Name: ניתוח שטף מטבולי ex vivo במקרופאגים של הטחול והלב, ומונוציטים של מח העצם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 26 s
Description: חקור את תפקיד האימונומטבוליזם באינפקט מיוקרדיאלי באמצעות ניתוח שטף מטבולי בזמן אמת במקרופאגים של הלב והטחול ובמונוציטים ממח העצם. שיטה זו מאפשרת הבנת מנגנוני החלמה לבבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Ma, Y., Mouton, A. J., Lindsey, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+macrophage+biology+in+the+steady-state+heart%2C+the+aging+heart%2C+and+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac macrophage biology in the steady-state heart, the aging heart, and following myocardial infarction.</a> Transl Res. 191, 15-28 (2018).</li>
<li>Mouton, A. J., Li, X., Hall, M. E., Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+hypertension%2C+and+cardiac+dysfunction%3A+Novel+roles+of+immunometabolism+in+macrophage+activation+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Obesity, hypertension, and cardiac dysfunction: Novel roles of immunometabolism in macrophage activation and inflammation.</a> Circ Res. 126 (6), 789-806 (2020).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimethyl+fumarate+preserves+left+ventricular+infarct+integrity+following+myocardial+infarction+via+modulation+of+cardiac+macrophage+and+fibroblast+oxidative+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Dimethyl fumarate preserves left ventricular infarct integrity following myocardial infarction via modulation of cardiac macrophage and fibroblast oxidative metabolism.</a> J Mol Cell Cardiol. 158, 38-48 (2021).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+glucose+metabolism+reflect+polarization+in+resident+and+monocyte-derived+macrophages+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in glucose metabolism reflect polarization in resident and monocyte-derived macrophages after myocardial infarction.</a> Front Cardiovasc Med. 10, 1136252(2023).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+improves+left+ventricular+function+but+not+macrophage-mediated+inflammation+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism improves left ventricular function but not macrophage-mediated inflammation following myocardial infarction.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 327 (3), C571-C586 (2024).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+macrophage+polarization+over+the+myocardial+infarction+time+continuum%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Mapping macrophage polarization over the myocardial infarction time continuum.</a> Basic Res Cardiol. 113 (4), 26(2018).</li>
<li>XF software. Agilent Seahorse Analytics. , Agilent Technologies, Inc. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485">https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</a> (2025).</li>
<li>Matsuura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+suppresses+glucose+uptake+and+glycolysis+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Diabetes suppresses glucose uptake and glycolysis in macrophages.</a> Circ Res. 130 (5), 779-781 (2022).</li>
<li>Alexander, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bmal1+integrates+mitochondrial+metabolism+and+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Bmal1 integrates mitochondrial metabolism and macrophage activation.</a> Elife. 9, e54090(2020).</li>
<li>Wan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-34a+regulates+macrophage-associated+inflammation+and+angiogenesis+in+alcohol-induced+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">miR-34a regulates macrophage-associated inflammation and angiogenesis in alcohol-induced liver injury.</a> Hepatol Commun. 7 (4), e0089(2023).</li>
<li>Nomura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+oxidation+in+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fatty acid oxidation in macrophage polarization.</a> Nat Immunol. 17 (3), 216-217 (2016).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolytic+reprogramming+in+macrophages+and+MSCs+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolytic reprogramming in macrophages and MSCs during inflammation.</a> Front Immunol. 14, 1199751(2023).</li>
<li>Desousa, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+ATP+production+rates+using+the+Seahorse+XF+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Calculation of ATP production rates using the Seahorse XF Analyzer.</a> EMBO Rep. 24 (10), e56380(2023).</li>
<li>Lewis, A. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+immunometabolic+cardiac+inflammation+imaging+using+hyperpolarized+magnetic+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Noninvasive immunometabolic cardiac inflammation imaging using hyperpolarized magnetic resonance.</a> Circ Res. 122 (8), 1084-1093 (2018).</li>
<li>Walls, J., Romero, M. Assessing T cell bioenergetic poise and spare respiratory capacity using extracellular flux analysis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalls%2C+J+%22Agilent+Technologies+application+note%22">Agilent Technologies application note</a>. , 5994-4494 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-CD11b Microbeads UltraPure, עכבר</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-126-725</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ly6G Microbeads UltraPure, עכבר</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-120-337</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג II</td><td>וורת'ינגטון</td><td>NC9522060</td><td></td></tr><tr><td>Dnase סוג I</td><td>MillPore Sigma</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS אוקטו דיסוציאטור</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-427</td><td></td></tr><tr><td>צינורות GentleMACS C</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>צינורות דיסוציאציה של תאי MACS&nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת מלח מאוזנת של האנק</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-025-076</td><td></td></tr><tr><td>LS עמודות מגנטיות</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MS עמודות מגנטיות&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בידוד מונוציטים מח עצם, עכבר</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-629</td><td>כולל 1 מ"ל קוקטייל נוגדנים ביוטין מונוציטים, 2 מ"ל מיקרו-חרוזים אנטי-ביוטין, 1 מ"ל מגיב חוסם FcR</td></tr><tr><td>מפריד OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-108</td><td></td></tr><tr><td>מסנני הפרדה מראש (30 ומיקרו; m)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>מפריד QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-051</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת ליזה של תאי דם אדומים (10x)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>מנתח סוסון ים XFe96</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סוסון ים XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>103792-100</td><td>18 מחסניות חיישן Pro, 18 Pro Cell Cutlure Microplates, בקבוק אחד של Seahorse XF Calibrant Solution</td></tr><tr><td>Seahorse XF Glycolysis Stress Test</td><td>Kit Agilent</td><td>103020-100</td><td>6 שקיות חד פעמיות, כל אחת עם גלוקוז, אוליגומיצין ו-2-deoxy-D-glucose</td></tr><tr><td>Seahorse XF ערכת בדיקת מאמץ מיטוכונדריאלית</td><td>Agilent</td><td>103015-100</td><td>6 שקיות חד פעמיות, כל אחת עם אוליגומיצין, FCCP ורוטנון/אנטימיצין A</td></tr><tr><td>סוסון ים XF RPMI בינוני, pH 7.4, 500 מ"ל</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td>ללא פנול אדום, ביקרבונט, גלוקוז, פירובט או גלוטמין</td></tr></tbody></table>

ניתוח שטף מטבולי ex vivo במקרופאגים של הטחול והלב, ומונוציטים של מח העצם

Analyzing Ex Vivo Metabolic Flux in Splenic and Cardiac Macrophages and Bone Marrow Monocytes

מספרי תאים טיפוסיים המתקבלים מהרקמות השונות תלויים בגודל, בגיל ובמין של החיה. עבור עכבר זכר בוגר (כלומר, בן 16 שבועות, ~30 גרם), הטחול עשוי להניב 3.0-4.0 ×-106 מקרופאגים, בעוד שמח העצם (שני טיביות ושני עצם הירך) מניב בדרך כלל 1.0-1.5 ×-106 מונוציטים (איור 2A). הלב האוטם מניב בדרך כלל גם מספרים גבוהים, תלוי ביום שלאחר MI 4,5,6. ביום השלישי, התשואה היא בדרך כלל ~1.5 × 106</s...

Metabolic reprogramming is a hallmark of monocyte/macrophage activation and polarization between pro- and anti-inflammatory states. For example, ...

analyzing-ex-vivo-metabolic-flux-splenic-cardiac-macrophages-bone

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מונוציטים הם מווסתים מרכזיים של חסינות מולדת וממלאים תפקיד קריטי בחידוש המערכת הפגוציטית החד-גרעינית ההיקפית ובמקרה של דלקת. כתב יד זה מתאר את הליך ההדמיה בזמן אמת של מח העצם של קלווריה של העכבר כדי לחקור את מנגנון הגיוס של המונוציטים.

מעקב עכבר מח עצם המונוציטים<em&gt; In vivo</em

תכנות מחדש מטבולי הוא מאפיין ותנאי מוקדם לקיטוב מקרופאגים M1 ו-M2. כתב יד זה מתאר מבחן למדידת פרמטרים בסיסיים של גליקוליזה ותפקוד מיטוכונדריאלי במקרופאגים שמקורם במח עצם של עכבר. ניתן ליישם כלי זה כדי לחקור כיצד גורמים מסוימים משפיעים על חילוף החומרים והפנוטיפ של המקרופאגים.

אפיון חילוף חומרים של מקוטב M1 והמקרופאגים נגזר מח עצם M2 באמצעות ניתוח תאי שטף בזמן אמת

חקר חילוף החומרים הופך רלוונטי יותר ויותר למחקר אימונולוגי. כאן, אנו מציגים שיטה אופטימלית למדידת גליקוליזה ונשימה מיטוכונדריאלית בטחול עכברים, ולימפוציטים T ו-B.

פרוטוקול אופטימיזציה כדי לנתח הגליקוליזה מיטוכונדריאלי הנשימה לימפוציטים

פרוטוקול זה מציג שיטה פשוטה ויעילה כדי לבודד, לזהות ולכמת תאים חיסוניים המתגוררים במהלך מצב יציב או דלקת שריר הלב של עכברים. הפרוטוקול משלב עיכול אנזימטי ועל מכניים לדור של השעיה תא בודד מסוגל לנתח עוד יותר על ידי cytometry זרימה.

בידוד וזיהוי של תאים חיסוניים Extravascular של הלב

כאן אנו מציגים פרוטוקול בידודו של תאים לוקמיה במח העצם חולי לוקמיה וניתוח של מדינתם מטבולית. הערכה של פרופיל מטבולי של תאי סרטן ראשוני יכול לעזור כדי לאפיין טוב יותר את הביקוש של ראשי תאים, עלול להוביל רפואה אישית יותר.

הערכה של פרופיל מטבולי של תאי סרטן ראשוני

מעבר ממצב השקט למצב בידול בשל הפלסטיות המטבולית שלהם במהלך היווצרות הדם. כאן, אנו מציגים שיטה ממוטבת למדידת נשימה מיטוכונדריאלי וגליקוליזיס של HSPCs.

ניתוח מטבוליזם התא של גזע המטפאות

השיטה המוצגת כאן מסכמת פרוטוקולים ממוטבים להערכת ביו-אנרגיה תאית בגזע המטופויאטי של עכברים שאינם דבקים ובתאי אב פרימיטיביים (HSPCs) תוך שימוש במנתח השטף החוץ-תאי כדי למדוד את קצב ההחמצה החוץ-תאית (ECAR) ואת קצב צריכת החמצן (OCR) של HSPCs בזמן אמת.

הערכה של ביו-אנרגיה תאית בגזע המטופויאטי של עכברים ובתאי אב פרימיטיביים באמצעות מנתח השטף החוץ-תאי

כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט לבידוד והכתמה של תאי מח עצם מורין לפנוטיפ תאי גזע המופויטיים ותאי אב יחד עם תאי גזע אנדותל ומזנכימליים תומכים. כמו כן נכללת שיטה להעשרת תאים הממוקמים באזורי אנדוסטל ומח עצם מרכזי.

ניתוח ציטומטריית זרימה של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים של מח עצם מורין ותאי נישה סטרומליים

באמצעות מודל ex vivo ex vivo ex plant, חתיכות קטנות מהחלק הרוסטרלי של רקמת השומן הלבנה הוויסרלית מעכברים רזים מתרבות במשך 7–10 ימים, מה שמאפשר השראה ומחקר של דלקת רקמת השומן כפי שהיא מתרחשת במהלך האכלה עתירה שומן.

מודל עכבר אקס ויבו לדלקת רקמת שומן בדיאטה עתירה שומן

Toxoplasma gondii ממיר כדי ליצור ציסטה בתגובה מדגיש סביבתיים, אשר ניתן חיקה במודלים של תרביות רקמה. וידאו זה מדגים טכניקות כדי לבחון הקמת קיר הציסטה על ידי הפעלת מח עצם הנגזרות מקרופאגים או שינוי בינוני צמיחה pH בתאים פיברובלסטים.

Toxoplasma וול gondii ציסטה כינונה ב הופעל מח עצם הנגזרות המקרופאגים והגבלות Bradyzoite

חקור את תפקיד האימונומטבוליזם באינפקט מיוקרדיאלי באמצעות ניתוח שטף מטבולי בזמן אמת במקרופאגים של הלב והטחול ובמונוציטים ממח העצם. שיטה זו מאפשרת הבנת מנגנוני החלמה לבבית.

ניתוח שטף מטבולי ex vivo במקרופאגים של הטחול והלב, ומונוציטים של מח העצם

גלה סרטונים נוספים