Name: בדיקת החלקה של מעבדת בטיחות פריון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: למד שיטת דגימת משטחים לזיהוי זיהום פריונים במעבדות באמצעות RT-QuIC. פרוטוקול זה מאפשר הערכת יעילות חיטוי ושיפור בטיחות מעבדתית נגד חלבונים מידבקים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Bolton, D. C., McKinley, M. P., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+purifies+with+the+scrapie+prion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that purifies with the scrapie prion.</a> Science. 218 (4579), 1309-1311 (1982).</li>
<li>Oesch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+gene+encodes+scrapie+PrP+27-30+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.</a> Cell. 40 (4), 735-746 (1985).</li>
<li>Caughey, B., Raymond, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie-associated+form+of+PrP+is+made+from+a+cell+surface+precursor+that+is+both+protease-+and+phospholipase-sensitive%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The scrapie-associated form of PrP is made from a cell surface precursor that is both protease- and phospholipase-sensitive.</a> J Biol Chem. 266 (27), 18217-18223 (1991).</li>
<li>Deleault, N. R., Harris, B. T., Rees, J. R., Supattapone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+native+prions+from+minimal+components+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Formation of native prions from minimal components in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (23), 9741-9746 (2007).</li>
<li>Gajdusek, D. C., Zigas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degenerative+disease+of+the+central+nervous+system+in+New+Guinea%3A+the+endemic+occurrence+of+%26%2334%3Bkuru%26%2334%3B+in+the+native+population%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Degenerative disease of the central nervous system in New Guinea: the endemic occurrence of &#34;kuru&#34; in the native population.</a> N Engl J Med. 257, 974-978 (1957).</li>
<li>Centers for Disease Control. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+degenerative+neurologic+disease+in+patients+who+received+pituitary-derived+human+growth+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Fatal degenerative neurologic disease in patients who received pituitary-derived human growth hormone.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 34, 359-361 (1985).</li>
<li>Duffy, P., Wolf, J., Collins, G., DeVoe, A. G., Streeten, B., Cowen, D. Letter: possible person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+P+%22N+Engl+J+Med%22">N Engl J Med</a>. 290 (12), 692-693 (1974).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iatrogenic+Creutzfeldt-Jakob+disease+at+the+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Iatrogenic Creutzfeldt-Jakob disease at the millennium.</a> Neurology. 55 (8), 1075-1081 (2000).</li>
<li>Huillard d'Aignaux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+period+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+in+human+growth+hormone+recipients+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Incubation period of Creutzfeldt-Jakob disease in human growth hormone recipients in France.</a> Neurology. 53 (6), 1197-1201 (1999).</li>
<li>Marzewski, D. J., Towfighi, J., Harrington, M. G., Merril, C. R., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+pituitary-derived+human+growth+hormone+therapy%3A+a+new+American+case%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following pituitary-derived human growth hormone therapy: a new American case.</a> Neurology. 38, 1131-1133 (1988).</li>
<li>Hannah, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+receipt+of+a+previously+unimplicated+brand+of+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after receipt of a previously unimplicated brand of dura mater graft.</a> Neurology. 56 (8), 1080-1083 (2001).</li>
<li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+with+florid-type+plaques+after+cadaveric+dura+mater+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease with florid-type plaques after cadaveric dura mater grafting.</a> Arch Neurol. 56 (3), 357-362 (1999).</li>
<li>Antoine, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+extracranial+dura+mater+embolization+for+a+nasopharyngeal+angiofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after extracranial dura mater embolization for a nasopharyngeal angiofibroma.</a> Neurology. 48 (5), 1451-1453 (1997).</li>
<li>Esmonde, T., Lueck, C. J., Symon, L., Duchen, L. W., Will, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+and+lyophilised+dura+mater+grafts%3A+report+of+two+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease and lyophilised dura mater grafts: report of two cases.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 56, 999-1000 (1993).</li>
<li>Willison, H. J., Gale, A. N., McLaughlin, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+cadaveric+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following cadaveric dura mater graft.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 54, 940(1991).</li>
<li>Diringer, H., Braig, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+unconventional+viruses+in+dura+mater%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Infectivity of unconventional viruses in dura mater.</a> Lancet. 334, 439-440 (1989).</li>
<li>Peden, A. H., Head, M. W., Ritchie, D. L., Bell, J. E., Ironside, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+vCJD+after+blood+transfusion+in+a+PRNP+codon+129+heterozygous+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Preclinical vCJD after blood transfusion in a PRNP codon 129 heterozygous patient.</a> Lancet. 364 (9433), 527-529 (2004).</li>
<li>Will, R. G., Matthews, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+case-to-case+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Evidence for case-to-case transmission of Creutzfeldt-Jakob disease.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 45, 235-238 (1982).</li>
<li>el Hachimi, K. H., Chaunu, M. P., Cervenakova, L., Brown, P., Foncin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neurosurgical+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+with+analysis+of+donor+and+recipient%3A+agent+strains%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+III%22%5BJournal%5D)">Putative neurosurgical transmission of Creutzfeldt-Jakob disease with analysis of donor and recipient: agent strains.</a> C R Acad Sci III. 320 (4), 319-328 (1997).</li>
<li>Alper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214, 764-766 (1967).</li>
<li>Casassus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((France+halts+prion+research+amid+safety+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">France halts prion research amid safety concerns.</a> Science. 373 (6554), 475-476 (2021).</li>
<li>Brandel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+Creutzfeldt-Jakob+disease+diagnosed+7.5+years+after+occupational+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Variant Creutzfeldt-Jakob disease diagnosed 7.5 years after occupational exposure.</a> N Engl J Med. 383 (1), 83-85 (2020).</li>
<li>Flechsig, E., Hegyi, I., Enari, M., Schwarz, P., Collinge, J., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+scrapie+by+steel-surface-bound+prions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Transmission of scrapie by steel-surface-bound prions.</a> Mol Med. 7 (10), 679-684 (2001).</li>
<li>Zobeley, E., Flechsig, E., Cozzio, A., Enari, M., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+scrapie+prions+bound+to+a+stainless+steel+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Infectivity of scrapie prions bound to a stainless steel surface.</a> Mol Med. 5 (4), 240-243 (1999).</li>
<li>Brown, P., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+scrapie+virus+after+3+years%27+interment%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Survival of scrapie virus after 3 years' interment.</a> Lancet. 337 (8736), 269-270 (1991).</li>
<li>Seidel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrapie+agent+%28strain+263K%29+can+transmit+disease+via+the+oral+route+after+persistence+in+soil+over+years%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Scrapie agent (strain 263K) can transmit disease via the oral route after persistence in soil over years.</a> PLoS One. 2 (5), e435(2007).</li>
<li>Maddison, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+scrapie+prions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of scrapie prions.</a> J Virol. 84 (21), 11560-11562 (2010).</li>
<li>Pritzkow, S., Morales, R., Lyon, A., Concha-Marambio, L., Urayama, A., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+prion+disease+transmission+through+common+environmental+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient prion disease transmission through common environmental materials.</a> J Biol Chem. 293 (9), 3363-3373 (2018).</li>
<li>Alper, T., Cramp, W., Haig, D., Clarke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214 (90), 764-766 (1967).</li>
<li>Bernoulli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger+of+accidental+person-to-person+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+by+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Danger of accidental person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease by surgery.</a> Lancet. 309 (8009), 478-479 (1977).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Green, E. M., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chemicals%2C+heat%2C+and+histopathologic+processing+on+high-+infectivity+hamster-adapted+scrapie+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Effect of chemicals, heat, and histopathologic processing on high- infectivity hamster-adapted scrapie virus.</a> J Infect Dis. 145 (5), 683-687 (1982).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+disinfection+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Chemical disinfection of Creutzfeldt-Jakob disease virus.</a> N Engl J Med. 306, 1279-1282 (1982).</li>
<li>Dickinson, A. G., Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+scrapie+agent+to+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Resistance of scrapie agent to decontamination.</a> N Engl J Med. 299, 1413-1414 (1978).</li>
<li>Hunter, G. D., Millson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+heat+stability+and+chromatographic+behavior+of+the+scrapie+agent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Studies on the heat stability and chromatographic behavior of the scrapie agent.</a> J Gen Microbiol. 37, 251-258 (1964).</li>
<li>Pattison, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+the+scrapie+agent+to+formalin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Resistance of the scrapie agent to formalin.</a> J Comp Pathol. 75, 159-164 (1965).</li>
<li>Fraser, H., Farquhar, C., McConnell, I., Davies, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie+disease+process+is+unaffected+by+ionising+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Clin+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">The scrapie disease process is unaffected by ionising radiation.</a> Prog Clin Biol Res. 317, 653-658 (1989).</li>
<li>Yuan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+chronic+wasting+disease+prions+recovered+from+environmentally+relevant+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of chronic wasting disease prions recovered from environmentally relevant surfaces.</a> Environ Int. 166, 107347(2022).</li>
<li>Simmons, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+determination+of+residual+prion+infectivity+from+prion-decontaminated+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive determination of residual prion infectivity from prion-decontaminated surfaces.</a> mSphere. 9, e00504-e00524 (2024).</li>
<li>Orru, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+pathological+seeds+of+alpha-synuclein%2C+tau+and+prion+protein+on+solid+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of pathological seeds of alpha-synuclein, tau and prion protein on solid surfaces.</a> PLoS Pathog. 20 (4), e1012175(2024).</li>
<li>Wilham, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+end-point+quantitation+of+prion+seeding+activity+with+sensitivity+comparable+to+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Rapid end-point quantitation of prion seeding activity with sensitivity comparable to bioassays.</a> PLoS Pathog. 6 (12), e1001217(2010).</li>
<li>Srivastava, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+quantitation+of+pathological+alpha-synuclein+in+patient+biospecimens+by+RT-QuIC+seed+amplification+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Enhanced quantitation of pathological alpha-synuclein in patient biospecimens by RT-QuIC seed amplification assays.</a> PLoS Pathog. 20 (9), e1012554(2024).</li>
<li>Hughson, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+prions+and+amyloid+seeds+with+hypochlorous+acid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Inactivation of prions and amyloid seeds with hypochlorous acid.</a> PLoS Pathog. 12 (9), e1005914(2016).</li>
<li>Williams, K., Hughson, A. G., Chesebro, B., Race, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+chronic+wasting+disease+prions+using+sodium+hypochlorite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inactivation of chronic wasting disease prions using sodium hypochlorite.</a> PLoS One. 14 (10), e0223659(2019).</li>
<li>Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoclaving+standards+for+Creutzfeldt-Jakob+disease+agent+%5Bletter%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Autoclaving standards for Creutzfeldt-Jakob disease agent [letter].</a> Ann Neurol. 22 (4), 557-558 (1987).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newer+data+on+the+inactivation+of+scrapie+virus+or+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Newer data on the inactivation of scrapie virus or Creutzfeldt-Jakob disease virus in brain tissue.</a> J Infect Dis. 153 (6), 1145-1148 (1986).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>פישרברנד&nbsp; PurSwab Foam Swabs</td><td>קטלוג המותג פישר</td><td>#14-960-3E</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7005 מערכת מים טהורה</td><td>MilliporeSigma</td><td>Q7005T0C</td><td></td></tr><tr><td>מיני צנטריפוגה, 6000 סל"ד</td><td>Southern Labware</td><td>MLX-306</td><td></td></tr><tr><td>קורא צלחות אומגה</td><td>BMG Labtech</td><td>FLUOstar קורא</td><td></td>צלחות אומגה</tr><tr><td>Q700 סוניקטור</td><td>QSonica</td><td>Q700-110</td><td></td></tr><tr><td>חלבון פריון אוגר רקומביננטי</td><td>MNPRO</td><td>MNPROtein-אוגר</td><td>אוגר סורי, חומצות אמינו 90-231</td></tr><tr><td>Savant speedvac&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SPD1030-230</td><td></td></tr><tr><td>ננו-ספירות סיליקה (50 ננומטר)</td><td>ננו קומפוקסיקס&nbsp;</td><td>SISN50-25 מיליון</td><td></td></tr></tbody></table>

בדיקת החלקה של מעבדת בטיחות פריון

Prion Safety Laboratory Swipe Test

תיאור בכתב של תוצאות חיוביות ושליליות (כולל בקרות לוחית ומטוש חיוביות/שליליות)
מקלוני בקרה שליליים כלולים במקלוני המעקב כדי לפקח על זיהום פריונים פוטנציאלי שיכול להיות מוצג במהלך תהליך המטוש, המיצוי והריכוז. לוחית RT-QuIC הראשונה המבוצעת עבור מעקב חודשי נתון צריכה לכלול את בקרות המטוש החיוביות והשליליות. בקרות שליליות מוצלחות אינן מצליחות לחצות את סף הפלואורסצנטיות החיובית (איור 6A). תוצאה זו תצביע על כך שלא הוכנס זיהום במהלך הליכי הניסוי. תמציות מוצלחות של ספוגית בקרה חיובית יציגו זריעה חיובית בכל הבארות המשוכפלות עבור דגימה נתונה (מקלוני בקרה חיוביים זוהמו בזן אנצפלופתיה מינק המותאם לאוגר Hyper (HY TME) הומוגנט במוח. הכללת סדרת דילול בקרה חיובית מאפשרת לקבוע את הרגישות של זיהוי פריונים עבור ניסוי נתון (איור 6A).
כאשר בוחנים דגימות של תמצית מטוש פני שטח, משטחים שלא מראים זריעה מעל סף הפלואורסצנטיות החיובי שנקבע מראש יכולים להיחשב כשליליים לפריון (איור 6B). לעומת זאת, תמציות מטוש פני שטח מזוהמות בפריון יראו יכולות זריעה מעל סף הפלואורסצנטיות החיובית, אם כי יחס הנקודה המרבית (MPR) והזמן לפלואורסנציה יכולים להשתנות בהשוואה לבקרת הלוחות החיובית הכלולה (איור 6B). היכולת של השיטה להעריך חיטוי הולם מודגשת על-ידי המשטחים המזוהמים של פריונים שטופלו באקונומיקה, שכעת אינם מצליחים לזרוע RT-QuIC (איור 6B).
חשוב לציין, בעוד שהמעבדה שלנו מגדירה דגימה חיובית כדגימה שעוברת את סף הפלואורסצנטיות החיובית שנקבע לפחות במחצית מהבארות המשוכפלות, יש צורך שכל מעבדה תקבע סטנדרטים משלה. קצב היווצרות העמילואיד (RAF) והזמן עד לפלואורסצנטיות יכולים לשמש גם כדי לסייע בקביעת ערכי סף ספציפיים למעבדה לחיוביות.
ראינו תוצאות של ממצאים על פני השטח שעוברות את סף הפלואורסצנטיות החיובית, אבל עם עקומות קינטיות משתנות ולאחר זמן ארוך באופן חריג לפלואורסצנטיות בהשוואה לדגימות ביקורת חיוביות (איור 6C). תוצאות אלה יש לפרש בזהירות כפי שהם עלולים להיגרם על ידי נוכחות של אבק או כימיקלים שיורית נוכח על פני השטח. ממצאים אלה מדגישים את הצורך בניקיון מעבדה כללי, כמו גם קריטריונים להבחנה בין זריעה חיובית אמיתית לזריעה חיובית כוזבת.
סילוק פסולת מסוכנת ביולוגית מוצקה ונוזלית צריך להיעשות בהתאם להנחיות הנוכחיות לסילוק סיכונים ביולוגיים של מוסד נתון. טכניקות חיטוי פריונים נפוצות כוללות טיפול בנתרן הידרוקסידי, נתרן היפוכלוריט (אקונומיקה), או אוטוקלאבינג ב 134 ° C למשך 18 דקות 43,44,45,46.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig01.jpg"> 
איור 1: סקירה סכמטית של בדיקת החלקה של מעבדת בטיחות פריונים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig02.jpg"> 
איור 2: פריסת אתר מטוש לדוגמה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig03.jpg"> 
איור 3: תכנון ניסוי לדוגמה עבור בקרות מטוש כלל בדיקת החלקה של מעבדת בטיחות פריונים. (A) פריסת דגימה עבור בקרות תמצית מטוש שליליות וחיוביות. (B) בקרות תמצית מטוש שליליות וחיוביות צריכות להיות מושעות מחדש עם 50 μL של H2O. יש ליצור דילול של פי 10 של תמצית המקלון המרחף מחדש על ידי דילול לתמיסת דילול רקמות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig04.jpg"> 
איור 4: תכנון ניסוי לדוגמה עבור תמציות מטוש משטח מבדיקת החלקה של מעבדת בטיחות פריונים. (A) פריסה לדוגמה עבור תמציות מטוש פני שטח. (B) דגימות תמצית מטוש פני השטח צריכות להיות מושעות מחדש עם 20 μL של תמיסת דילול רקמות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig05.jpg"> 
איור 5: בדיקת החלקה חודשית של מעבדת בטיחות פריונים. תרשים זרימה המשמש לפירוש תוצאות ולקביעת תגובה מתאימה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig06.jpg"> 
איור 6: ניסוי מייצג של מטוש פני שטח. (A) לוחית בקרה של מטוש פני השטח המכילה בקרות של תמצית מטוש שלילי בבקרה משולשת (DPBS, מוח אוגר לא נגוע הומוגנט 10-4 ו-10-10) ובקרות תמצית מטוש חיובית במשולש (HY הומוגנט מוח 10-3). (B) תמציות מטוש מייצגות למשטחי ספסל, זכוכית ונירוסטה (S.S.) שעברו ספוגית לפני הזיהום, בעקבות זיהום ב-HY 10-3 ולאחר טיפול באקונומיקה במשטחים מזוהמים. (C) השוואה של מעקב פלואורסצנטי בין הומוגנט מוח לא נגוע 10-4, הומוגנט מוח HY 10-3, ותמצית המקלון מהספסל המצופה בשכבת אבק עדינה. בקרות לוח שליליות עבור לוחות A ו- B כוללות ריק (תמיסת דילול רקמות) ומוח אוגר לא נגוע הומוגני 10-4. לוח B כולל תוספת של הומוגנט מוח לא נגוע 10-4 ואת בקרת הצלחת החיובית של הומוגנט מוח HY 10-3. סף פלואורסצנטיות חיובי (מודגם על ידי קו מקווקו אדום) נקבע להיות 2. יחס נקודת השיא (MPR) המדווח הוא הפלואורסצנטיות המרבית חלקי קריאת הפלואורסצנטיות הראשונית המתקבלת על ידי קורא הלוחות. כל נקודה מייצגת באר טכנית אחת המשוכפלת עבור סוג מדגם נתון. הממוצע וסטיית התקן מוצגים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה 1: טופס תיעוד חודשי של אתר מטוש לדוגמה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Table%201.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>
איור משלים 1: תבנית פריסת אתר Swabbing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
תרשים משלים 2: טופס תיעוד חודשי של אתר מטוש. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%202.pdf" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

Transmission of iatrogenic prion disease has occurred from contaminated neurosurgical tools, transplant materials, and occupational exposure to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

כאן אנו מתארים assay הרומן לניטור ספיגת הפריון וסחר על ידי תאים חיסוניים מיד לאחר חיסון intraperitoneal ידי מטהרים fluorescently תיוג מוטות הפריון מצטבר חומר במוח נגועים אז ניטור ספיגת שלהם תנועה מאתר ההזרקה ואפיון התאים לתווך את האירועים הללו.

ניטור החיסונית תאים פלורסנט סחר Prion שעות לאחר ההדבקה מוטות intraperitoneal

ההגברה מחזורית misfolding חלבון (PMCA) היא assay במבחנה לחקר גיור פריון ומחסומי מתח ומינים. זה גם יכול לשמש כבדיקת גילוי פריונים.

הגברה מחזורית misfolding חלבון של פריונים

יש אוכלי נבלות פוטנציאל translocate פריונים ספגו מוח העברה זיהומיות בצואה שלהם לאזורים ללא מחלה. שלנו שיטות פירוט משמשות כדי לקבוע אם פריונים מרוסקים מותאמים עכבר יישארו זיהומיות לאחר מעבר למרות שמערכת העיכול של עורבים אמריקאים (brachyrhynchos Corvus), הצריכה נפוצה של בעלי חיים מתים.

נהלים לזיהוי פריוני זיהומיות לאחר המעבר דרך מערכת העיכול של מינים עופות

מדידת המחסום להעברה בין מינים של מחלות פריונים היא מאתגרת וכוללת בדרך כלל אתגרים של בעלי חיים או בדיקות ביוכימיות. כאן, אנו מציגים מבחן המרת חלבון פריון במבחנה עם יכולת לחזות מחסומי מינים.

הערכת מחסומי transmissible מינים ספגו מוח עם<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay המרת חלבון הפריון

ביצוע בדיקות ויראליות במעבדת BSL-4 מעורב יותר בהשוואה לעבודה במעבדת BSL-2 בשל אמצעי זהירות נוספים נדרשים. כאן, אנו מציגים סקירה כללית של שיטות ונהלים המשמשים בתוך מעבדת BSL-4 הממחישים שימוש נכון בארון בטיחות ביולוגית מסוג II, ניהול/סילוק פסולת והסרת דגימות.

אמצעי בטיחות ונהלי הפעלה בבית (א) BSL-4 מעבדה: 2. שיטות כלליות

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה תפוקה גבוהה על המסך באופן פונקציונלי עבור חלבון מבוססת ירושה cerevisiae ס.

הקרנה תפוקה גבוהה של חלבון מבוססת ירושה cerevisiae ס

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתיאור טכניקה פשוטה, מהירה ויעילה פריון הגברה, השיטה בזמן אמת רועד מפחד-induced ההמרה (RT-מהר).

בזמן אמת רועד מפחד הנוצרות על-ידי המרה Assay גילוי של CWD Prions חומר צואתי

מבחן אימונוהיסטוכימיה מהירה ישירה (DRIT) מציע ארגון עולמי לבריאות בעלי חיים וארגון הבריאות העולמי (OIE/מי) המזוהה נגד נוגדן פלורסנט ישירה (DFA) מבחן לאבחון כלבת. בדיקה זו מאפשרת יישומים מבוססי שדה שניתן לבצע בתוך כ 1 שעות על רשמים במוח באמצעות מיקרוסקופ אור.

מעקב משופר כלבת באמצעות מבחן אימונוהיסטוכימיה ישירה מהירה

אנו מציגים פרוטוקול מלאה לאבחון שלאחר המוות של כלבת בעלי חיים תחת תנאי שדה באמצעות מבחן חיסוני מהיר האבחון (RIDT), מן הבדיקה ביופסיה המוח לפרשנות הסופי. אנו גם לתאר יישומים נוספים באמצעות המכשיר לניתוח מולקולרי הגנוזות ויראלי.

שדה הנתיחה לאחר המוות חיסוני מהיר מבחן אבחון עבור הגדרות מוגבלות משאב עם יישומים מולקולריים נוספים

תיוג חיסוני של חלבון פריון חריג באמצעות פרוטוקולים אימונוהיסטוכימיים דורש דגימה ספציפית ומתודולוגיות להכנת נוגדנים נגד PrP. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים העיקריים בהסרת אפיטופים כדי להבטיח תיוג חיסוני תקין של PrP ולמזער כתמי רקע לא ספציפיים. כמו כן, גישה זו לוקחת בחשבון אמצעי בטיחות ביולוגית בעת ביצוע מחקרים אימונוהיסטוכימיים עם רקמות נגועות פריון.

זיהוי של חלבון פריון חריג על ידי אימונוהיסטוכימיה

למד שיטת דגימת משטחים לזיהוי זיהום פריונים במעבדות באמצעות RT-QuIC. פרוטוקול זה מאפשר הערכת יעילות חיטוי ושיפור בטיחות מעבדתית נגד חלבונים מידבקים.

בדיקת החלקה של מעבדת בטיחות פריון

גלה סרטונים נוספים