Name: שינוי אנזימטי והערכת ציטומטריית זרימה של חלבונים המוצגים על פני השטח של שמרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: למדו שינוי אנזימטי והערכת ציטומטריית זרימה של חלבונים המוצגים על פני השטח של שמרים. שיטה זו מאפשרת מיפוי קינטי של שינויים אנזימטיים בקלות רבה יותר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Lea, M. A., Weber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+enzymes+in+homeostasis%3A+VIII.+Inhibition+of+the+activity+of+glycolytic+enzymes+by+free+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Role of enzymes in homeostasis: VIII. Inhibition of the activity of glycolytic enzymes by free fatty acids.</a> J Biol Chem. 243 (6), 1096-1102 (1968).</li>
<li>Mahé, M., Rios-Fuller, T. J., Karolin, A., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+enzymatic+dysfunctions+in+metabolic+disorders+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Genetics of enzymatic dysfunctions in metabolic disorders and cancer.</a> Front Oncol. 13, 1230934(2023).</li>
<li>Fernandez-de-Cossio-Diaz, J., Vazquez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+model+of+cell+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A physical model of cell metabolism.</a> Sci Rep. 8 (1), 8349(2018).</li>
<li>Metallo, C. M., Vander Heiden, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+metabolic+regulation+and+its+influence+on+cell+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Understanding metabolic regulation and its influence on cell physiology.</a> Mol Cell. 49 (3), 388-398 (2013).</li>
<li>Mildvan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+signaling+and+related+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Proteins%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of signaling and related enzymes.</a> Proteins. 29 (4), 401-416 (1997).</li>
<li>Frosina, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+enzymes+that+repair+endogenous+damage+to+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Overexpression of enzymes that repair endogenous damage to DNA.</a> Eur J Biochem. 267 (8), 2135-2149 (2000).</li>
<li>Schärer, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+and+biology+of+DNA+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed%22%5BJournal%5D)">Chemistry and biology of DNA repair.</a> Angew Chem Int Ed. 42 (26), 2946-2974 (2003).</li>
<li>de la Fuente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme+therapy%3A+Current+challenges+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Enzyme therapy: Current challenges and future perspectives.</a> Int J Mol Sci. 22 (17), 9181(2021).</li>
<li>Robertson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymes+as+a+special+class+of+therapeutic+target%3A+clinical+drugs+and+modes+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Enzymes as a special class of therapeutic target: clinical drugs and modes of action.</a> Curr Opin Struct Biol. 17 (6), 674-679 (2007).</li>
<li>Goddard, J. -P., Reymond, J. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme+assays+for+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Enzyme assays for high-throughput screening.</a> Curr Opin Biotechnol. 15 (4), 314-322 (2004).</li>
<li>Helm, J. S., Hu, Y., Chen, L., Gross, B., Walker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+active-site+inhibitors+of+MurG+using+a+generalizable%2C+high-throughput+glycosyltransferase+screen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Identification of active-site inhibitors of MurG using a generalizable, high-throughput glycosyltransferase screen.</a> J Am Chem Soc. 125 (37), 11168-11169 (2003).</li>
<li>Veldhuyzen, W. F., Nguyen, Q., McMaster, G., Lawrence, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+light-activated+probe+of+intracellular+protein+kinase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">A light-activated probe of intracellular protein kinase activity.</a> J Am Chem Soc. 125 (44), 13358-13359 (2003).</li>
<li>Torres, M., Forman, H. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTorres%2C+M+%22Encyclopedia+of+Respiratory%22">Encyclopedia of Respiratory</a>. Laurent, G. J., Shapiro, S. D. , Academic Press. 10-18 (2006).</li>
<li>Blume-Jensen, P., Hunter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+kinase+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oncogenic kinase signalling.</a> Nature. 411 (6835), 355-365 (2001).</li>
<li>Martin, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+signaling+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cell signaling and cancer.</a> Cancer Cell. 4 (3), 167-174 (2003).</li>
<li>Lothrop, A. P., Torres, M. P., Fuchs, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+post-translational+modification+codes%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Deciphering post-translational modification codes.</a> FEBS Lett. 587 (8), 1247-1257 (2013).</li>
<li>Graves, J. D., Krebs, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+phosphorylation+and+signal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Protein phosphorylation and signal transduction.</a> Pharmacol Ther. 82 (2), 111-121 (1999).</li>
<li>Hafen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinases+and+phosphatases--A+marriage+is+consummated%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Kinases and phosphatases--A marriage is consummated.</a> Science. 280 (5367), 1212-1213 (1998).</li>
<li>Westphal, R. S., Anderson, K. A., Means, A. R., Wadzinski, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+signaling+complex+of+Ca2%2B-calmodulin-dependent+protein+kinase+IV+and+protein+phosphatase+2A%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A signaling complex of Ca2+-calmodulin-dependent protein kinase IV and protein phosphatase 2A.</a> Science. 280 (5367), 1258-1261 (1998).</li>
<li>Barford, D., Das, A. K., Egloff, M. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+mechanism+of+protein+phosphatases%3A+Insights+into+catalysis+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys+Biomol+Struct%22%5BJournal%5D)">The structure and mechanism of protein phosphatases: Insights into catalysis and regulation.</a> Annu Rev Biophys Biomol Struct. 27, 133-164 (1998).</li>
<li>Liu, Q., Qu, J., Zhao, M., Xu, Q., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+SHP2+as+a+promising+strategy+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting SHP2 as a promising strategy for cancer immunotherapy.</a> Pharmacol Res. 152, 104595(2020).</li>
<li>Pan, J., Zhou, L., Zhang, C., Xu, Q., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+protein+phosphatases+for+the+treatment+of+inflammation-related+diseases%3A+From+signaling+to+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Targeted+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeting protein phosphatases for the treatment of inflammation-related diseases: From signaling to therapy.</a> Signal Transduct Targeted Ther. 7 (1), 177(2022).</li>
<li>Denard, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YESS+2.0%2C+a+tunable+platform+for+enzyme+evolution%2C+yields+highly+active+TEV+protease+variants%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">YESS 2.0, a tunable platform for enzyme evolution, yields highly active TEV protease variants.</a> ACS Synth Biol. 10 (1), 63-71 (2021).</li>
<li>Lim, S., Glasgow, J. E., Filsinger Interrante, M., Storm, E. M., Cochran, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+display+of+proteins+on+the+yeast+cell+surface+simplifies+quantification+of+binding+interactions+and+enzymatic+bioconjugation+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Dual display of proteins on the yeast cell surface simplifies quantification of binding interactions and enzymatic bioconjugation reactions.</a> Biotechnol J. 12 (5), (2017).</li>
<li>Yi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+TEV+protease+variants+by+yeast+ER+sequestration+screening+%28YESS%29+of+combinatorial+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Engineering of TEV protease variants by yeast ER sequestration screening (YESS) of combinatorial libraries.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 110 (18), 7229-7234 (2013).</li>
<li>Yi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+endoplasmic+reticulum+sequestration+screening+for+the+engineering+of+proteases+from+libraries+expressed+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Yeast endoplasmic reticulum sequestration screening for the engineering of proteases from libraries expressed in yeast.</a> Methods Mol Biol. 1319, 81-93 (2015).</li>
<li>Semenza, J. C., Hardwick, K. G., Dean, N., Pelham, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERD2%2C+a+yeast+gene+required+for+the+receptor-mediated+retrieval+of+luminal+ER+proteins+from+the+secretory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">ERD2, a yeast gene required for the receptor-mediated retrieval of luminal ER proteins from the secretory pathway.</a> Cell. 61 (7), 1349-1357 (1990).</li>
<li>Mei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+aromatic+residue-controlled+protein+retention+in+the+endoplasmic+reticulum+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Characterization of aromatic residue-controlled protein retention in the endoplasmic reticulum of Saccharomyces cerevisiae.</a> J Biol Chem. 292 (50), 20707-20719 (2017).</li>
<li>Ezagui, J., Russell, B., Mairena, Y., Stern, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+sequestration+empowers+phosphorylation+profiling+on+the+yeast+surface%5BTitle%5D)+AND+%22AIChE+J%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum sequestration empowers phosphorylation profiling on the yeast surface.</a> AIChE J. 68 (12), e17931(2022).</li>
<li>Kawai, S., Murata, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKawai%2C+S+%22Genetic+Transformation+Systems+in+Fungi%22">Genetic Transformation Systems in Fungi</a>. van den Berg, M. A., Maruthachalam, K. 1, Springer International Publishing. 187-192 (2015).</li>
<li>Kawai, S., Hashimoto, W., Murata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+Saccharomyces+cerevisiae+and+other+fungi%3A+methods+and+possible+underlying+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Bioeng+Bugs%22%5BJournal%5D)">Transformation of Saccharomyces cerevisiae and other fungi: methods and possible underlying mechanism.</a> Bioeng Bugs. 1 (6), 395-403 (2010).</li>
<li>Loock, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+transformation+and+expression+of+genomic+libraries+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">High-efficiency transformation and expression of genomic libraries in yeast.</a> Methods Protoc. 6 (5), 89(2023).</li>
<li>Huang, D., Gore, P. R., Shusta, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+yeast+secretion+of+heterologous+proteins+by+regulating+expression+rates+and+post-secretory+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Increasing yeast secretion of heterologous proteins by regulating expression rates and post-secretory loss.</a> Biotechnol Bioeng. 101 (6), 1264-1275 (2008).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+protein+tyrosine+phosphatase+SHP2+for+the+treatment+of+PTPN11-associated+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeting protein tyrosine phosphatase SHP2 for the treatment of PTPN11-associated malignancies.</a> Mol Cancer Ther. 12 (9), 1738-1748 (2013).</li>
<li>Stern, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometry+and+expression+enhance+enrichment+of+functional+yeast-displayed+ligands+via+cell+panning%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Geometry and expression enhance enrichment of functional yeast-displayed ligands via cell panning.</a> Biotechnol Bioeng. 113 (11), 2328-2341 (2016).</li>
<li>Pan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+single-cell+gates+for+yeast+display+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Eng+Design+Sel%22%5BJournal%5D)">Optimized single-cell gates for yeast display screening.</a> Protein Eng Design Sel. 38, gzae018(2025).</li>
<li>Margittai, É, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+H2O2+in+the+endoplasmic+reticulum+promotes+in+vivo+disulfide+bond+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Production of H2O2 in the endoplasmic reticulum promotes in vivo disulfide bond formation.</a> Antioxid Redox Signal. 16 (10), 1088-1099 (2012).</li>
<li>Werner-Washburne, M., Braun, E., Johnston, G. C., Singer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stationary+phase+in+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Stationary phase in the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbiol Rev. 57 (2), 383-401 (1993).</li>
<li>Ezagui, J., Stern, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+phosphorylation+screening+on+the+yeast+surface+by+magnetic+bead+selection+and+FACS%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tyrosine phosphorylation screening on the yeast surface by magnetic bead selection and FACS.</a> Methods Mol Biol. 2681, 275-290 (2023).</li>
<li>Yarnall, M. T. N., Kim, S. H., Korntner, S., Bishop, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Destabilization+of+the+SHP2+and+SHP1+protein+tyrosine+phosphatase+domains+by+a+non-conserved+%E2%80%9Cbackdoor%E2%80%9D+cysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Destabilization of the SHP2 and SHP1 protein tyrosine phosphatase domains by a non-conserved “backdoor” cysteine.</a> Biochem Biophys Rep. 32, 101370(2022).</li>
<li>Dustin, C. M., Heppner, D. E., Lin, M. J., van der Vliet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+regulation+of+tyrosine+kinase+signalling%3A+more+than+meets+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Redox regulation of tyrosine kinase signalling: more than meets the eye.</a> J Biochem. 167 (2), 151-163 (2020).</li>
<li>Stern, L. A., Csizmar, C. M., Woldring, D. R., Wagner, C. R., Hackel, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titratable+avidity+reduction+enhances+affinity+discrimination+in+mammalian+cellular+selections+of+yeast-displayed+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Comb+Sci%22%5BJournal%5D)">Titratable avidity reduction enhances affinity discrimination in mammalian cellular selections of yeast-displayed ligands.</a> ACS Comb Sci. 19 (5), 315-323 (2017).</li>
<li>Waldman, A. C., Rao, B. M., Keung, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+residue+specificities+of+epigenome+enzymes+by+yeast+surface+display%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Mapping the residue specificities of epigenome enzymes by yeast surface display.</a> Cell Chem Biol. 28 (12), 1772-1779.e4 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>בקבוקי מדיה 1 ליטר&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>06-414-1D</td><td></td></tr><tr><td>1.7/2.0 מ"ל מיקרו-צינורות</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10 ומיקרו; L טיפים ל-SureOne Pipet</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-707-438</td><td></td></tr><tr><td>1000 ומיקרו; L SureOne Pipet Tips</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-707-408</td><td></td></tr><tr><td>12 מ"ל פוליסטירן צינורות תחתונים עגולים</td><td>גריינר</td><td>07-000-212</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל קובטות פלאטיות</td><td>BRAND</td><td>759076D</td><td></td></tr><tr><td>300 ומיקרו; L SureOne Pipet Tips</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-707-411</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל פיפטות סרולוגיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>חומצה קזאין (חומצות קסאמינו)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP-1424-500</td><td></td></tr><tr><td>איזון אנליטי&nbsp;</td><td>מטלר טולדו</td><td>30243397</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי בקטריולוגית&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>פלקון 351008</td><td></td></tr><tr><td>ארונות בטיחות ביולוגית</td><td>Labconco</td><td>Logic Class II, סוג A2&nbsp; 302310102</td><td></td></tr><tr><td>ביוספקטרומטר</td><td>Eppendorf</td><td>Kinetic 6136000010</td><td></td></tr><tr><td>בקר סרום אלבומין</td><td>פישר ביו-ריאגנטים</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>חומצת לימון</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A940-500</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX זרימה ציטומטריה מנתח&nbsp;</td><td>בקאם קולטר</td><td>ציטופלקס C09745</td><td>תוכנת CytExpert</td></tr><tr><td>דקסטרוז</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>D16-1</td><td></td></tr><tr><td>דיתיותרייטול</td><td>פישר ביוריאגנטים</td><td>BP172-5</td><td></td></tr><tr><td>חמור נגד עזים FITC</td><td>Invitrogen</td><td>A16000</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>אלפא Aesar</td><td>H56165.30</td><td></td></tr><tr><td>Ez-Link PEG4-NHS-ביוטין</td><td>תרמו מדעי</td><td>A39259</td><td></td></tr><tr><td>ערכת טרנספורמציה II של שמרים קפואים&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>T2001</td><td></td></tr><tr><td>Galactose</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP656-500</td><td></td></tr><tr><td>מקרר לשימוש כללי</td><td>Marvel Scientific</td><td>MS24RAS4RW</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד תג עזים&nbsp;</td><td>Bethyl</td><td>A190-104A</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה Mictrotube&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>5425 R 5406000313</td><td></td></tr><tr><td>מיני חממה מקוררת בטמפרטורה נמוכה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>15-015-2632</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד פוספוטיזין עכבר 4G10</td><td>BioXcell</td><td>BE0194</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Bemis</td><td>M PM999</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח&nbsp;</td><td>ביו-ריאגנטים של פישר</td><td>BP399-500</td><td></td></tr><tr><td>בקר פיפטה&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>easypet 3 4430000018</td><td></td></tr><tr><td>Raffinose</td><td>Thermo Scientific</td><td>J21060-36</td><td></td></tr><tr><td>רקומביננטי אנושי פעיל חלבון SHP-2</td><td>R& D Systems</td><td>1894-SH</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מקוררת&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>5910 R</td><td></td></tr><tr><td>Saccharomyces cerevisiae שמרים משטח תצוגה זן EBY 100</td><td>ATCC</td><td>MYA-4941</td><td></td></tr><tr><td>חממת שייקר</td><td>Eppendorf</td><td>M1335-0002 ניו ברונסוויק Innova 42&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>סט פיפטות חד ערוץ&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>05-403-151</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>פישר מדעי</td><td>S671-500</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ציטראט דיהידראט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S279-500</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי Heptahydrate</td><td>Fisher Scientific</td><td>S373-500</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט מונו-בסיסי מונוהידראט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S468-500</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>S32357</td><td></td></tr><tr><td>איזון טעינה עליונה</td><td>מטלר טולדו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טריס הידרוכלוריד</td><td>EMD Millipore</td><td>648317-100GM</td><td></td></tr><tr><td>מסובב אקדח צינור</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>11-676-341</td><td></td></tr><tr><td>נייר שקילה&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>09-898-12B</td><td></td></tr><tr><td>בסיס חנקן שמרים</td><td>BD Difco</td><td>291940</td><td></td></tr><tr><td>עמודי התפלה של Zeba Spin&nbsp;</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>89883</td><td></td></tr></tbody></table>

שינוי אנזימטי והערכת ציטומטריית זרימה של חלבונים המוצגים על פני השטח של שמרים

Enzymatic Modification and Flow Cytometry Assessment of Yeast Surface Displayed Proteins

ניתוח ציטומטריית זרימה משכפול בודד של מערכת המודל שלנו מודגר במשך שעתיים ללא (איור 1A) ועם (איור 1B) SHP-2 1,000 ננומטר חושף הפרש זרחון חציוני של 63.6%, המוגדר כיחס בין חציון ציר Y (זרחון) מכל האירועים המוצגים על פני השטח פחות אות הזרחן הבסיסי המוגדר כחציון ציר ה-Y של האירועים הלא מוצגים בין הדגימה המטופלת לבקרה הלא מטופלת כמתואר במשוואה מוגדר בפרוטוקול שלב 4.12. לפני ניתוח החציונים, הדגימות היו מגודרות על סמך גודלן (פיזור קדימה) ומורכבותן (פיזור צדדי) כדי להקיף...

Yeast surface display is a genotype-phenotype linkage strategy that empowers high-throughput screening of protein function. Traditionally, yeast surface ...

enzymatic-modification-flow-cytometry-assessment-yeast-surface

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

גישה חזקים כדי לפקח על משלוח של האברונים את לומן חומצי של vacuole את השמרים במשך השפלה ומיחזור מתואר. השיטה מסתמכת על תיוג הספציפי של האברונים היעד עם פלואורסצנטי כפול פליטת מקודדים גנטית pH-biosensor, ויזואליזציה של תאים בודדים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

Assay מיקרוסקופ פלואורסצנטי עבור Mitophagy ניטור השמרים Saccharomyces cerevisiae

כמותי תא חי פלואורסצנטי, מיקרוסקופ ניתוח של שמרים ביקוע

שתי שיטות משלימות המבוססות על הזרימה cytometry ומיקרוסקופיה מוצגות המאפשרות כימות, ברמת התא הבודד, של הדינמיקה של ביטוי גנים הנגרמת על ידי ההפעלה של מסלול MAPK בשמרים.

כימות זמניות של ביטוי MAPK מושרה בתאי שמרים יחיד

מאמר זה מתאר בדיקה מבוססת גידול שמרים לקביעת הדרישות הגנטיות לפירוק חלבונים. הוא גם מדגים שיטה למיצוי מהיר של חלבוני שמרים, המתאימה לכתמים מערביים כדי לאשר ביוכימית את דרישות הפירוק. ניתן להתאים טכניקות אלה לניטור פירוק של מגוון חלבונים.

קביעה מבוססת צמיחה ואישור ביוכימית של דרישות גנטיות לפירוק חלבונים ב<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

כימות מדויק של אירועי סחר בשלפוחית מספק לעתים קרובות תובנות מפתח לגבי תפקידים של חלבונים ספציפיים והשפעות של מוטציות. מאמר זה מציג שיטות לשימוש ב-pHluorin סופר-אקליפטי, וריאנט GFP רגיש ל-pH, ככלי לכימות אירועים אנדוציטיים בתאים חיים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי כמותי וציטומטריית זרימה.

יישומים של pHluorin עבור כמותי, קינטי וניתוח תפוקה גבוהה של אנדוציטוזה שמרים הנצה

מאמר זה מתאר זרימה מבוססת-סריג cy, מבוסס הפרוטוקול כדי לכמת הרכבה עצמית חלבון בשני S. cerevisiae ס ו HEK293T תאים.

גילוי ואפיון הרכבה עצמית של חלבון בVivo על-ידי הזרמת הקיטומטל

שמרי ביקוע משמשים כאן כפונדקאי הטרולוגי לביטוי חלבוני שלד ציטו-שלד חיידקיים כגון FtsZ ו-MreB כחלבוני היתוך תרגומיים עם GFP כדי להמחיש את הפילמור שלהם. כמו כן, תרכובות המשפיעות על פילמור מזוהות על ידי הדמיה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

שמרי ביקוע כפלטפורמה למסכי תרופות אנטיבקטריאליים המכוונים לחלבוני שלד ציטו-בקטריאלי

פרוטוקול זה מתאר את השלבים החיוניים לביצוע קמפיינים לבחירת פני השטח של שמרים להעשרת וריאנטים חלבוניים הנקשרים לאנטיגן מעניין.

הנדסת חלבונים על ידי תצוגת פני שטח שמרים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות הישרדות לאחר לחץ בדגימות שמרים. הבדיקה משתמשת בשני צבעים פלואורסצנטיים, SYTO 9 ופרופידיום יודיד (PI), כדי לכמת את שלמות קרום הפלזמה. הוא משתמש בזרימה ציטומטרית כדי לספק הערכות כמותיות וניתנות לשחזור של חלקי התאים החיים, המתים והפגומים עבור דגימות פוסט-מתח חמצוני.

בדיקת LIVE/DEAD אופטימלית בשילוב עם ציטומטריית זרימה לכימות הישרדות לאחר מתח בתאי שמרים

במאמר זה, אנו מתארים את שיטת ניצול רב רפאים זרימת cytometry הדמיה לכמת את ההפנמה של חלקיקים polyanhydride או חיידקים של 264.7 תאים הגלם.

ניתוח הפנמה נייד של חלקיקים וחיידקים על ידי Cytometry Multi-Flow דימות ספקטרלי

למדו שינוי אנזימטי והערכת ציטומטריית זרימה של חלבונים המוצגים על פני השטח של שמרים. שיטה זו מאפשרת מיפוי קינטי של שינויים אנזימטיים בקלות רבה יותר.

שינוי אנזימטי והערכת ציטומטריית זרימה של חלבונים המוצגים על פני השטח של שמרים

גלה סרטונים נוספים