בידוד וניתוח של נגעי קשת אבי העורקים ושורש במודל עכבר טרשת עורקים

מחקר חוקר התפתחות נגעים טרשת עורקים בקשת אבי העורקים ובשורש של עכברי נוקאאוט LDLR, ומציע פרוטוקול לבידוד, צביעה וניתוח להערכת הרכב רובד חומרת טרשת עורקים. מלבד בדיקה היסטולוגית המשמשת במחקר זה, טכניקות מעשיות להערכת טרשת עורקים כוללות גם סמנים ביוכימיים, בדיקות ביולוגיה מולקולרית ואולטרסאונד כלי דם. הדיוק של הליך הדיסקציה מהווה את המכשול הטכני הגדול ביותר בביצוע הפשטת אבי העורקים in vivo במודל העכבר של טרשת עורקים.

כדי להתחיל, הניחו את העכברים המומתים במצב שכיבה על לוח קצף מכוסה בשכבה אחת עד שתיים של נייר סופג. תקן את הגפיים בעזרת סיכות כדי לייצב את הגוף. רססו אתנול 75% על בטן העכברים כדי לנקות ולהרטיב את הפרווה.

השתמש במלקחיים כדי לתפוס את עור הגחון של העכבר. לאחר מכן, בעזרת מספריים עדינים, חותכים את העור מבסיס הבטן ועד לחלק העליון של הצוואר. פתח את דופן הבטן והשתמש במלקחיים כדי להרים את עצם החזה.

חותכים גם את הסרעפת וגם את הצלעות כדי לחשוף את חלל בית החזה. הסר את הוושט וקנה הנשימה כדי להקל על ניקוי עורקי הצוואר. הסר בזהירות איברים כולל הכבד, הריאות, הטחול, מערכת העיכול והלבלב תוך שמירה על הכליות ואבי העורקים הבטני.

בעת ניתוח העורקים המזנטריים, הרם את המעיים ובצע חתכים הרחק מאבי העורקים כדי למנוע נזק. כעת, מקם את העכבר מתחת למיקרוסקופ סטריאו כדי לספק שדה תצפית ברור וליישר מקור אור קר עם אזור החיתוך. בעזרת מזרק של 10 מיליליטר מלא ב- PBS, יש להזריק לאט לקודקוד החדר השמאלי בעזרת מחט ולהתבונן בהתרחבות אבי העורקים.

נגב בעדינות דם ונוזלים באזור החיתוך עם נייר טישו כדי לחשוף את שדה הראייה במלואו. לאחר מכן, אחזו במלקחיים בקטע הסרעפתי של אבי העורקים החזי, והשתמשו במספריים קפיציים כדי לחתוך את רקמת החיבור בין אבי העורקים לדופן שריר בית החזה. משוך בעדינות את הלב בעזרת מלקחיים והרם את אבי העורקים החזי.

התבונן בענפי קשת אבי העורקים ונתח את השומן האדוונטיציאלי ורקמת החיבור סביב קשת אבי העורקים וענפיו כלפי מעלה לאורך אבי העורקים החזי. נתח את אבי העורקים הבטני ועורקי הכסל הנפוצים כלפי מטה לאורך אבי העורקים החזי. חתוך את רקמת הלב וחתוך את החצי התחתון של הלב לאורך מישור מקביל לפרוזדורים, והנח את הלב הקצוץ באמצעי אחסון מתאים.

לפני ניתוח קשת אבי העורקים, הנח אטם קטן בצבע כהה מתחתיו כדי ליצור ניגודיות. צלם תמונה של אזור קשת אבי העורקים. חותכים את עורקי הכסל הנפוצים מילימטר עד שניים מתחת להתפצלותם, וחותכים את הענפים הקטנים של אבי העורקים לאורך עמוד השדרה כדי לשחרר אותו.

לאחר ניתוק עורקי הכליה ליד הכליות, חתכו את שלושת כלי הענפים בצוואר מהקצוות הדיסטליים שלהם. לבסוף, חתכו את אבי העורקים העולה ליד הלב. הכינו מראש מיליליטר אחד של תמיסת פרפורמלדהיד 4% בצינור צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר.

הכניסו את אבי העורקים לתוך הצינור המוכן, וקבעו אותו בטמפרטורת החדר למשך 24 שעות לפחות. לאחר מכן, העבירו את אבי העורקים לצלחת פטרי המכילה PBS כדי למנוע ממנו להתייבש. תחת מיקרוסקופ סטריאו, הסר בזהירות את כל השומן האדוונטיציאלי שנותר באמצעות מלקחיים ומספריים קפיציים כדי להפחית את ההפרעה בכימות הפלאק.

בעזרת מספריים קפיציים, חותכים בזהירות את אבי העורקים לאורך ציר האורך הפנימי שלו. ברצף, חתכו את שלושת הענפים של קשת אבי העורקים לאורך הצד הצדדי עד לגובה העקמומיות של קשת אבי העורקים, ואפשרו לה להתפשט במלואה. בשלב זה, המשך עם צביעת שמן אדום O, או אחסן את אבי העורקים ב-4% פרפורמלדהיד לניתוח עתידי.

מניחים את אבי העורקים הפתוח החתוך לצלחת של שש בארות. מוסיפים מיליליטר אחד של מים מזוקקים כפולים סטריליים לכל באר ושוטפים במשך חמש דקות על שייקר. מניחים את צלחת שש הבארות במכסה אדים ומייבשים באוויר במשך 20 דקות עד שלא נותרו סימני מים גלויים.

הוסף מיליליטר אחד של תמיסת עבודה Oil Red O שהוכנה טרייה לכל באר. לאחר ניעור הצלחת למשך 20 דקות, הסר את תמיסת Oil Red O מהבארות. מוסיפים שני מיליליטר מים מזוקקים כפולים סטריליים לכל באר ושוטפים במשך חמש דקות.

לאחר שלוש כביסות, שמור את אבי העורקים במים מזוקקים כפולים. העבירו את אבי העורקים לשקופית, והניחו כרית גומי שחורה מתחת לשקופית כדי לשפר את הניגודיות. פרשו את אבי העורקים החוצה תוך כדי צפייה במיקרוסקופ הסטריאו.

כעת, הנח את השקופית על נייר לבן כדי לשפר עוד יותר את הניגודיות. מקם סרגל ליד השקופית וקבל תמונה באמצעות מצלמה. אחסן את אבי העורקים המטופל בצינור צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המכיל מיליליטר אחד של PBS כדי לשמור על לחותו.

משקל הגוף של עכברי נוקאאוט LDLR שהוזנו בדיאטה בסגנון מערבי עלה משמעותית בהשוואה לאלו שהוזנו בדיאטת צ'או. רמות הטריגליצרידים והכולסטרול הכולל בפלזמה היו גבוהות משמעותית בקבוצת הדיאטה בסגנון המערבי מאשר בקבוצת הביקורת. צביעת שמן אבי העורקים Red O הראתה הצטברות שומנים חמורה בעורקים של עכברי נוקאאוט LDLR שהוזנו בדיאטה בסגנון מערבי בהשוואה לאלה בדיאטת צ'או.

משקעי שומנים מוגברים היו בקורלציה עם נגעים טרשת עורקים חמורים יותר. אזור הנגע בשורש אבי העורקים והליבה הנמקית היו גדולים משמעותית בעכברים שניזונו מתזונה מערבית בהשוואה לעכברים שניזונו מדיאטת צ'או. כימות של אזור הנגע בשורש אבי העורקים והאזור הנמק אישר כי התזונה המערבית החמירה את היווצרות רובד טרשת העורקים בעכברי נוקאאוט LDLR.