Name: הקפאה ישירה של ראשי דרוזופילה לצביעה פלואורסצנטית משופרת של המוח וצביעה חיסונית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: חקור פרוטוקול מופשט לעיבוד רקמת מוח בדרוזופילה הכולל כריתת ראשים, קיבוע, הקפאה וצביעה פלואורסצנטית. השיטה מאפשרת ניתוח תמונות כמותי ללא צורך במיקרוסקופיה קונפוקלית יקרה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Fabbri-Destro, M., Rizzolatti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirror+neurons+and+mirror+systems+in+monkeys+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Mirror neurons and mirror systems in monkeys and humans.</a> Physiology. 23, 171-179 (2008).</li>
<li>Faust, T. E., Gunner, G., Schafer, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+governing+activity-dependent+synaptic+pruning+in+the+developing+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms governing activity-dependent synaptic pruning in the developing mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 22, 657-673 (2021).</li>
<li>Roozendaal, B., McEwen, B. S., Chattarji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress%2C+memory+and+the+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress, memory and the amygdala.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 423-433 (2009).</li>
<li>Arber, S., Costa, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Networking+brainstem+and+basal+ganglia+circuits+for+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Networking brainstem and basal ganglia circuits for movement.</a> Nat Rev Neurosci. 23, 342-360 (2022).</li>
<li>GBD 2019 Dementia Forecasting Collaborators. Estimation of the global prevalence of dementia in 2019 and forecasted prevalence in 2050: an analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Lancet+Public+Health%22">Lancet Public Health</a>. 7, e105-e125 (2022).</li>
<li>Huang, Y., Li, Y., Pan, H., Han, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+neurological+disorders+in+204+countries+and+territories+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of neurological disorders in 204 countries and territories worldwide.</a> J Glob Health. 13, 04160(2023).</li>
<li>Crick, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+dogma+of+molecular+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Central dogma of molecular biology.</a> Nature. 227, 561-563 (1970).</li>
<li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9, 235-244 (2016).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+Fly%3A+A+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the Fly: A primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201, 815-842 (2015).</li>
<li>Larkin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FlyBase%3A+updates+to+the+Drosophila+melanogaster+knowledge+base%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">FlyBase: updates to the Drosophila melanogaster knowledge base.</a> Nucleic Acids Res. 49, D899-D907 (2021).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> Int J Mol Sci. 10, 407-440 (2009).</li>
<li>Winding, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connectome+of+an+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The connectome of an insect brain.</a> Science. 379, eadd9330(2023).</li>
<li>Bargiello, T. A., Jackson, F. R., Young, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+circadian+behavioural+rhythms+by+gene+transfer+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Restoration of circadian behavioural rhythms by gene transfer in Drosophila.</a> Nature. 312, 752-754 (1984).</li>
<li>Zehring, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-element+transformation+with+period+locus+DNA+restores+rhythmicity+to+mutant%2C+arrhythmic+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">P-element transformation with period locus DNA restores rhythmicity to mutant, arrhythmic Drosophila melanogaster.</a> Cell. 39, 369-376 (1984).</li>
<li>Huang, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discoveries+of+molecular+mechanisms+for+the+circadian+rhythm%3A+The+2017+Nobel+Prize+in+Physiology+or+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+J%22%5BJournal%5D)">The discoveries of molecular mechanisms for the circadian rhythm: The 2017 Nobel Prize in Physiology or Medicine.</a> Biomed J. 41, 5-8 (2018).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4, 429-434 (2012).</li>
<li>Ong, S. E., Foster, L. J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric-based+approaches+in+quantitative+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric-based approaches in quantitative proteomics.</a> Methods. 29, 124-130 (2003).</li>
<li>Behnke, J. A., Ye, C., Moberg, K. H., Zheng, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+detect+neurodegeneration+in+Drosophila+melanogaster+whole-brain+mounts+using+advanced+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to detect neurodegeneration in Drosophila melanogaster whole-brain mounts using advanced microscopy.</a> STAR Protoc. 2, 100689(2021).</li>
<li>Moraes, R. C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E+induces+lipid+accumulation+through+Dgat2+that+is+prevented+with+time-restricted+feeding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E induces lipid accumulation through Dgat2 that is prevented with time-restricted feeding in Drosophila.</a> Genes. 15 (11), 1376(2024).</li>
<li>Roth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reduces+neuronal+mutant+huntingtin+aggregation+and+ameliorates+locomotor+performance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reduces neuronal mutant huntingtin aggregation and ameliorates locomotor performance in Drosophila.</a> Front Aging Neurosci. 15, 1223911(2023).</li>
<li>Currier, T. A., Pang, M. M., Clandinin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+processing+in+the+fly%2C+from+photoreceptors+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Visual processing in the fly, from photoreceptors to behavior.</a> Genetics. 224, (2023).</li>
<li>McKellar, C. E., Siwanowicz, I., Dickson, B. J., Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+motor+neurons+of+every+muscle+for+fly+proboscis+reaching%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Controlling motor neurons of every muscle for fly proboscis reaching.</a> Elife. 9, (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 uL פיפטה</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 uL קצות פיפטה</td><td>אולימפוס פלסטיק</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X פוספט חוצץ מלח (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 הוכחה אתנול</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>AF750 עז נגד עכבר נוגדן משני</td><td>Alexa Fluor</td><td>A21037</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית נגד גלגול</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>ApoE עכבר נוגדן ראשוני</td><td>סנטה קרוז</td><td>SC13521</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>פישר</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>פישר</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות טעונות</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>תבניות חיתוך הקפאה</td><td>פישר</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>להבי קריוסטט</td><td>C.L. תרנגול הודו</td><td>DT554N50</td><td></td></tr> קרח יבש <tr><td>במים</td><td></td><td></td><td></td>מזוקקים</tr><tr><td></td><td>???</td><td>???</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>התקשות מדיית הרכבה עם Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>נילוס אדום&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N3013</td><td></td></tr><tr><td>תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית</td><td>פישר</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>שייקר אורביטלי</td><td>OHAUS</td><td>SHLD0415DG</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 20%</td> <td>מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>סכיני גילוח</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>מספריים אביביים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>פישר</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

הקפאה ישירה של ראשי דרוזופילה לצביעה פלואורסצנטית משופרת של המוח וצביעה חיסונית

Direct Cryosectioning of Drosophila Heads for Enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining

השיטה שתוארה לעיל מאפשרת הדמיה פלואורסצנטית של מוחות זבובים בוגרים באופן אמין וללא דיסקציה מייגעת. באיור 1, השיטה פשוטה וניתנת לביצוע במהירות אם כל הדגימות, הציוד והחומרים זמינים. לחלופין, באמצעות אחסון של -80 מעלות צלזיוס בשלב תבנית ה-OCT, ניתן לשמור דגימות לשימוש שבועות רבים לאחר מכן. אין צורך להכשיר חוקרים זמן רב כדי ללמוד את טכניקות הניתוח וההטמעה הפשוטות, מה שהופך את השיטה הזו לנגישה למדי.
דוגמ...

Immunostaining Drosophila melanogaster brains is essential for exploring the mechanisms behind complex behaviors, neural circuits, and protein expression ...

direct-cryosectioning-drosophila-heads-for-enhanced-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים את הצביעה האימונופלואורסצנטית של מוח דרוזופילה טרנסגני להדמיה חד-תאית של תאי גליה. המוח מבטא חלבונים ממוקדי ממברנה המאוחים עם שילובים שונים של אפיטופים אנטיגניים תחת שליטת מערכת רקומבינאז ספציפית לגליה. המוחות המבודדים והקבועים מוכתמים בנוגדנים ראשוניים ספציפיים לאפיטופים האנטיגניים, ואחריהם נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור. תיוג זה מאפשר הדמיה בו-זמנית של תת-אוכלוסיות שונות של תאי גליה על פני אזורי מוח שונים.

צביעה אימונופלואורסצנטית של מוחות דרוזופילה להדמיה חד-תאית של תאי גליה

צביעה חיסונית היא טכניקה יעילה להמחשת סוגי תאים וחלבונים ספציפיים בתוך רקמות. על ידי שימוש בסוניקציה, הפרוטוקול המתואר כאן מקל על הצורך לנתח רקמות Drosophila melanogaster מעוברים וזחלים בשלב מאוחר לפני צביעה חיסונית. אנו מספקים מתודולוגיה יעילה לצביעה חיסונית של זחלי הר שלמים קבועים בפורמלדהיד.

הקל Sonication Immunofluorescence הכתמה של שלב מאוחר עוברי וזחל<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות<em&gt; באתר</em

המוח תסיסנית הבוגרת הוא מערכת יקרה ללימוד מעגלים עצביים, תפקוד מוח גבוה, והפרעות מורכבות. שיטה יעילה כדי לנתח רקמות מוח כולו מראש הזבוב הקטן תקל מחקרים מבוססי מוח. כאן אנו מתארים פשוט, פרוטוקול לנתיחת צעד אחד של מוחות בוגרים עם מורפולוגיה השתמרה היטב.

צעד-אחד פשוט פרוטוקול לנתיחה עבור כל הר הכנה למבוגרים<em&gt; תסיסנית</em&gt; Brains

פרוטוקול זה מתאר את הקרע של immunostaining של המבוגרים דרוזופילה melanogaster רקמות המוח. באופן ספציפי, פרוטוקול זה מדגיש את השימוש נוירונים הגוף, קולט אור פטריות דרוזופילה בתור דוגמה עצביים קבוצות משנה יכול לשמש באופן מדויק לחשוף את עקרונות כלליים שבבסיס היבטים רבים של ההתפתחות העצבית.

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

התאים להציג מורפולוגיות שונות, ליצור מגוון רחב של אינטראקציות עם שכניהם. פרוטוקול זה מתאר איך לחשוף את המורפולוגיה של תאים בודדים כדי לחקור את תא-תא אינטראקציה באמצעות מערכת ביטוי Gal4/UAS ומבוססת.

יישום טכניקת FlpOut ססגוניות ללמוד ברזולוציה גבוהה תא בודד מורפולוגיות ו תא אינטראקציות של עכשיו, דונלד ב דרוזופילה

פיתחנו זרימת עבודה פשוטה וישימה לחלץ נתונים כמותיים במחקרים ביולוגיים תא המבוססות על ידי קרינה פלואורסצנטית-הדמיה של צבירת חלבון, שטף autophagic במערכת העצבים המרכזית דגמי דרוזופילה הקשורים ניוון מוחיים.

ביולוגיה של התא כמותית של הקשורים ניוון מוחיים ב דרוזופילה דרך ניתוח לא משוחדת של חלבונים מתויגות Fluorescently באמצעות ImageJ

מאמר זה מציג שיטה כירורגית ניקוד דרוזופילה הרשתיות הגולמי יחד עם פרוטוקולים עיבוד רקמה אימונוהיסטוכימיה, ניתוח המערבי של RNA-חילוץ.

דיסקציה של הרשתית הגולמי דרוזופילה אימונוהיסטוכימיה, ניתוח המערבי של RNA בידוד

Expand-Assisted Fluorative Fluorescence In Situ Hybridization (EASI-FISH) היא טכניקה חזקה המשלבת מיקרוסקופ הרחבה עם הכלאה פלואורסצנטית באתרה (FISH) כדי לזהות ביטוי של גנים מרובים ברקמה עבה. פרוטוקול זה מתאר את ההתקדמות האחרונה בשיטה ואת התאמתה לתיוג מערכת העצבים המרכזית של דרוזופילה השלמה.

זיהוי מולטיפלקס של ביטוי גנים במוח הדרוזופילה השלם באמצעות פלואורסצנציה איטרטיבית בסיוע הרחבה בהכלאה באתרה

פרוטוקול חתך הלב וההדמיה הקרינה של דרוזופילה מפשט את חקר מבנה הלב והפתולוגיות. גישה זו כוללת חתך, צביעה והדמיה פשוטים, תוך עקיפת המומחיות הטכנית הדרושה לנתיחה מסורתית. זה משפר את הנגישות, מה שהופך את הדרוזופילה למודל שמיש יותר למחקר הקשור ללב בקרב הקהילה המדעית הרחבה יותר.

שיטה חדשנית ויעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה

פעמיים פלואורסצנטי באתרו הכלאה בסעיפים המוח טריים

חקור פרוטוקול מופשט לעיבוד רקמת מוח בדרוזופילה הכולל כריתת ראשים, קיבוע, הקפאה וצביעה פלואורסצנטית. השיטה מאפשרת ניתוח תמונות כמותי ללא צורך במיקרוסקופיה קונפוקלית יקרה.

הקפאה ישירה של ראשי דרוזופילה לצביעה פלואורסצנטית משופרת של המוח וצביעה חיסונית

גלה סרטונים נוספים