פרוטוקול הזרקת עצב תועה ישיר לחולדות

אנו עורכים מחקרים פרה-קליניים בטיפול בתחליפי גנים. אנו משתמשים בחיות מעבדה כדי לבסס את השיטה האופטימלית למתן תרופות כדי לטפל בבעיות של מערכת העצבים האוטונומית וההיקפית. טיפול בהחלפת גנים מבוסס וקטור הוא אחת הטכנולוגיות המתפתחות בריפוי גנטי. היישום של וקטור ויראלי הקשור לאדינו הוא אחת האפשרויות הפוטנציאליות הזמינות כעת. AAV9 נמצא בשימוש נרחב במחקר ריפוי גנטי כדי להעביר את הגן המעניין למערכת העצבים המרכזית וההיקפית. לחוקרים אין מספיק אפשרויות זמינות להעביר תרופות ישירות למערכת העצבים ההיקפית. ישנם מצבים הכוללים הפרעות נוירולוגיות הנגרמות על ידי מערכת העצבים ההיקפית או האוטונומית. עם זאת, חסרה שיטה יעילה למתן תרופות כדי לטפל במצבים אלה.

שיטה זו מדגימה דרך להעביר את חומרי התרופות ישירות לעצבים התועים כדי לטפל בבעיה של מערכת העצבים האוטונומית במחקרים פרה-קליניים באמצעות חולדות. בנוסף, ניתן לייצא שיטה זו להעברת תרופות דרך עצבים היקפיים אחרים עם שינויים הכרחיים במינים אחרים. המעבדה האפורה תמשיך במחקר ריפוי גנטי פרה-קליני בתיווך AV באמצעות מכרסמים ובעלי חיים גדולים. בנוסף, התמקדנו בפיתוח שיטות חדשות הישימות לריצוף האסטרטגיה של טיפול בהחלפת גנים.

[קריין] כדי להתחיל, חבר מזרק זכוכית של 100 מיקרוליטר כשהבוכנה הוסרה למחט בגודל 27. חבר קצה אחד של כ-45 סנטימטרים של צינורות פוליאתילן מעוקרים למחט בגודל 27, ואז התקן מזרק פלסטיק של שלושה מיליליטר עם מחט בגודל 27, והעמיס את המזרק בכ-0.5 מיליליטר של 0.9% מלח רגיל. השתמש במי מלח רגילים של 0.9% כדי למלא את צינורות הפוליאתילן מהקצה הפתוח, תוך הקפדה על מילוי אורך הצינור המלא וחבית מזרק הזכוכית עד שהמלח עולה על גדותיו. לאחר שתסיים, הסר והשליך את מזרק שלושת המיליליטר ואת המחט שלו. כעת הכנס את הבוכנה לתוך הקנה של מזרק הזכוכית, ודחף אותה מעט קדימה לאמצע הקנה, והנח את מזרק הזכוכית במשאבת המזרק. השתמש במשאבת המזרק כדי למשוך את הבוכנה מעט לאחור, וליצור מרחב אוויר של כ-1.5 סנטימטרים בקצה הפתוח של הצינור. פיפטה לפחות חמישה מיקרוליטר צבע, ותערובת תרופות מועמדת באמצעות מיקרו פיפטה של 10 מיקרוליטר על פיסת סרט פרה מעוקרת. משוך את תערובת התרופות המועמדת לתוך הצינור בעזרת משאבת המזרק, וסמן את רמת תערובת ההזרקה בטוש. התקן מחט בגודל 35 לצינור, ואבטח אותה למשטח נקי בשלב הניתוח בעזרת סרט, וודא שהיא נשארת קבועה, מעוקרת ואינה נוגעת בשום דבר אחר. הפעל את משאבת המזרק למשך 10 עד 15 שניות עד שתמיסת ההזרקה מתחילה לצאת מקצה המחט. העבירו את החולדה המורדמת לשולחן המצויד להסרת שיער והכנת האתר. מרחו משחת דמעה מלאכותית בשתי עיני החולדה כדי למנוע יובש יתר. מתן משככי כאבים בהתאם לפרוטוקול המוסדי המאושר לבעלי חיים כדי לשלוט בכאב כאשר החולדה חוזרת להכרה. גילח את הצד הגחוני של הצוואר באזור צוואר הרחם, והאריך אותו עד כשני סנטימטרים בניצב מקו האמצע משני הצדדים מהסנטר ועד עצם החזה. עיקר את האזור המגולח שלוש פעמים עם 70% אלכוהול אתילי ו-10% בטאדין, וניגב החוצה בתבנית מעגלית. העבירו את החולדה לשלב הכירורגי במצב שכיבה מתחת למיקרוסקופ הניתוח. ודא שכרית החימום מתחת לחולדה מחוסמת כראוי, והתאם את המיקרוסקופים הממוקדים כדי לדמיין את אזור צוואר הרחם לניתוח. חבר את החולדות או את שיני הלסת בתפר שאינו נספג. תקן את הקצה הפתוח של התפר בתוך חרוט האף כדי לשמור על הנחיריים בתוך חרוט האף לאורך כל ההרדמה. מקם את החולדה כך שראשה מונח בצד שמאל של המנתח הימני. הניחו כרית גזה מעוקרת מתחת לצוואר ליישור, ויישרו את אזור צוואר הרחם. כסו את גוף החולדה בווילון מעוקר והשאירו את אזור הניתוח חשוף. תקן ארבעה פיני מפסק עם מקבעים מגנטיים בארבע פינות השלב הכירורגי. כעת, יש להזריק חומרי הרדמה מקומיים אפידרמיס בקו האמצע של אזור צוואר הרחם בו יבוצע החתך. השתמש בלהב אזמל כדי לבצע חתך עור אורכי של שני סנטימטרים בקו האמצע בין הסנטר לעצם החזה באזור צוואר הרחם הגחוני. ואז עם קצות כותנה מעוקרים, בלאנט מפריד בין קצוות העור החתוכים. בעזרת קצות המפרק, משוך את קצוות העור המופרדים בכיוונים מנוגדים. הפרד את הפאשיה בעזרת קצות כותנה כדי להעמיק יותר, ודחף את בלוטות הרוק לרוחב. כעת, הפרד את שרירי המסטואיד של עצם החזה עם קצות כותנה ומשוך אותם לרוחב בעזרת סיכות מפרק. המשך להפריד רקמות בצד שמאל של קנה הנשימה עד שנראה נדן הצוואר. השתמש במלקחיים עדינים כדי ליצור חור קטן במעטפת הצוואר מבלי לפגוע בעורק הצוואר, והפרד בזהירות את עצב הנרתיק השמאלי מעורק הצוואר המשותף. לאחר הפרדת העצב מהעורק באמצעות מלקחיים, השתמש במחט מעוקלת בגודל 25 המותאמת למזרק מיליליטר אחד כדי לחבר את העצב, והחזק את העצב ביד הלא דומיננטית. החזק את המחט העמוסה בתערובת הצבע של התרופה המועמדת ביד הדומיננטית. כדי להקל על דקירה חלקה, שמור על העצב ישר על ידי משיכתו בעדינות באמצעות וו 25 מד. הכנס את המחט לעצב, וקדם אותה קדימה ביותר מ-0.5 סנטימטרים תוך שמירה על המחט מקבילה לעצב הנרתיק. משוך מעט לאחור כך שכ- 0.4 עד 0.5 סנטימטרים מהמחט יישארו בתוך העצב. הגבל את מספר דקירות העצבים במחט אחת ללא יותר משלוש פעמים. לאחר אישור החדרת המחט, שמור על מיקומה ללא תנועה והפעל את משאבת המזרק. עקוב אחר העירוי כדי לוודא שהוא נשאר בתוך העצב וזורם בצורה חלקה. השתמש בנקודה המסומנת על צינור העירוי כדי לעקוב אחר תנועת תערובת צבע התרופה. שימו לב כאשר העצב מתחיל לפתח את צבע הצבע. הסר את המחט המעוקלת בגודל 25, ובעזרת קצות כותנה סטריליים, הזיזו בעדינות את הרקמות בחזרה למקומן המקורי. ואז הסר את קצות הנסיגה. סגרו את הפצע בתפר נספג או שאינו נספג, ומרחו כמות זעירה של דבק רקמות בין התפרים במידת הצורך כדי להבטיח שהפצע נסגר בצורה מושלמת.