Live-Cell F&#246;rster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

Javed Akhtar; Muhammad Imran; Jiahe Wang; Gang Ma; Guanyu Wang

doi:10.3791/68075

הדמיית העברת אנרגיית תהודה של תאים חיים של דינמיקת הפעלת Akt מווסתת מטבולית בתאי HepG2

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

Live-Cell Förster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

הדמיית העברת אנרגיית תהודה של תאים חיים של דינמיקת הפעלת Akt מווסתת מטבולית בתאי HepG2

Full Text

785 Views

08:03 min

May 23, 2025

DOI: 10.3791/68075-v

Javed Akhtar^1,2,3,4,5, Muhammad Imran⁶, Jiahe Wang^1,2,3, Gang Ma⁵, Guanyu Wang^1,2,3

¹Laboratory of Biocomplexity and Engineering Biology, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, ²Futian Biomedical Innovation R&D Center,The Chinese University of Hong Kong, ³Ciechanover Institute of Precision and Regenerative Medicine, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, ⁴Department of Immunology and Microbiology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, ⁵Department of Biology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, ⁶Department of Computer Science and IT,University of Southern Punjab

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות הדינמיקה המרחבית-זמנית של הפעלת Akt וזרחון בתאי HepG2 חיים. הדמיית העברת אנרגיית תהודה של פורסטר (FRET) היא כלי רב עוצמה המספק תובנות חשובות לגבי מסלולי איתות אינסולין וויסות מטבולי בתאי סרטן.

הטרוגניות תאית היא מכשול לתיאור מדויק של המורכבויות של הדינמיקה התאית, שהן למעשה ממוצעות. זו הסיבה שאנחנו כאן כדי לצלם תאים בודדים. ההתפתחויות האחרונות בביו-חיישנים מקודדים גנטית של FRET שיפרו את הספציפיות וחוללו מהפכה במעקב בזמן אמת אחר Akt בתוך תאים, שהוא חיוני להבנת ההטרוגניה ולפיתוח טיפולים תרופתיים מותאמים אישית.

סרטן וסוכרת עוברים מסלולים מטבוליים מורכבים. כדי לפענח את המורכבות הביולוגית של מסלול איתות האינסולין בסרטן, אנו משתמשים בהדמיית FRET מתקדמת של תאים חיים ברזולוציה של תא בודד. מצאנו כי אופטימיזציה של מיקרוסקופ קונפוקלי, תצורת חומרה ותוכנה יחד עם כוונון עדין של עוצמת הלייזר והתאמת רווח הגלאי הם קריטיים כדי למזער כל רעש ודיבור צולב ספקטרלי באותות FRET.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos