Use of <em>In Vivo</em> Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

Hannah G. Braun; Jenny-Lee Thomassin

doi:10.3791/67870

שימוש במכלול In Vivo לבניית פלסמיד ביעילות גבוהה

JoVE Journal
Bioengineering

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Bioengineering

Use of In Vivo Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

שימוש במכלול In Vivo לבניית פלסמיד ביעילות גבוהה

Full Text

1,548 Views

06:25 min

February 7, 2025

DOI: 10.3791/67870-v

Hannah G. Braun¹, Jenny-Lee Thomassin¹

¹College of Medicine, Department of Biochemistry, Microbiology, and Immunology,University of Saskatchewan

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

הרכבה in vivo היא שיטת שיבוט בלתי תלויה בקשירה המסתמכת על אנזימי תיקון DNA פנימיים בחיידקים כדי להרכיב שברי DNA על ידי רקומבינציה הומולוגית. פרוטוקול זה הוא גם חסכוני בזמן וגם בעלות יתר, מכיוון שנדרשים מעט ריאגנטים, ויעילות השיבוט יכולה להגיע עד 99%.

מחקר הדוקטורט שלי מתמקד בחקר חלבונים שמופרשים על ידי חיידקים. אני רוצה במיוחד להבין אם חלק מהחלבונים המופרשים האלה חשובים לגרימת זיהומים בבני אדם. אתגר מרכזי בעבודה עם חיידקים קליניים שבודדו לאחרונה הוא עמידותם לאנטיביוטיקה, המעכבת טכניקות גנטיות מולקולריות המסתמכות על ברירה אנטיביוטית, כגון מחיקת גנים והשלמה גנטית.

פרוטוקול שיבוט זה מהיר וחסכוני יותר מכיוון ש-IVA מבטל את הצורך באנזימים מיוחדים ותגובות אנזימטיות עוקבות להרכבת פלסמיד לפני טרנספורמציה של E.coli. כדי להתחיל, הפעל תוכנה מיוחדת לניתוח DNA במערכת מחשב. הרכיבו באופן מלאכותי את הפלסמיד הרצוי.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos