Name: מדידת ספיגת הגלוקוז האנלוגי, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-6-deoxyglucose, ברשתית עצבית שלמה של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: למדו שיטה לבדיקת ספיגת גלוקוז ברשתית העצבית של עכברים באמצעות האנלוג הפלואורסצנטי 6-NBDG. הפרוטוקול מאפשר מדידה יעילה וזולה של שינויים מטבוליים בזיקנה ובמחלות נוירודגנרטיביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 מלקחיים</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>משמש לדיסקציה</td></tr><tr><td>של רשתית 1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 גרם x 5/8 אינץ' מחט</td><td>סול-M</td><td>112658</td><td>משמש לניקוב קרנית במהלך דיסקציה</td></tr><tr><td>5 מ"ל צינורות</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל</td><td>אוונטור מאת VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>אנלוגי גוקוזה פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>96 צלחות באר שחורות עם תחתית שקופה</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>מיכל פחם הרדמה</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>בשימוש בהרדמה הגדר</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>לעיכוב GLUT1.</td></tr><tr><td>צנטריפוגה ב-4 מעלות; C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>גז דחוס (5% פחמן דו חמצני, 95% חמצן)</td><td>גז אוויר</td><td>UN3156</td><td>משמש בהרדמה להגדיר</td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים</td><td>מכשיר כירורגי Roboz</td><td>RS-5137</td><td>משמש לדיסקציה של הרשתית</td></tr><tr><td>DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>משמש לאחר אתנול לניקוי סוניקטור בין דגימות</td></tr><tr><td>ניתוח מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>szX12</td><td>משמש לדיסקציה של הרשתית</td></tr><tr><td>אתנול 200 הוכחה</td><td>מעבדות דקון</td><td>2701</td><td>לשמש לניקוי סוניקטור בין דגימות</td></tr><tr><td>מתלה צינור צף קצף</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>לצינורות במהלך הדגירה במדרגות אמבט מים</td></tr><tr><td>מספריים כלליים</td><td>מכשיר כירורגי Roboz</td><td>RS-680</td><td>משמש לרשתית דיסקציה</td></tr><tr><td>איזופלורן 250 מ"ל בקבוק</td><td>פיראמל טיפול נמרץ</td><td>NDC &nbsp; 6679401725</td> ציוד <td>הרדמה</td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>Vetequip נמכר על ידי VWR</td><td>89012-492</td><td>משמש להרדמה לפני המתת חסד</td></tr><tr><td>מגבוני קים</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>קורא מיקרופלייט</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>SpectraMax M2 קורא מיקרו-פלטות</td><td>משמש לקריאת מדגם</td></tr><tr><td>נוירו-בזאלי- מדיה</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>חרוט אף (נמוך מסכת הרדמה פרופיל)</td><td>קנט סיינטיפיק</td><td>SOMNO-0801</td><td>משמש להעברת אנסתזיה</td></tr><tr><td>מטרה לניתוח מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>DF plapo 1x pf</td><td>משמש לדיסקציה של הרשתית</td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>משמש במהלך דיסקציה של הרשתית</td></tr><tr><td>מגיב בדיקת פירס</td><td>תרמו פישר 1861426</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מדעי טיפים לפיפטה P20</td><td>אולימפוס פלסטיק</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פיפטמן P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M, F144059M</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת SoftMax Pro במחשב</td><td>מכשירים מולקולריים</td> תוכנת <td>SoftMax Pro 7</td><td>תוכנה המשמשת לקריאת מדגם</td></tr><tr><td>מפרק סוניק</td><td>תרמו פישר FB50110 מדעי</td><td></td><td>דגימת סוניקט (רשתית)</td></tr><tr><td>העברת פיפטות</td><td>פישרברנד</td><td>13-711-9AM</td><td>משמש להעברת רשתית מצינור אחד למשנהו</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים של Vannas</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>משמש לדיסקציה</td></tr><tr><td>אמבט מים מוגדר ל-37 מעלות; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>משמש לדגירה</td></tr></tbody></table>

מדידת ספיגת הגלוקוז האנלוגי, 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose, ברשתית עצבית שלמה של עכברים

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

איור 4 מציג מדידות פלואורסצנטיות מייצגות של גלוקוז מרשתית עכבר WT שהודגרה עם 6-NBDG לפרקי זמן שונים. לאחר 30 דקות דגירה, רמות 6-NBDG היו בממוצע 336 ±-27.91 יחידות אסטרונומיות, בעוד שלאחר 60 דקות, רמות 6-NBDG עלו לממוצע של 616.3 ±-8.38 יחידות אסטרונומיות. דגירה נוספת של 30 דקות הובילה לרמה מופחתת של 6-NBDG (506.4 ±-5.3 AU). לאחר 60 דקות, השונות בתוצאות הייתה מינימלית ולכן נבחר כזמן האופטימלי לדגירה של הרשתית עם 6-NBDG. שימו לב שהיחידות הן שרירותיות ושתוצאות אלה לא נורמלו לחלבון הכולל.
<p ...

מדידת ספיגת הגלוקוז האנלוגי, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-6-deoxyglucose, ברשתית עצבית שלמה של עכברים

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

השיטה קלה ונוחה, כדי לקבוע את מידת צימוד צומת הפער נותב בין הנוירונים ברשתית מתואר. טכניקה זו מאפשרת לחקור את הפונקציה של סינפסות חשמליות בין הנוירונים ברשתית שלמים בתנאי תאורה שונים, בזמנים שונים של היום והלילה.

Cut-טעינה: כלי שימושי לבחינת היקף Coupling צומת גאפ נותב בין הנוירונים רשתית

בסרטון זה, אנו מדגימים טכניקת ex vivo למדידת דלדול אנלוגי של גלוקוז חוץ-תאי באיברי עכבר שנקצרו. זה כרוך לדגור על רקמת העכבר בתמיסה המכילה deoxyglucose מסומן פלואורסצנטי, אשר נלקח על ידי התאים. ספיגת הגלוקוז האנלוגית יכולה להיקבע בעקיפין על ידי מדידת הפלואורסצנטיות של המדיום המודגר.

מדידת דלדול אנלוגי של גלוקוז פלואורסצנטי חוץ-תאי: טכניקת מדידה חלופית להערכת ספיגת גלוקוז באיברי עכבר Ex Vivo

סרטון זה מדגים את הערכת ספיגת הדופמין בסינפטוזומים שנאספו ממוחות עכברים. הוא מתאר שלבים להכנת סינפטוזומים לספיגת דופמין באמצעות מובילי דופמין, טיפול בהם בריכוזים משתנים של דופמין עם תווית רדיו, בידוד הסינפטוזומים ומדידת רדיואקטיביות כדי לכמת את ספיגת הדופמין.

מדידת ספיגת דופמין בסינפטוזומים במוח עכבר באמצעות דופמין עם תווית רדיו

פעילותם של נוירונים בודדים מעכברים בגיל מבוגרים ניתן ללמוד על ידי מתנער נוירונים מאזורים מסוימים במוח ובאמצעות הדמיה לצבוע פוטנציאל הממברנה ניאון. על ידי תגובות בדיקות לשינויים ברמת סוכר, טכניקה זו יכולה לשמש כדי לחקור את רגישות הגלוקוז של נוירונים ההיפותלמוס ventromedial מבוגרים.

ממברנה דיי הדמיה אפשרית של ventromedial היפותלמוס נוירונים מעכברים בוגרים ללמוד גלוקוז חישה

מחלות רבות סכנת חזון עינית משויכות לקוי microvessels ברשתית. לכן, המדידה של תגובות arteriole ברשתית הוא חשוב לחקור את המנגנונים הקשורים pathophysiological המשמש כבסיס. מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט עבור בידוד arteriole רשתית העכבר והכנות כדי להעריך את ההשפעות של חומרים vasoactive על קוטר כלי הדם.

שלבי הכנה מדידה של תגובתיות ב העכבר רבים ברשתית Vivo לשעבר

טכניקה זו מתארת הקלטה בזמן אמת של צריכת החמצן ואת המחירים acidification חוץ-תאית ברקמות רשתית העכבר explanted באמצעות של מנתח השטף חוץ-תאית.

מדידה של חילוף החומרים האנרגיה ברקמת הרשתית Explanted באמצעות ניתוח השטף חוץ-תאית

ספיגת הגלוקוז מוגברת בתאי העצב המוטוריים של Drosophila המושפעים מחלבון מחייב DNA TAR (TDP-43), כפי שצוין על ידי חיישן גלוקוז מבוסס FRET, מקודד גנטית.

מדידת ספיגת גלוקוז במודלים של דרוסופילה של פרוטאינופתיה TDP-43

כלי דם ברשתית עכבר מעניינים במיוחד בהבנת המנגנונים של היווצרות תבניות כלי דם. פרוטוקול זה מודד באופן אוטומטי את הקוטר של כלי הדם ברשתית העכבר מתמונות פונדוס אנגיוגרפיה פלואורסצנטית במרחק קבוע מהדיסק האופטי.

מדידת קוטר כלי הדם ברשתית מתמונות אנגיוגרפיה פלואורסצנטית של עכבר

אנו מתארים שיטה שוב ושוב לדמיין microglia Murine והפצת...

הגולגולת דק חלון טכניקה כרונית דו פוטון ב-vivo הדמיה של microglia Murine של מודלים של Neuroinflammation

מאמר זה מתאר את ההקלטה של ​​תאים בודדים מאוכלוסיות העצבית מתויג fluorescently ברשתית עכבר ללא פגע. באמצעות שני הפוטונים עירור בתאי אינפרא אדום שכותרתו transgenetically היו מטרה הקלטה תיקון-clamp ללמוד לאור התגובות שלהם, מאפייני שדה פתוח, ומורפולוגיה.

אפיון אלקטרו של ה-GFP, הבעת אוכלוסיות תאים ברשתית אינטקט

למדו שיטה לבדיקת ספיגת גלוקוז ברשתית העצבית של עכברים באמצעות האנלוג הפלואורסצנטי 6-NBDG. הפרוטוקול מאפשר מדידה יעילה וזולה של שינויים מטבוליים בזיקנה ובמחלות נוירודגנרטיביות.

מדידת ספיגת הגלוקוז האנלוגי, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-6-deoxyglucose, ברשתית עצבית שלמה של עכברים

גלה סרטונים נוספים