Name: שיטה חדשנית ויעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: למד שיטה יעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה. פרוטוקול זה משפר שימור רקמות, חדירת נוגדנים ורזולוציית דימות ללא צורך בניתוחים מורכבים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Baker, K. D., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+larvae+and+obese+flies-emerging+studies+of+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Diabetic larvae and obese flies-emerging studies of metabolism in Drosophila.</a> Cell Metab. 6 (4), 257-266 (2007).</li>
<li>Bhide, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+autophagy+and+blocking+Nrf2+suppress+laminopathy-induced+age-dependent+cardiac+dysfunction+and+shortened+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Increasing autophagy and blocking Nrf2 suppress laminopathy-induced age-dependent cardiac dysfunction and shortened lifespan.</a> Aging Cell. 17 (3), e12747(2018).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342 (1), 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R., Venkatesh, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+development+in+Drosophila+and+vertebrates%3A+conservation+of+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genet%22%5BJournal%5D)">Heart development in Drosophila and vertebrates: conservation of molecular mechanisms.</a> Dev Genet. 22 (3), 181-186 (1998).</li>
<li>Gill, S., Le, H. D., Melkani, G. C., Panda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-restricted+feeding+attenuates+age-related+cardiac+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Time-restricted feeding attenuates age-related cardiac decline in Drosophila.</a> Science. 347 (6227), 1265-1269 (2015).</li>
<li>Melkani, Y., Pant, A., Guo, Y., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+assessment+of+cardiac+dynamics+in+aging+and+dilated+cardiomyopathy+Drosophila+models+using+machine+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated assessment of cardiac dynamics in aging and dilated cardiomyopathy Drosophila models using machine learning.</a> Commun Biol. 7 (1), 702(2024).</li>
<li>Ocorr, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (10), 3943-3948 (2007).</li>
<li>Piazza, N., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of cardiac disease.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 100, 155-210 (2011).</li>
<li>Wolf, M. J., Rockman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+genetic+screens%2C+and+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Drosophila, genetic screens, and cardiac function.</a> Circ Res. 109 (7), 794-806 (2011).</li>
<li>Lee, J. H., Bassel-Duby, R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart-and+muscle-derived+signaling+system+dependent+on+MED13+and+Wingless+controls+obesity+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Heart-and muscle-derived signaling system dependent on MED13 and Wingless controls obesity in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci. 111 (26), 9491-9496 (2014).</li>
<li>Adams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+sequence+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The genome sequence of Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5461), 2185-2195 (2000).</li>
<li>Rotstein, B., Paululat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+morphology+of+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Dev+Dis%22%5BJournal%5D)">On the morphology of the Drosophila heart.</a> J Cardiovasc Dev Dis. 3 (2), 15(2016).</li>
<li>Alayari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+labeling+of+Drosophila+heart+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Fluorescent labeling of Drosophila heart structures.</a> J Vis Exp. (32), e1423(2009).</li>
<li>Guo, Y., Abou Daya, F., Le, H. D., Panda, S., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+expression+of+Dgat2+induced+by+time%E2%80%90restricted+feeding+maintains+cardiac+health+in+the+Drosophila+model+of+circadian+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Diurnal expression of Dgat2 induced by time‐restricted feeding maintains cardiac health in the Drosophila model of circadian disruption.</a> Aging Cell. 23 (7), e14169(2024).</li>
<li>Melkani, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huntington%27s+disease-induced+cardiac+amyloidosis+is+reversed+by+modulating+protein+folding+and+oxidative+stress+pathways+in+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Huntington's disease-induced cardiac amyloidosis is reversed by modulating protein folding and oxidative stress pathways in the Drosophila heart.</a> PLoS Genet. 9 (12), e1004024(2013).</li>
<li>Hartley, P. S., Coward, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+podocyte+biology+using+Drosophila+nephrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Modeling podocyte biology using Drosophila nephrocytes.</a> Methods Mol Biol. 2067, 11-24 (2020).</li>
<li>Watson, J. R., Roth, J., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cryosectioning+of+Drosophila+heads+for+enhanced+Brain+Fluorescence+Staining+and+Immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Direct cryosectioning of Drosophila heads for enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining.</a> J. Vis. Exp. , Press e67791(2025).</li>
<li>Kelso, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flytrap%2C+a+database+documenting+a+GFP+protein%E2%80%90trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Flytrap, a database documenting a GFP protein‐trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nuc Acids Res. 32 (suppl_1), D418-D420 (2004).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Mery, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+muscle+LIM+protein%2C+Mlp84B%2C+is+essential+for+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211 (1), 15-23 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 ומיקרו; L פיפטה</td><td>אפנדורף</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 ומיקרו; L טיפים לפיפטה</td><td>אולימפוס פלסטיק</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X פוספט חוצץ מלח (PBS)</td> <td>פישר</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 הוכחה אתנול</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877. K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>זכוכית נגד גלגול</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>פישר</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>פישר</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות טעונות</td><td>גלובוס סיינטיפיק</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>תבניות חיתוך בקר</td><td>פישר</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>להבי קריוסטט</td><td>C.L. Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>קרח</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>יבש מלקחיים עדינים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>התקשות מדיה הרכבה עם Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית</td><td>פישר</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד 20%</td> <td>מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>פלואידין 594</td><td>Abnova</td><td>U0292</td><td></td></tr><tr><td>סכיני גילוח</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td> <td>אביבייםכלים מדעיים עדינים</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>פישר</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה חדשנית ויעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה

Novel And Efficient Method for Drosophila Heart Fluorescence Staining with Cryosectioning

השיטה שתוארה לעיל מקלה על חקר לב הדרוזופילה באמצעות הדמיה פלואורסצנטית ללא דיסקציה מייגעת. זהו היתרון העיקרי של שיטה זו, שכן השיטה הקונבנציונלית לדיסקציה של לב דורשת פיתוח מיומנויות מוטוריות מורכבות. כפי שמודגם באיור 1, השיטה נגישה יותר מדיסקציה של הלב עבור חוקרים חדשים ומאפשרת גמישות בניסוי. לחלופין, באמצעות אחסון של -80 מעלות צלזיוס בשלב תבנית ה-OCT, ניתן לשמור דגימות לשימוש שבועות רבים לאחר מכן. אין צורך להכשיר טכנאים מספיק זמן כדי ללמוד את טכניקות הניתוח וההטמעה הפשוטות, מה שהופ...

Drosophila heart models are widely employed in studying cardiac aging and modeling&#160;human cardiac diseases. However, the dissection of Drosophila ...

מעבדת המחקר שלי משתמשת במודל דרוזופילה כדי לחקור הזדקנות והפרעה מטבולית, וחוקרת הזנה מוגבלת בזמן ופעילות גופנית כהתערבות במחלות מטבוליות, שרירי לב, שינה ומחלות הזדקנות אחרות. למידת מכונה ו-omic עם אסטרטגיה גנטית ותזונתית פיזיולוגית מייעלים את בדיקת הדרוזופילה באמצעות מכשירים מודפסים בתלת מימד וגישות למידת מכונה. אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית של לבבות דרוזופילה מאפשרת זיהוי רב חלבונים על פני גנוטיפים וגילאים, אך מתמודדת עם אתגרים כמו דיסקציות מורכבות, שימור רקמות והדמיה ברזולוציה גבוהה של דפוסי ביטוי חלבון ספציפיים.פרוטוקול זה משפר את שימור הרקמות, חדירת הנוגדנים ורזולוציית ההדמיה, ומאפשר הדמיה טובה יותר של סמני חלבון לבביים. הוא מתמודד עם אתגרים כמו דיסקציה מורכבת, נזק לרקמות ורזולוציה מוגבלת בשיטת הרכבה מסורתית של לב שלם. פרוטוקול זה משפר את הנגישות לחקר הלב של דרוזופילה על ידי ביטול דיסקציה מורכבת, מאפשר ביצוע ביד אחת והימנעות ממיקרוסקופיה קונפוקלית יקרה, מה שהופך את ההדמיה ברזולוציה גבוהה לאפשרית יותר.כדי להתחיל, הרדמו 5 עד 10 זבובים באמצעות מחצלת זבוב פחמן דו חמצני. מקמו את הזבובים בטווח הראייה מתחת למיקרוסקופ בהגדלה של פי 1 עד פי 2. בעזרת מספריים קפיציים, ערפו את ראשי הזבובים, קצצו את הכנפיים והסירו את הרגליים.שמור על בית החזה והבטן יחד, המכונה הגוף. בעזרת מברשת, הניחו בעדינות את הגופות בצינורות מסומנים של 1.5 מיליליטר על קרח עד שכל קבוצות הניסוי נאספו. לאחר הוצאת הצינורות מהקרח, הוסף 100 מיקרוליטר של חומצה טטראצטית אתילן גליקול 10 מילי-מולרית ב-pH 8 לכל צינור.ודא שכל הגופים שקועים והנח את הצינורות על שייקר אורביטלי למשך 10 דקות. לאחר מכן, הסר והשליך את תמיסת החומצה הטטראצטית אתילן גליקול מהצינורות. פיפטה 100 מיקרוליטר PBS לכל צינור כדי לשטוף את הטישו למשך 10 דקות.הנח את הצינורות על שייקר המסלול במהלך תהליך הכביסה. לאחר השלכת ה-PBS, פיפטה 100 מיקרוליטר של 4% פרפורמלדהיד בתמיסת PBS לכל צינור. הנח את הצינורות על שייקר אורביטלי ב-100 יחידות למשך 15 דקות, וודא שהרקמות יישארו במגע עם התמיסה.לאחר מכן, השליכו את תמיסת הפרפורמלדהיד. לאחר השלמת הכביסה הסופית, העבירו את הגופות לתמיסה של 10% סוכרוז ב-PBS. ודא שהגופים נמצאים במגע עם התמיסה בתוך הצינור.אחזר קרח יבש מהאחסון ובחר כמה חלקים להצבה במגש מתכת או פלסטיק קטן. בחרו מגש עם מידות המאפשרות להכניס את התבנית והניחו אותה ישירות על גבי חתיכת קרח יבש אחת גדולה ושטוחה. מלאו תבנית מסומנת עד 50% בטמפרטורת חיתוך אופטימלית, או תרכובת OCT, ושפכו לאט כדי למזער בועות.בעזרת מברשת, הניחו בזהירות את גופי הדרוזופילה המנותחים והקבועים על פני תרכובת ה-OCT בתוך התבנית. בעזרת מלקחיים, דחפו כל גוף לתחתית התבנית כאשר הדופן הגבית של בית החזה והבטן מיושרות בדרך כלל לאורך החלק התחתון. התאם את הגופים כך שהבטן תשכב שטוחה לאורך תחתית התבנית.יישר את כל הגופים במידות X, Y ו-Z כדי להבטיח שכל חלק יכלול את כל הנושאים בו זמנית. תקן את עקמומיות הבטן, במיוחד אצל גברים, כדי לשטח אותה ככל האפשר מבלי לנקב או לרסק את הגוף. לאחר שכל הנושאים נמצאים במקומם, מקם את התבנית כך שהתחתית תשב ישירות על גבי חתיכת קרח יבש.ודא שתרכובת ה-OCT מתחילה לקפוא במגע והמשך עד שכל הנבדקים עטופים במלואם בתבנית. לאחר ההקפאה מעבירים את התבנית למקפיא המוגדר למינוס 20 מעלות צלזיוס כדי לאפשר הקפאה מלאה לאורך כל הדרך. לאחר הקפאה מלאה, מלאו את החלק הנותר של התבנית בתרכובת OCT.כדי לחבר מעט צ'אק לתבנית, מרחו כמות נדיבה של תרכובת OCT על הבלוק. לחץ על הביט שטוח על התרכובת ואפשר לו לקפוא לחלוטין בקריוסטט, בדרך כלל תוך חמש דקות. לאחר מכן שחרר את סיבית הצ'אק ואת בלוק ה-OCT מהתבנית.הנח את הביט לתוך הצ'אק, וודא שהבלוק נשאר מכוון כראוי מלמעלה למטה והדק את מפתח הצ'אק כדי לאבטח את הביט. כעת, באמצעות כפתורי הכוונון ובקרות עומק הצ'אק, יישר את הבלוק עם הלהב והגדר את רוחב החלק ל-20 מיקרומטר ומטה. חותכים כל פרוסה מהבלוק בתנועה איטית אך עקבית, מה שמאפשר לזכוכית נגד גלגול ללכוד כל פרוסה בזמן שהיא נחתכת.אוספים את החלקים באמצעות שקופיות מחוממות. בעזרת סכין גילוח, הסר את תרכובת ה-OCT העודפת המקיפה את החלקים. מתאר את הגבול של כל שקופית באמצעות טוש הידרופובי כדי לשמור על תמיסות שטיפה וכתמים מוגבלות לרקמה.בעזרת פיפטה של 1000 מיקרוליטר, שטפו את השקופיות שלוש פעמים עם PBS למשך חמש דקות כל אחת מבלי לגעת ברקמה. לאחר השלכת הכביסה הסופית, פיפטה את תמיסת הכתם הפלואורסצנטי על הרקמות ודגירה למשך שעה בטמפרטורת החדר בחושך. לאחר מכן, השליכו את הכתם הפלואורסצנטי ושטפו את השקופיות שלוש פעמים למשך חמש דקות כל אחת עם PBS.לאחר מכן, השליכו את שטיפת ה-PBS הסופית, והשאירו כמות קטנה של תמיסה על המגלשה. בעזרת פיפטה של 1000 מיקרוליטר, פיפטה שלוש עד חמש טיפות של אמצעי הרכבה על המגלשה, הימנעות ממריחה ישירה על הרקמה. בעזרת מלקחיים, מקם את החלקת הכיסוי בקצה אחד והורד בהדרגה את הצד השני עד שהוא סומק עם המגלשה.אטמו שקופיות עם לק ללא ניאון או נצנצים. אם אמצעי ההרכבה אינו מתקשה, בהתאם לכתם הפלורסנט, צלם מיד או אחסן את השקופיות למועד מאוחר יותר. לפני ההדמיה, בדוק את המגלשות לניקיון ונקה אותן בעדינות באמצעות מגבון טישו עם 70% אתנול בתמיסת מים.נתח את הנבדקים הפלואורסצנטיים הבהירים ביותר בניסוי כדי לבחור זמני חשיפה מתאימים לכל ערוץ פלואורסצנטי. סקר כל קבוצת ניסוי בתצוגה חיה עבור כל הערוצים כדי לאשר את הגדרות החשיפה הנכונות. לעקביות, התמקדו בכל נושא באמצעות אותו ערוץ פלואורסצנטי וצלמו תמונות עבור כל נושאי הצילום.לאחר ההדמיה, אחסן את השקופיות בחושך בארבע מעלות צלזיוס לצילום מחדש של תמונה בעתיד. שיטת ההדמיה הקרינה שימרה מאפיינים מרכזיים של לב הדרוזופילה, כגון האוסטיה, השסתום, סיבי האורך והסיבים ההיקפיים. כל מבנה צינור הלב והמבנים הקטנים המפורטים נלכדו בהגדלות שונות, כאשר פי 10 לכל המבנה והגדלות של פי 40 עד פי 60 הראו פרטים עדינים יותר, כגון סיבים מתכווצים היקפיים וסיבים מייצבים אורכיים.מיקרוגרפים פלואורסצנטיים מייצגים הדגימו מבני לב שמורים בדרוזופילה w1118 עם גרעינים מוכתמים ב-DAPI, ליפידים מוכתמים בירוק ומיופיברילים המכילים אקטין מוכתמים באדום עם פלואידין. צביעת פלואידין הדגישה ביעילות את הסיבים האורכיים וההיקפיים, והדגימה את מבנה חוטי האקטין השמור למרות מתחי הקפאה וחתך. כתמי שומנים חשפו אחסון שומן הממוקם ליד צינור הלב.

novel-efficient-method-for-drosophila-heart-fluorescence-staining

Research

JoVE Journal

Genetics

גנטיקה

כאן אנו מתארים פרוטוקול בסיסי תיוג הניאון של אלמנטים שונים של צינורות הלב של הזחל...

תיוג של פלורסנט תסיסנית לב מבנים

אנו מתארים תהליך להטבעת קיבעון, חתך, הדמיה של שלב...

הכנת עוברים אלקטרונים מיקרוסקופית של תסיסנית לב עוברי צינור

אנו מתארים פרוטוקול יעיל להפקת "פילה" ההכנות של עוברים תסיסנית של גנוטיפים מסוימים. פרוטוקול זה מאפשר ביצוע יעיל של מגוון רחב של מסכי גנטית. זה גם מאפשר הדמיה מצוינת של מבנים בעובר מאוחר.

Dissection חיים של תסיסנית עוברים: שיטות יעיל עבור הקרנת אוספים Mutant ידי מכתים נוגדן

זיהוי המנגנונים נזק לשרירים הוא קריטי. כאן אנו מציגים את הטכניקה היסטולוגית להכנת פרפין משובצים ו קפוא קטעי תסיסנית שרירי החזה. זה מאפשר ניתוח של מורפולוגיה שרירים לוקליזציה של חלבונים אחרים בתא השריר המרכיבים.

מדורים פרפין-Embedded קפואים של תסיסנית סקס שרירים

כאן אנו מתארים שלם הר...

הר כולו RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים

צביעה חיסונית היא טכניקה יעילה להמחשת סוגי תאים וחלבונים ספציפיים בתוך רקמות. על ידי שימוש בסוניקציה, הפרוטוקול המתואר כאן מקל על הצורך לנתח רקמות Drosophila melanogaster מעוברים וזחלים בשלב מאוחר לפני צביעה חיסונית. אנו מספקים מתודולוגיה יעילה לצביעה חיסונית של זחלי הר שלמים קבועים בפורמלדהיד.

הקל Sonication Immunofluorescence הכתמה של שלב מאוחר עוברי וזחל<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות<em&gt; באתר</em

אנו מתארים פרוטוקול להדמיה נפחית של תאים המסומנים בחלבון פלואורסצנטי עמוק בתוך לבבות עובריים שלמים ולאחר לידה. תוך שימוש בשיטות ניקוי רקמות בשילוב עם צביעה שלמה, ניתן לדמות תאים בודדים עם תווית חלבון פלואורסצנטי בתוך לב עוברי או לאחר לידה בצורה ברורה ומדויקת.

הדמיה הותרה עוברית ולבבות אחרי לידה ברזולוצית תא בודד

פיתחנו זרימת עבודה פשוטה וישימה לחלץ נתונים כמותיים במחקרים ביולוגיים תא המבוססות על ידי קרינה פלואורסצנטית-הדמיה של צבירת חלבון, שטף autophagic במערכת העצבים המרכזית דגמי דרוזופילה הקשורים ניוון מוחיים.

ביולוגיה של התא כמותית של הקשורים ניוון מוחיים ב דרוזופילה דרך ניתוח לא משוחדת של חלבונים מתויגות Fluorescently באמצעות ImageJ

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לגילוי ולוקליזציה של חלבון עובר Drosophila ו- RNA מאוסף להטבעה והטבעה מראש, אימונוסטיור ו- mRNA בהכלאה במקום .

פרוטוקול לאימונוהיסטוכימיה והפצת RNA In-situ בתוך עובר דרוזופילה מוקדם

Expand-Assisted Fluorative Fluorescence In Situ Hybridization (EASI-FISH) היא טכניקה חזקה המשלבת מיקרוסקופ הרחבה עם הכלאה פלואורסצנטית באתרה (FISH) כדי לזהות ביטוי של גנים מרובים ברקמה עבה. פרוטוקול זה מתאר את ההתקדמות האחרונה בשיטה ואת התאמתה לתיוג מערכת העצבים המרכזית של דרוזופילה השלמה.

זיהוי מולטיפלקס של ביטוי גנים במוח הדרוזופילה השלם באמצעות פלואורסצנציה איטרטיבית בסיוע הרחבה בהכלאה באתרה

מחקר זה מציג פרוטוקול פשוט לעיבוד רקמות הכולל עריפת ראש, קיבוע, קריוסקציה, צביעה פלואורסצנטית, צביעה חיסונית והדמיה, שניתן להרחיב להדמיה קונפוקלית ורב-פוטונית. השיטה שומרת על יעילות דומה לדיסקציות מורכבות, ועוקפת את הצורך במיומנויות מוטוריות מתקדמות. ניתוח תמונה כמותי מספק פוטנציאל חקירה נרחב.

הקפאה ישירה של ראשי דרוזופילה לצביעה פלואורסצנטית משופרת של המוח וצביעה חיסונית

למד שיטה יעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה. פרוטוקול זה משפר שימור רקמות, חדירת נוגדנים ורזולוציית דימות ללא צורך בניתוחים מורכבים.

שיטה חדשנית ויעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה

גלה סרטונים נוספים