מודל עכברי של דלקת חניכיים מתקדמת הנגרמת על ידי קשירת ניילון בטוחנות העליונות השנייה

היקף המחקר שלנו הוא לחקור את הגורמים התאיים והמולקולריים המעדיפים דלקת חניכיים שעבורם אנו משתמשים במודל עכברי של דלקת חניכיים הנגרמת על ידי קשירה.

מחקרים שנערכו לאחרונה הוכיחו את חשיבות הדלקת. דיסביוזה ומחלות מערכתיות הם גורמים קובעים בהתפתחות דלקת חניכיים.

הטכנולוגיה ששימשה לאחרונה בפריודונטיה כוללת מודלים של בעלי חיים, חלקם מחפשים מולקולות שונות, ריצוף פרוטאומיקה, ציטומטריית זרימה והיסטולוגיה, בין היתר.

אתגרי הניסוי הנוכחיים קשורים להבנת האינטראקציה בין מחלות מערכתיות לדלקת חניכיים.

אנו משתמשים במודל עכברי של דלקת חניכיים קשירה כדי להדגים כי הציטוקין הפרו-דלקתי A ו-S מעורב בהתפתחות דלקת חניכיים במהלך ההריון.

[קריין] כדי להתחיל, הניחו עכבר מורדם על שולחן עבודה הפונה כלפי מעלה כשראשו מופנה לעבר המפעיל. משוך בעדינות כל רגל ללא מתח ואבטח אותן עם סרט מיקרופור כדי למנוע תנועות לא רצוניות פתאומיות. כסו את העכבר בשמיכה או בגזה כדי לשמור על חום גופו. הנח קצה אחד של גומי אורתודונטי סביב החותכות העליונות והדק את הקצה השני למחזיק עליון מבלי להפעיל מתח. לאחר מכן הניחו גומי אורתודונטי שני סביב החותכות התחתונות ואבטחו אותו למחזיק נחות באמצעות גומיה. כעת הכניסו את מפרידי הלחיים והזיזו בזהירות את הלשון לצד אחד כדי לשפר את הראות. מקם את המיקרוסקופ כדי לדמיין את הטוחנות העליונות באמצעות מטרת ההגדלה הנמוכה ביותר. לאחר האיתור, הגדלה מוגברת כדי למטב את הנוחות והמיקוד עבור המפעיל. כאשר התמונה ברורה, זהה את הטוחנת הגדולה והפרוקסימלית M1, את הטוחנת הבאה M2 ואת הטוחנת הקטנה והדיסטלית M3. השתמש בתפר ניילון 6-0 למיקום קשירה מכיוון שהוא גורם פחות נזק מכני בהשוואה לתפרים רחבים יותר. בעזרת מלקחיים לרקמות, החזק את הקצה הדיסטלי של תפר הניילון 6-0 והנח אותו בבסיס הפפילה מהצד הפלאטיני בדיסטל של M2. הפעל לחץ קל דרך בסיס חלל החך הבין-פרוקסימלי כדי לקדם אותו לכיוון פני השטח הבוקאלי. כאשר התפר חוצה, משוך אותו דרך החלל הבין-פרוקסימלי לכיוון הצד הבוקאלי. כעת, הנח את קצה התפר בבסיס האזור הבין-פרוקסימלי על פני השטח המזיאלי של M2 מהצד הבוקאלי. דחף אותו בעדינות כדי לחצות את החלל הבין-פרוקסימלי ולהעביר אותו בחזרה דרך החלל הבוקאלי אל החיך. משוך בעדינות את תפר הניילון 6-0. החזק את הקצה עם מלקחיים רקמות המותאמים סביב M2, ואבטח את התפר באמצעות שלושה קשרים פשוטים. ואז חותכים את התפר במספריים עדינים. כדי לשחרר את העכבר, ראשית, הסר את הגומי סביב החותכות התחתונות ולאחר מכן את מפרידי הלחיים. לאחר מכן הסר את הגומי סביב החותכות העליונות ואת סרט המיקרופור מהרגליים. כעת הסר את העכבר משולחן העבודה ושמור את הלשון לצד אחד כדי לשמור על דרכי נשימה פתוחות ולמנוע סתימה. עטפו את העכבר בגזה או בבד והניחו אותו עם הפנים כלפי מעלה. שמור על החיה חמה, מכוסה בבד או גזה, ותחת השגחה עד שהיא ערה לחלוטין. מרחו טיפה אחת של היפרומלוז בכל עין עד שהעכבר יכול למצמץ כרגיל. לאחר מכן, החזירו אותו לכלוב הרגיל שלו. כדי לבדוק את קביעות הקשירה, קח את העכבר. החזיקו את ראשו וגופו בחוזקה, והשתמשו במלקחיים כדי לפתוח את הפה. תחת אור המנורה, התבונן בתפר הניילון 6-0 סביב M2. לאישור היווצרות ביופילם באמצעות היסטולוגיה, קצרו את הלסת העליונה מבעלי חיים שעברו המתת חסד לאחר 30 יום. שטפו את הרקמות בתמיסת נתרן כלורי 0.9% והניחו אותן בצינורות מיקרו-צנטריפוגה מסומנים. תקן את הדגימות בתמיסת פרפורמלדהיד 4% למשך שעתיים תחת תסיסה. לאחר מכן, שטפו את הדגימות הקבועות במי ברז למשך שעתיים. לאחר מכן, הסירו את הדגימות ב-20 נפחים של 4% EDTA ב-pH 7.3 למשך 20 יום, והחליפו את ה-EDTA כל ארבעה ימים. לאחר מכן, הטמיעו את הדגימות בפרפין. חותכים חמישה קטעי מיקרומטר מאזור M2 ומכתימים אותם בהמטוקסילין ואאוזין. התבונן בחלקים המוכתמים במיקרוסקופ אופטי כדי לתאר שינויים באפיתל הסולקוס, סיבי החניכיים והחניכיים, הגובה ושלמות הפסגה המכתשית. מדוד את אובדן ההתקשרות על ידי קביעת המרחק בין צומת אמייל הצמנטו לנקודה הגבוהה ביותר של פסגת העצם באמצעות תוכנית עריכה דיגיטלית. לאחר ניתוח היסטומטרי, נתח נתונים מקבוצות ביקורת וטיפול חניכיים באמצעות מבחן Mann-Whitney U. דלקת חניכיים גורמת לאובדן רקמות בעכברים, דלקת, דימום והיווצרות כיס חניכיים בשולי החניכיים עד היום ה-30, בניגוד לקבוצת הביקורת. ניתוח היסטולוגי אישר נזק מבני משמעותי בקבוצת PT, עם נוכחות של כיסי חניכיים, ניתוק סיבים ונדידה אפיקלית של האפיתל. כמו כן נצפה אובדן גרעיני תאים בחניכיים ובעצם בצד הבוקאלי והחך. לעומת זאת, קבוצת ה-CTL הראתה היסטולוגיה בריאה. ניתוח כמותי חשף אובדן התקשרות מוגבר משמעותית בקבוצת PT עם אובדן צד בוקאלי בכ-209 מיקרומטר וצד הפלאטין בכ-254 מיקרומטר.