Name: התאמה עדינה של אוריינטציה של Caenorhabditis elegans על רפידות אגר מתועלות להדמיה של התחדשות עצבית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: למדו ליצור תבניות PDMS לייצור רפידות אגר מחורצות להתאמת כיוון Caenorhabditis elegans. שיטה זו משפרת את איכות הדימוי של מבנים עצביים במחקר התחדשות עצבית ומאפשרת ניתוח מדויק של מנגנוני התחדשות נוירונליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>ייצור רפידות אגר מתועלות באמצעות תבניות PDMS לשליטה בהתמצאות בעלי חיים

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
<li>Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+killing+of+cells+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser killing of cells in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 48, 225-250 (1995).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-regulating+feed-forward+circuit+controlling+C-elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A self-regulating feed-forward circuit controlling C-elegans egg-laying behavior.</a> Curr Biol. 18 (19), 1445-1455 (2008).</li>
<li>Chung, S. H., Mazur, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femtosecond+laser+ablation+of+neurons+in+C.+elegans+for+behavioral+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+A-Mater+Sci+Process%22%5BJournal%5D)">Femtosecond laser ablation of neurons in C. elegans for behavioral studies.</a> Appl Phys A-Mater Sci Process. 96 (2), 335-341 (2009).</li>
<li>Zellag, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CentTracker%3A+a+trainable%2C+machine-learning-based+tool+for+large-scale+analyses+of+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cell+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">CentTracker: a trainable, machine-learning-based tool for large-scale analyses of Caenorhabditis elegans germline stem cell mitosis.</a> Mol Biol Cell. 32 (9), 915-930 (2021).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neuron+in+C.+elegans+orchestrates+multiple+motor+outputs+through+parallel+modes+of+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A single neuron in C. elegans orchestrates multiple motor outputs through parallel modes of transmission.</a> Curr Biol. 33 (20), 4430-4445.e6 (2023).</li>
<li>Rasmussen, N. R., Dickinson, D. J., Reiner, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ras-dependent+cell+fate+decisions+are+reinforced+by+the+RAP-1+small+GTPase+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Ras-dependent cell fate decisions are reinforced by the RAP-1 small GTPase in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 210 (4), 1339-1354 (2018).</li>
<li>Rivera Gomez, K., Schvarzstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+nematodes+for+live+imaging+using+an+agarose+pad+produced+with+a+vinyl+record%5BTitle%5D)+AND+%22MicroPubl+Biol%22%5BJournal%5D)">Immobilization of nematodes for live imaging using an agarose pad produced with a vinyl record.</a> MicroPubl Biol. 2018, (2018).</li>
<li>Chung, S. H., Clark, D. A., Gabel, C. V., Mazur, E., Samuel, A. D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+AFD+neuron+in+C.+elegans+thermotaxis+analyzed+using+femtosecond+laser+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of the AFD neuron in C. elegans thermotaxis analyzed using femtosecond laser ablation.</a> BMC Neuroscience. 7 (1), 30(2006).</li>
<li>Gerhold Abigail, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+regulation+of+stem+and+progenitor+cell+mitotic+progression+by+in+situ+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating the regulation of stem and progenitor cell mitotic progression by in situ imaging.</a> Curr Biol. 25 (9), 1123-1134 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>בקבוק ארלנמאייר 125 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>4980-125</td><td></td></tr><tr><td>33 1/2 סל"ד או 12 אינץ' תקליט ויניל (LP) נגינה ארוכה&nbsp;</td><td>לא ישים</td><td></td><td>עומק ערוץ בודד: 50 ומיקרו; מ ', רוחב: 200 ומיקרו; מזרק</td></tr><tr><td>פלסטיק m 30 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50-793-817</td><td></td></tr><tr><td>90% פלטינה, 10% חוט אירידיום</td><td>Tritech Research&nbsp;</td><td>PT-9010</td><td>המשמש ליצירת</td></tr><tr><td>רדיד אלומיניום פיק פלטינה&nbsp;</td><td>אמזון</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלוריד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>AAL131910B</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית</td><td>זכוכית N/A</td><td>N/A</td><td>7 אינץ' x 5 בזכוכית נלקחה ממסגרת&nbsp;</td></tr><tr><td>פיפטה מזכוכית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-678-20A</td><td>המשמשת ליצירת</td></tr><tr><td>פלטה חמה לפיק פלטינה&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>SP88857104</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום גופרתי</td><td>פישר AA3333736</td><td></td><td></td>מדעי</tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ&nbsp;</td><td>Mckesson</td><td>938360</td><td></td></tr><tr><td>אגר בדרגת ביולוגיה מולקולרית &nbsp;</td><td>Benchmark Scientific</td><td>A1705</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>P290-500</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונובסיסי&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אזיד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>AAJ2161022</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית כיסוי מרובע</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541-016</td><td></td></tr><tr><td>SYLCAP 284-F (ריפוי מהיר) ערכת מעטפת אלסטומר סיליקון, שקופה, שקופה אופטית, תערובת 10:1, 500 גרם/מ"ל (0.5 ק"ג), מהירה יותר מ-Sylgard 184 ודומה&nbsp;</td><td>מייבש ואקום MicroLubrol</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-648-100</td><td></td></tr><tr><td>צלחת שקילה&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>01-549-750</td><td></td></tr></tbody></table>

התאמה עדינה של אוריינטציה של caenorhabditis elegans על רפידות אגר מתועלות להדמיה של התחדשות עצבית

Fine Adjustment of Caenorhabditis elegans Orientation on Channeled Agar Pads for Imaging Neuroregeneration

ייצור תבנית PDMS רכיבה על לחץ הוואקום במהלך ייצור התבנית מנקבת ומסירה בועות אוויר מה-PDMS הלא נרפאים, מה שמבטיח עובש נטול בועות. כפי שמוצג באיור 3D , בועות עולות אל פני השטח ומנקבות. תבניות נטולות בועות יכולות לייצר תעלות נקיות.
התמצקות תבנית PDMS בעת הנחת זגוגית הזכוכית על תקליט הוויניל, הימנע מיצירת פערי אוויר. פערים אלה עלולים להוביל לעובי לא אחיד או לפגמים במשטח. בועות, אם קיימות, ניתנות לזיהוי חזותי. לחיצה על זגוגית הזכוכית מצד אחד לצד השני מעבירה אוויר, ממזערת את היווצרות הבועות ומבטיחה עובי תבנית אחיד המוצג באיור 4A.
שימוש ברפידות אגר מתועלות להתמצאות עדינה של C. elegans רפידות האגר המתועלות מאפשרות התמצאות מדויקת של C. elegans. אנו מגדירים את הכיוון של החיה על ידי גלגול קל של החיה עם קיסם פלטינה, תוך אימות הכיוון באמצעות ציוני דרך כמו למשל הפות או המעי בצורת S (איור 5A,C). אנו מאשרים את הכיוון תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי לפני העברת חיות למיקרוסקופ הפוך שמוצג באיור 5B,D.
הערכת התחדשות של סיבי נוירונים עם רפידות אגר מתועלות רפידות אגר מתועלות משפרות את איכות ההדמיה של התחדשות עצבית על ידי כיוון אופטימלי של החיה. מיקום סיבי נוירונים מחודשים קרוב יותר לעדשת המטרה מפחית את פיזור האור וספיגתו, ומשפר את בהירות התמונה. איור 5E,F מראה כי הצבת אתר ההתחדשות קרוב יותר למטרה משפרת את איכות ההדמיה, ומאפשרת ניתוח מדויק יותר של צמיחה מחודשת של עצבים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig01.jpg"> 
איור 1: Caenorhabditis elegans על רפידות שטוחות ומתועלות. (A) בעל חיים על משטח אגר שטוח בכיוון DV; הפות פונה לכיסוי. (B) החדרת הכיסוי דוחפת את הפות הצידה, ומאלצת את החיה לכיוון רוחבי. (C) בעל חיים על כרית אגר מתועלת בכיוון DV. (D) בעל חיים נשאר בכיוון DV לאחר הכנסת הכיסוי. (E) תמונת שדה בהיר של מוטנט רולר על כרית אגר מתועלת בכיוון DV. (F) תמונת שדה בהיר עם כריכה, אותה חיה כמו E נשארת בכיוון DV. קיצורים: DV = גבי-גחון; lat = לרוחב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig02.jpg"> 
איור 2: חומרים וציוד עבור ייצור PDMS. (A) ערכת אלסטומר סיליקון SYLCAP 284-F. (ב) קנה מידה. (ג) מזרק פלסטיק. (ד) מייבש ואקום. (ה) פלטה חשמלית. (F) תקליט ויניל ארוך בגודל 12 אינץ', מתפרק לפי הצורך. (ז) זגוגית זכוכית. קיצור: PDMS = פולידימתילסילוקסן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig03.jpg"> 
איור 3: ערבוב ושאיבת PDMS לא נרפאים. (א) מערבבים את הבסיס וחומר הריפוי במגש. (ב) הנח את המגש בתא ואקום. (ג) מחזור ואקום שלוש פעמים כדי לאפשר לבועות לעלות על פני השטח. (D) אחרי שעה אחת, רוב הבועות התפוצצו. שים לב לשידור משופר באמצעות PDMS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig04.jpg"> 
איור 4: הצגת חלונית זכוכית ל-PDMS לא-מרפא ללא בועות. (א) הכנסת זכוכית על תקליט ויניל ללא בועות. (ב) תבנית PDMS מוצקה שהוסרה מהרשומה, עם ערוצי פירוט משובצים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig05.jpg"> 
איור 5: תמונות שדה בהירות ופלואורסצנטיות של C. elegans המותקנות על אגר מתועל. (A) תמונת שדה בהיר של חיה בכיוון DV דו-צדדי. ציון דרך אנטומי לכיוון DV: מעי ספירלי בצורת S (רקמה כהה יותר מסומנת על ידי חץ) חוצה את קו האמצע ~60% מהמרחק מהאף לזנב. (B) תמונה פלואורסצנטית של תאי עצב בכיוון DV, אותה חיה כמו A. (C) תמונת שדה בהיר של חיה בכיוון רוחב. נקודת ציון אנטומית לכיוון הרוחב: הצד הפונה לפות. (D) תמונה פלואורסצנטית של תאי עצב בכיוון לאט, אותה חיה כמו C. (E) התמצאות עם התחדשות (חץ) בצד העמוק (הרחוק) של החיה. (F) אוריינטציה עם התחדשות בבעל חיים רדוד יותר קרוב יותר למטרה; התחדשות ברורה יותר (חץ). פסי קנה מידה = 20 מיקרומטר. קיצורים: DV = גבי-גחון; lat = לרוחב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

התאמה עדינה של אוריינטציה של Caenorhabditis elegans על רפידות אגר מתועלות להדמיה של התחדשות עצבית

Caenorhabditis elegans is a model organism widely used for studying biological processes. Its transparency and small size make it ideal for imaging ...

fine-adjustment-caenorhabditis-elegans-orientation-on-channeled-agar

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

במהלך הדמיה חיה של C. elegans, ניתן להשתמש בפד אגרוז כדי להחזיק את הנמטודה ללא תזוזה מבלי לפגוע בה או לייבש אותה. סרטון וידאו זה מתאר כיצד להכין משטח הרכבה פשוט למיקרוסקופיה.

הכנת מגלשת נמטודה: שיטה להרכיב בעלי חיים על משטח אגר

מקור: Doser, R., et al. הדמיה תת-תאית של טיפול בסידן עצבי in vivo. J. Vis. Exp. (2023)סרטון זה מדגים הדמיה in vivo של שטף סידן תת-תאי בנוירונים של חוט העצב הגחוני של זני Caenorhabditis elegans טרנסגניים. נעשה שימוש בשני מדדי סידן נפרדים: אינדיקטור ציטופלזמי בזן אחד ואינדיקטור מיטוכונדריאלי באחר. נוירונים נצפים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לנטר שינויים בזמן אמת בעוצמת הקרינה בתוך הציטופלזמה העצבית והמיטוכונדריה, המשקפים שטף סידן במהלך פעילות עצבית ספונטנית.

הדמיית דינמיקת סידן תת-תאית בתאי עצב של Caenorhabditis elegans

עם גוף מערך עצביה הקטנים שקוף, מתועד היטב ומגוון הרחב של טכניקות גנטיות מתאימים...

בהדמיה עצבית סיד vivo ב C. elegans

אנו מתארים שיטות ללמוד היבטים של amylopathies...

<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; מערכת מודל לחקר Amylopathy

פרוטוקול זה מתאר כיצד תמונת חלוקת תאים בתוך רקמה בעוברי elegans Caenorhabditis. בעוד כמה פרוטוקולים מתארים כיצד חלוקת תאי תמונה בעובר המוקדם, פרוטוקול זה מתאר כיצד תמונת חלוקת תאים בתוך רקמה מתפתחת במהלך embryogenesis אמצע סוף.

חזותי neuroblast cytokinesis במהלך<em&gt; ג elegans</em&gt; עובר

Caenorhabditis elegans (C. elegans) הוא מודל טוב ללמוד תחבורה עצב, תאיים. . הנה, אני מתארת פרוטוקול ויוו הקלטה וניתוח התחבורה עצב, intraflagellar C. elegans.

קיבעון של Caenorhabditis elegans לנתח להובלה תאיים בנוירונים

מחקר זה מתאר את המידות הכמותיות של גודל ולוקליזציה, מורפולוגיה שרירים וצורה מיטוכונדרילית ב -C. אלגיה באמצעות כלים זמינים לעיבוד תמונות באופן חופשי. גישה זו מאפשרת לימודים עתידיים ב -C. אלגיה להשוות בין היקף רקמות ושינויים מבניים כתוצאה מוטציות גנטיות.

גישות כמותיים ללימוד מבנים סלולאריים ומורפולוגיה ארגונית בקנבאבדיוטיס

פרוטוקול להדמיית המיקרוטובולות הדינמיות ב-vivo באמצעות חלבון מחייב קצה עם תווית פלואורסצנטית הוצג. תיארנו את השיטות לתיוג, תמונה וניתוח המיקרוטובולות הדינמיות בתאי העצב של מיקרוטובול לרוחב אחורי (PLM) של C. elegans.

In vivo הערכה של מיקרוטובולה דינמיקה והתמצאות ב Caenorhabditis elegans נוירונים

השיטות הנוכחיות מתארות גישה לא רציומטרית להדמיית סידן ברזולוציה גבוהה, תת-מדורית in vivo ב- Caenorhabditis elegans באמצעות מדדי סידן מקודדים גנטית זמינים.

הדמיה תת-תאית של טיפול בסידן עצבי ב-Vivo

המאמר מתאר אופטימיזציה של פרמטרים לרכישת מיקרוסקופיה פלואורסצנטית כדי להמחיש את ההובלה האקסונלית של מטענים מסומנים אנדוגניים ברזולוציה של נוירון יחיד בנמטודה חיה.

אופטימיזציה של ויזואליזציה של הובלה אקסונלית של מטען אנדוגני על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי ב Caenorhabditis elegans חי

למדו ליצור תבניות PDMS לייצור רפידות אגר מחורצות להתאמת כיוון Caenorhabditis elegans. שיטה זו משפרת את איכות הדימוי של מבנים עצביים במחקר התחדשות עצבית ומאפשרת ניתוח מדויק של מנגנוני התחדשות נוירונליים.

התאמה עדינה של אוריינטציה של Caenorhabditis elegans על רפידות אגר מתועלות להדמיה של התחדשות עצבית

גלה סרטונים נוספים