td><td>15206869</td><td></td></tr><tr><td>TC Dish 100, Standard</td><td>Sarstedt</td><td>8,33,902</td><td></td></tr><tr><td>TC Plate 6 Well, Standard, F</td><td>Sarstedt</td><td>83,39,20,005</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Roche</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9416-50ML</td><td></td></tr></tbody></table>

אסטרטגיית הפרעות crispr כפולות למיקוד אינטראקציות קטלניות סינתטיות בין rna לא מקודדים בתאים סרטניים

Dual CRISPR-Interference Strategy for Targeting Synthetic Lethal Interactions Between Non-Coding RNAs in Cancer Cells

קלטות הביטוי של SadCas9-KRAB-MeCP2 ו-SpdCas9-KRAB-MeCP2 שולבו בתאי 501-mel בו זמנית באמצעות התמרה עם כמויות שוות של לנטי-וירוסים. מכיוון שפרוטוקול CRISPRi זה מסתמך על ביטוי של גרסאות dCas9-KRAB-MeCP2, ניתוח כתמים מערביים הוא אידיאלי לאישור נוכחותם ברמת החלבון. לאחר העשרה של תאים שעברו טרנספטציה חיובית, נאספו דגימות לניתוח כתמים מערביים כדי לאשר את נוכחותם של האורתולוג dCas9-KRAB-MeCP2. לאחר התמרה מוצלחת, צפויה פס יחיד המתאים לחלבון ההיתוך SpdCas9-KRAB-MeCP2 (202 kDa) וחלבון ההיתוך SadCas9-KRAB-MeCP2 (170 kDa) ואושר, כפי שמוצג באיור 2A, תוך שימוש בנוגדנים ספציפיים לאורתולוגים של Cas9 המתאימים. עם זאת, אם הכתם המערבי אינו בר ביצוע, ניתן להשתמש ב-qPCR כדי לאמת את חלבוני ההיתוך ברמת ה-mRNA.
לאחר שנוצרו תאי 501-mel המבטאים ביציבות את המדכאים הפונקציונליים, בוצעה התמרה לנטי-ויראלית שנייה באמצעות וקטור gRNA כפול. RP11 ו-XLOC הוכחו בעבר כמווסתים בתרביות קצרות טווח של מלנומה גרורתית, ומיקוד CRISPRi בודד הוכיח את השפעתם על התפשטות והישרדות התאים28. לפיכך, בחרנו בזוג lncRNA זה להערכה כשילוב RNA סינתטי קטלני שאינו מקודד להוכחת רעיון, וצפינו פנוטיפ צמיחה מצטבר וניתן לצפייה בקלות בתאים שהשתנו.
כדי לחקור את ההשפעות של CRISPRi כפול בתאי סרטן באמצעות מבחני כדאיות, יש לדכא ביעילות את שני ה-lncRNA הממוקדים. qPCR היא השיטה המתאימה ביותר לאשר את ההדחקה הזו על ידי מדידת רמות התעתיק שלהם. הערכנו את הפונקציונליות של פרוטוקול ה-CRISPRi הכפול שפותח על ידי קביעת רמות RNA ובחינת כדאיות התא בעת התמקדות בצמד RP11 ו-XLOC שעלול להיות קטלני. לכן, gRNAs שונים המכוונים ל-RP11 ו-XLOC הוצגו כדי להפחית את רמות ה-RNA היעד. דיכוי ה-RNA נחקר באמצעות gRNAs ספציפיים למטרה עבור SadCas9-KRAB-MeCP2 או SpdCas9-KRAB-MeCP2, שנבדקו בנפרד ובשילוב לצד gRNA בקרה המכוון ל-Rosa26 (ראה איור 2B). למרות ש-gRNAs המכוונים ל-XLOC או RP11 דיכאו ביעילות את המטרות שלהם, הפלה בו-זמנית של XLOC ו-RP11 הושגה רק עם צמד XLOC-sa/RP11-sp.
מכיוון שרמות ה-RNA של XLOC ו-RP11 הופחתו בהצלחה בקו התאים של 501 מל עם זוג ה-gRNA שנבחר XLOC-sa/RP11-sp, בוצעה בדיקת כדאיות דיכוי lncRNA כפול (ראה איור 2C). לאחר 5 ימים, כדאיות התאים הייתה 81% ו-89% מקבוצת הביקורת של Rosa26 כאשר נעשה שימוש ב-gRNA המטרה בנפרד. שילוב RP11-sp ו-XLOC-sa הביא להפחתה משמעותית נוספת בהשוואה ל-RP11-sp בלבד, עם כדאיות התא ב-59% מביקורת Rosa26.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67752/67752fig02.jpg"> 
איור 2: הפונקציונליות של מערכת הדיכוי הכפולה lncRNA. (A) ניתוח כתמים מערביים בוצע כדי לזהות את גרסאות dCas9-KRAB-MeCP2 בתאי 501-mel שעברו שינוי באמצעות נוגדנים נגד Cas9. 501 תאי פרא (WT) ללא התמרה שימשו כביקורת (ראה איור משלים 3, איור משלים 4, איור משלים 5, איור משלים 6 עבור הכתם הגולמי). (B) ניתוח מבוסס qPCR של רמות RP11 ו-XLOC RNA ביחס לתאי בקרה Rosa26 לאחר התמרה של gRNA כפול לתאי 501-mel ששונו. GAPDH שימש כגן משק הבית. הנתונים מבוטאים כממוצע ± SD. (C) בדיקת כדאיות הדיכוי הכפול של lncRNA בוצעה לאחר שילוב gRNAs כפולים בתאי 501-mel ששונו בשלוש התמרות עצמאיות. ערכי הזוהר נורמלו לבקרת Rosa26. תוצאות הכדאיות מבוטאות כממוצע (n = 3) ± SEM. בוצעה בדיקת t לא מזווגת. כוכבית (*) מציינת הבדל משמעותי ב-p &lt;-0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/67752fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
איור משלים 1: מפת פלסמיד. המפה נוצרה באמצעות Benchling (https://benchling.com/). הפלסמידים המשמשים בפרוטוקול שונו מ-Addgene #96921 ו-#110824. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Figure%201.tif" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
תרשים משלים 2: תרשים משלים 2: ניתוח כתמים מערביים של dCas9-KRAB. (A) ביטוי SadCas9-KRAB בתאי 501-mel 6 ימים לאחר הטרנספקציה. (B) התמרה רציפה של SadCas9-KRAB ו-SpdCas9-KRAB בתאי 501-mel הובילה לביטוי מופחת של SadCas9-KRAB 3 שבועות לאחר הטרנספקציה. (C) התמרה סימולטנית של SadCas9-KRAB ו-SpdCas9-KRAB בתאי 501-mel הביאה לביטוי מופחת של SadCas9-KRAB 3 שבועות לאחר הטרנספקציה. (D) ניתן היה לצפות בביטוי SpdCas9-KRAB לאחר התמרה בו-זמנית של SadCas9-KRAB ו-SpdCas9-KRAB. LV. נפח ה-lentiviruses המשמשים ב-μL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Figure%202.tif" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
איור משלים 3: נתונים גולמיים של כתם מערבי SaCas9-KRAB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Figure%203_SaCas9-KRAB%20raw%20data.tif" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
איור משלים 4: נתונים גולמיים של כתם מערבי SpCas9-KRAKB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Figure%204_SpCas9-KRAB%20raw%20data.tif" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
איור משלים 5: נתונים גולמיים של GAPDH_SpCas9-KRAKB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Figure%205_GAPDH_SpCas9-KRAB%20raw%20data.tif" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
איור משלים 6: נתונים גולמיים של GAPDH_SaCas9-KRAKB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Figure%206_GAPDH_SaCas9-KRAB%20raw%20data.tif" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
טבלה משלימה 1: רצפי RNA מנחים משומשים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Table%201_RE.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
טבלה משלימה 2: רצפי DNA משומשים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Table%202_RE.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 1: קובץ FASTA של dual-grna-zeo-gfp. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Data%201_dual-grna-zeo-gfp.fasta" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 2: קובץ FASTA של dSpCas9-krab-mecp2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Data%202_dSpCas9-krab-mecp2.fasta" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 3: קובץ FASTA של dSaCas9-krab-mecp2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67752/Supplementary%20Data%203_dSaCas9-krab-mecp2.fasta" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>

אסטרטגיית הפרעות CRISPR כפולות למיקוד אינטראקציות קטלניות סינתטיות בין RNA לא מקודדים בתאים סרטניים

Long non-coding RNAs (lncRNAs) represent a vast and functionally diverse class of RNA molecules, with over 100,000 predicted in the human genome. Although ...

dual-crispr-interference-strategy-for-targeting-synthetic-lethal

Research

JoVE Journal

Genetics

גנטיקה

CRISPR/Cas9 היא מערכת חזקה ליצירת שיבוש של גנים ואלמנטים גנטיים. כאן אנו מתארים פרוטוקול ליצירה יעילה של מחיקות גנומיות בשורות תאים של יונקים באמצעות CRISPR/Cas9.

דור של מחיקות הגנומי בשורות תאים יונקים באמצעות CRISPR / Cas9

מערכת CRISPR / Cas9 מציעה את הפוטנציאל להפוך הגנום ממוקד עריכה נגישה ובמחיר סביר לקהילה המדעית. פרוטוקול זה נועד להדגים כיצד ליצור וירוסים אשר מפסיד יוצאים גן של עניין באמצעות מערכת CRISPR / Cas9, ואז מזריקים אותם stereotaxically לתוך מוח העכבר הבוגר.

תכנון, אריזה, משלוח של רטרו CRISPR כייל גבוה ו Lentiviruses באמצעות Stereotaxic הזרקת

ההתקדמות האחרונות ביכולת לתמרן גנטית קווי תאים סומטיים להחזיק פוטנציאל גדול עבור מחקר בסיסי ויישומי. כאן, אנו מציגים שתי גישות עבור CRISPR / Cas9 שנוצר נוקאאוט הייצור והקרנה שורות תאים יונקים, עם וללא שימוש סמנים לבחירה.

הבחירה תלויה עצמאית הדור של CRISPR / Cas9 בתיווך גין Knockouts בתאי יונקים

פרוטוקול זה מתווה את זרימת העבודה של הגן מבוססת על CRISPR/Cas9 עריכת המערכת עבור התיקון של מוטציות נקודה בתרבית של תאים. כאן, אנו משתמשים בגישה קומבינטורית לעריכת ג'ין עם נתונים היסטוריים אסטרטגיה ניסיוני המשכית למדידת ויאסין היווצרות באתר היעד — בעיקרו של דבר, ניתוח מוטגנזה מכוונת באתר.

מתודולוגיה סטנדרטי כדי לבדוק באתר המוטגניות כפונקציה של תיקון נקודת מוטציה על ידי CRISPR/Cas9 ו- SsODN בתאי אדם

מסירה ישירה של טרום התאספו Cas9/מדריך RNA ribonuאופאנפרוטאין מתחמי הוא אמצעי מהיר ויעיל לעריכת הגנום בתאי המטפאות. כאן, אנו מנצלים את הגישה הזאת כדי למחוק משתיק RUNX1 ביטרוניק ולבחון את התגובות הטרנדיות בתאי OCI-AML3 לוקמיה.

חקירת התפקיד הטרנססאני של משתיק הRUNX1 נית על ידי CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein בתאי לוקמיה מיאלואיד חריפה

מסכים גנטיים גדולים באורגניזמים מודל הובילו לזיהוי של אינטראקציות גנטיות שליליות. כאן, אנו מתארים זרימת עבודה של אינטגרציית נתונים באמצעות נתונים ממסכים גנטיים באורגניזמים לדוגמה כדי לתאר שילובי תרופות המכוונים לאינטראקציות קטלניות סינתטיות בסרטן.

זרימת עבודה של שילוב נתונים לזיהוי שילובי תרופות המכוונים לאינטראקציות קטלניות סינתטיות

פרוטוקול זה מתאר זרימת עבודה של עריכת גנים של גנים חוזרים פלינדרומיים קצרים (CRISPR) בתפוקה גבוהה, המקובצים באופן קבוע, עבור ניתוח רשת של אשכולות מיקרו-רנ"א, המאפשרת ייצור מהיר של פאנל של קווי תאים מהונדסים גנטית הנושאים שילובי מחיקה ייחודיים של חברי אשכול miRNA בגודל של עד 35 קילו-בתים בתוך ניסוי יחיד.

כלי עריכת גנים CRISPR לניתוח רשת אשכולות מיקרו-רנ"א

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבחירה חוץ גופית של מדכאי שעתוק מהונדסים (ETR) עם יעילות השתקה גבוהה, ארוכת טווח, יציבה, על המטרה ופעילות נמוכה מחוץ למטרה. תהליך עבודה זה מאפשר לצמצם רפרטואר ראשוני ומורכב של תעודות סל מועמדות לרשימה קצרה, המתאימה להערכה נוספת במסגרות רלוונטיות מבחינה טיפולית.

במבחנה בחירת מדכאי שעתוק מהונדסים להשתקה אפיגנטית ממוקדת

מחסום משמעותי לטכנולוגיות כמו CRISPR הוא אירועים מחוץ למטרה שיכולים לשבש גנים חיוניים. 'סירקולריזציה לדיווח במבחנה על השפעות מחשוף על ידי ריצוף' (CIRCLE-seq) היא טכניקה שנועדה לזהות אתרי מחשוף לא מכוונים. שיטה זו ממפה את הפעילות הכלל-גנומית של CRISPR-Cas9 ברגישות גבוהה וללא משוא פנים.

CIRCLE-Seq לחקירת עריכת גנים מחוץ למטרה

קו התאים THP-1 נמצא בשימוש נרחב כמודל לחקירת התפקודים של מונוציטים/מקרופאגים אנושיים בתחומי מחקר שונים הקשורים לביולוגיה. מאמר זה מתאר פרוטוקול עבור הנדסה יעילה מבוססת CRISPR-Cas9 ובידוד שיבוטים של תא יחיד, המאפשר ייצור של נתונים פנוטיפיים חסונים וניתנים לשחזור.

נוקאאוט גנים בתיווך CRISPR-Cas9 מבוסס אלקטרופורציה בתאי THP-1 ובידוד שיבוט של תא בודד

ניתנת גישה קפדנית ומובנית לבחירת גנים עמידים ורגישים לקרינה באמצעות יישום שיטת סקר CRISPR/Cas9 כלל-גנומית. לפרוטוקול זה יש גם פוטנציאל לשמש מסגרת רב-תכליתית למאמצי מחקר אחרים החוקרים את מנגנוני העמידות לתרופות כימיות הניתנות קלינית.

מסך CRISPR רחב גנום לחשיפת גנים רגישים לקרינה ועמידים לרדיו

למד אסטרטגיית CRISPRi כפולה לזיהוי אינטראקציות קטלניות סינתטיות בין RNA ארוך לא מקודד בתאי מלנומה. שיטה זו מאפשרת הכפלה משולבת של גנים ומסייעת בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות בסרטן.

אסטרטגיית הפרעות CRISPR כפולות למיקוד אינטראקציות קטלניות סינתטיות בין RNA לא מקודדים בתאים סרטניים

גלה סרטונים נוספים