Name: חיזוי מובהקות נוגדנים של כדוריות דם אדומות באמצעות בדיקת מונוציטים-מקרופאגים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: למדו את שיטת בדיקת המונוציטים-מקרופאגים לחיזוי מובהקות נוגדנים של כדוריות דם אדומות. שיטה זו מציגה רגישות גבוהה יותר מבדיקת המונוציטים המסורתית ומסייעת בשיפור הבטיחות בהעברות דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS, pH 7.4, ללא Ca2+/Mg2+</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>311-425-CL</td><td>חנות ב-4 מעלות או בטמפרטורת החדר&nbsp;</td></tr><tr><td>AccutaseTM</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>7920</td><td>פתרון ניתוק תאים</td></tr><tr><td>מאגר ליזה ACK&nbsp;</td><td>STEMCELL טכנולוגיות&nbsp;</td><td>07850, 07800</td><td>חנות ב-4 מעלות</td></tr><tr><td>גלובולין אנטי אנושי</td><td>NOVACLONE, Immunocor.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE ANTI-IGG לבדיקות IAT&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-Rh(D) (WinRho. SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp;</td><td>1003092</td><td>כל מקור מסחרי של אימונוגלובין Rh יספיק&nbsp;</td></tr><tr><td>מגרד תאים</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td><td>ניתוק תאים&nbsp;</td></tr><tr><td>מסננת תאים 70uM ניילון</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>מסנן תאים&nbsp;</td></tr><tr><td>שקופית קאמרית Nunc. Lab-TekTM II עם כיסוי, שקופיות זכוכית RS סטריליות&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>154534</td><td>מגלשות קאמריות ל-MMA&nbsp;</td></tr><tr><td>כיסויים&nbsp;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 מ"מ</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus, צפיפות 1.077 גרם/ליטר</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>17-1440-03</td><td>הפרדה של PBMCS מדם מלא; מדיום שיפוע צפיפות</td></tr><tr><td>Elvanol הרכבה בינונית</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td>Dulbecco' s PBS (D-PBS) ללא Ca2+/Mg2+, 15% (w/v) שרף פוליוויניל ו-30% (v/v) גליצרין.</td></tr><tr><td>דם מלא טרי (שפופרת ACD) או מעיל באפי</td> שירותי <td></td><td>הדם הקנדיים</td><td>עשויים לנוח בטמפרטורת החדר עד 36 שעות&nbsp;</td></tr><tr><td>טכנולוגיות תאי גזע</td> <td>GM-CSF רקומביננטיות אנושיות</td>&nbsp;<td>78015.1</td><td>ציטוקין לקיטוב של מקרופאגים M1</td></tr><tr><td>רקומביננטיים אנושיים IFN-gamma</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>78020</td><td>ציטוקין לקיטוב של מקרופאגים M1</td></tr> Human <tr><td>Recombinant IL-4</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>78045.1</td><td>ציטוקין לקיטוב של מקרופאגים M2</td></tr><tr><td>רקומביננטיים אנושיים M-CSF</td><td>STEMCELL TECHNOLOGIES&NBSP;</td><td>78057.1</td><td>ציטוקין לקיטוב מקרופאגים M2</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740</td><td>תמיסת אחסון/ייצוב תאי RBC&nbsp;</td></tr><tr><td>בידוד בינוני&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td><td>PBS Ca2+ ו-Mg2+ חופשי + FBS 2% + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolysaaracide (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>ציטוקין לקיטוב של מקרופאגים M1</td></tr><tr><td>מתנול (100%)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>קיבוע שקופיות&nbsp;</td></tr><tr><td>ערכת בידוד מונוציטים תאי גזע ערכת העשרת מונוציטים אנושיים EasySep ללא דלדול CD16&nbsp;</td><td>STEMCELL טכנולוגיות&nbsp;</td><td>19058</td><td>בידוד מונוציטים מ-PBMCs</td></tr><tr><td>Poly-D-ysine&nbsp;</td><td>UofT Medstore&nbsp;</td><td>P6407</td><td>פתרון חיבור תאים&nbsp;</td></tr><tr><td>Rh(D) חיובי R2R2 RBCs</td><td>שירותי הדם הקנדיים</td><td>N/A</td><td>זמין גם מסחרית</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>350-000-CL</td><td>בתוספת 10% FBS מומת חום, תוסף GlutaMAX 1 מ"מ, 1 מ"מ HEPES ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין. יש לאחסן ב-4 מעלות.&nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת Trypan Blue&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>15250061</td><td>פתרון ספירת תאים&nbsp;</td></tr></tbody></table>

חיזוי מובהקות נוגדנים של כדוריות דם אדומות באמצעות בדיקת מונוציטים-מקרופאגים

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

התוצאות באיור 1 תואמות את הספרות ומצביעות על קיטוב מוצלח של מקרופאגים ממצב M0 למצב M1/M2 הבא שלהם. מקרופאגים M1 ו-M2 תורבבו במשך 8 ימים (6 ימים עם גורמי גדילה ויומיים של קיטוב), ונבדקו RBCs אופסוניים אנטי-D או אנטי-k (איור 2). מקרופאגים M2 מפגינים אינדקס פגוציטי גבוה בהשוואה ל-M1 עם RBCs המאוגדים על ידי אנטי-D (בקרה) או אנטי-k. תוצאה זו עולה בקנה אחד עם בדיקות מקדימות אחרות שבוצעו באמצעות M-MA (ראה טבלה 1). מקרופאגים M2 הם פגוצי...

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

prediction-red-blood-cell-antibody-significance-using-monocyte

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מציג בדיקת מונוציטים חד-שכבתית המשתמשת במונוציטים ראשוניים מדם היקפי כדי להעריך פגוציטוזה בתיווך קולטן Fcγ עם תאי דם אדומים מסוג פולי D נגד נוגדנים R2R2.

בדיקה לחקר פגוציטוזה מונעת קולטן Fcγ במונוציטים מונושכבות

מקרופאגים הנגזרות מונוציטים הם תאים חשובים של מערכת החיסון המולדת. כאן, אנו מתארים קלים...

<em&gt; במבחנה</em&gt; מודל ללמוד ההטרוגניות של בידול Macrophage אדם וקיטוב

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בספקטרומטריית מסה של תאים שלמים MALDI-TOF על תאים אוקריוטיים. כאן, אנו מדגימים את הדיוק של הטכניקה הזו על ידי ניתוח מצבי ההפעלה המרובים של מקרופאגים בתגובה למיקרו-סביבה שלהם.

ספקטרומטריית מסה MALDI-TOF של תא שלם היא שיטה מדויקת ומהירה לניתוח מצבים שונים של הפעלת מקרופאגים

כאן אנו מתארים שני מבחני למדידת הפעלת משלימים הנגרמת על ידי נוגדנים כנגד תאי דם אדומים. היתרון הגדול על פני מבחני הנוכחיים הוא מטבעם כמוני וקל לפרש.

שיטות כמותיות לאיתור של הפעלת משלים-Induced נוגדן בתאי דם אדומים

אנו מציגים פרוטוקול פשוט ויעיל לייצור מקרופאגים אנושיים. מעילים באפי מעובדים על ידי צנטריפוגה הכפולה שיפוע צפיפות ולאחר מכן מונוציטים מבודדים נבדלים למקרופאגים בשקיות תרבית תאים מצופים טפלון. זה ממקסם תשואות מקרופאג ומקל על קצירת תאים לניסויים הבאים.

בידוד של אדם מונוציטים ידי זוגי Gradient צנטריפוגה והבידול שלהם להמקרופאגים בתיקי תרבית תאים מצופים טפלון

בדיקת המונוציטים החד-שכבתית (MMA) היא בדיקה במבחנה המשתמשת במונוציטים ראשוניים מבודדים המתקבלים מדם מלא היקפי של יונקים כדי להעריך פגוציטוזיס בתיווך קולטן Fcγ (FcγR).

שימוש Assay מונוציטים חד שכבתי להערכת Fcγ קולטן בתיווך Phagocytosis

פרוטוקול זה מספק ניתוח של subplopulations macrophage במערכת העצבים המרכזית עכבר מבוגר על ידי cytometry הזרימה והוא מועיל לחקר סמנים מרובים לידי ביטוי על ידי תאים אלה.

ניתוח של microglia ומונוציטים הנגזרות מקרופאגים ממערכת העצבים המרכזית על ידי cytometry זרימה

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור אפיון מונוציט קבוצות משנה על-ידי cytometry זרימה של דם מלא. זה כולל חלוקה לרמות שער תת-קבוצות של להעריך את הבעות פניהם של סמני פני שטח נותן דוגמה ההערכה של התבטאות (דלקתיות) M1 ו- M2 סמנים (אנטי דלקתיות).

אפיון של קבוצות משנה מונוציט האנושית על ידי דם לזרום Cytometry ניתוח

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לכמת את פעילות כימוטקטיק של דם מונוציטים בדגמי העכבר, כדי להעריך את ההשפעות של התערבויות תזונתיות, תרופתי וגנטי על מונוציט דם ולאפיין את מונוציטים בדם נגזר מקרופאגים ב מודלים לעכבר באמצעות חלבון מונוציט-כימוסטנט-1 (MCP-1)-העמיסו במרתף ממברנה ממברנות ג'ל הנגזר.

הכמת של פעילות כימוכתית מונוציט בVivo ואפיון מקרופאגים הנגזרים מונוציט

השימוש בריאגנטים ייחוס לבדיקת שחרור ציטוקינים מאפשר פרופילי בטיחות במבחנה הניתנים לשחזור וסטנדרטיים יותר של נוגדנים חד-שבטיים אימונותרפיים. כאן אנו מתארים כיצד ניתן להשתמש במבחני שחרור ציטוקינים לצד פאנל ריאגנטים ייחוס כדי לחזות את בטיחותם של כמה נוגדנים חד-שבטיים טיפוליים.

שימוש בריאגנטים ייחוס כדי לאשר את החוסן של מבחני שחרור ציטוקינים לחיזוי בטיחות נוגדנים חד-שבטיים

מונוציטים ומקרופאגים הם תאים חיסוניים פלסטיים מאוד וניתנים לתכנות מחדש החיוניים לבריאות ולמחלות. הם חשים ומגיבים למגוון רחב של גירויים על ידי אימוץ תוכניות בידול ופנוטיפים ספציפיים. תקננו מודל מבחנה לחקר קיטוב ותכנות מחדש של מקרופאגים, ומספק כלי רב ערך למחקר.

מודל תכנות מחדש של מקרופאגים שמקורם במונוציטים אנושיים לבדיקות חוץ גופיות

למדו את שיטת בדיקת המונוציטים-מקרופאגים לחיזוי מובהקות נוגדנים של כדוריות דם אדומות. שיטה זו מציגה רגישות גבוהה יותר מבדיקת המונוציטים המסורתית ומסייעת בשיפור הבטיחות בהעברות דם.

חיזוי מובהקות נוגדנים של כדוריות דם אדומות באמצעות בדיקת מונוציטים-מקרופאגים

גלה סרטונים נוספים