Name: התמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים של עכברים על ידי הזרקה תת-עכבישית של AAV2 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: למדו שיטת הזרקה תת-עכבישית של AAV2 לעכברים לשם תמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים. השיטה מאפשרת ביטוי סלקטיבי בנוירונים פירמידליים בשכבה חמש ומשמרת את רקמת המוח להקלטות עתידיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ומיקרו; מזרק אטום לגז L דגם 1701 RN (5 uL 75 RN המילטון מיקרו-מזרק)</td><td>חברת המילטון</td><td>חלק / REF # 7634-01, המילטון או חתול מס. HAM7634-01, מרק</td><td></td></tr><tr><td>מחט RN 33 G, סגנון נקודה 3</td><td>חברת המילטון</td><td>חלק / REF # 7803-05, המילטון</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דו-עיני</td><td>ניקון או מיקרומד</td><td>דגם MC-4 ZOOM</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי לסריקת לייזר מבוסס Cerna</td><td>מעבדות תור</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקור אור קר</td><td>RWD</td><td>דגם 76312</td><td></td></tr><tr><td>Leica VT1000 S מיקרוטום להב רוטט</td><td>לייקה ביוסיסטמס</td><td>76001-014</td><td></td></tr><tr><td>מערכת הרדמה בזרימה נמוכה עם ערכת התחלה</td><td>קנט סיינטיפיק קורפוריישן</td><td>13-005-111 (דגם SomnoSuite)</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה מכנית 0.1 &ndash; 2.5 ומיקרו; ל אפנדורף מחקר פלוס</td><td>אפנדורף</td><td>3123000012</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה מכנית 10 &ndash; 100 ומיקרו; ל אפנדורף מחקר פלוס</td><td>אפנדורף</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח עכברים</td><td>RWD</td><td>דגם CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מקדחה עם מקדחים (0.5 מ"מ, עגול)</td><td>RWD</td><td>78001, 78040</td><td></td></tr><tr><td>או מכשיר סטריאוטקסי דיגיטלי Desctop, מסכת הרדמה לעכבר, מוטות אוזניים לעכבר (60 מעלות)</td><td>RWD</td><td>דגמים 68027, 68665, 68306</td><td></td></tr><tr><td>מדחס אוויר</td><td>במבי</td><td>ב8</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה ידנית חד ערוץ 0.5-10 ומיקרו; L</td><td>ריין</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקסי לבעלי חיים קטנים</td><td>קופף</td><td>דגם 962</td><td></td></tr><tr><td>מזרק סטריאוטקסי</td><td>סטולטינג</td><td>10-000-004</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מכשירים כירורגיים (כלים)</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחט דנטלית 30 גרם (Ni-pro)</td><td>ביודנט בע"מ</td><td></td><td>לחתוך את הדורה</td></tr><tr><td>מגרד עצמות</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>10075-16</td><td></td></tr><tr><td>צבת עצם</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>16025-14</td><td>להסרת עצם הגולגולת</td></tr><tr><td>מרית מעוקלת</td><td>מפעל ציוד רפואי Mozhaisk</td><td></td><td>להוציא את המוח מהקמרון הגולגולתי</td></tr><tr><td>בור שיניים</td><td>דרנדל + צוויילינג</td><td></td><td>לקרניוטומיה; צורה: גליל בצורת אגס/קצה עגול/עגול; קוטר קצה: קוטר 0.55-0.8 מ"מ</td></tr><tr><td>מחזיק מחט (מחזיק מחט מיקרו Halsey)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>תפר כירורגי מפוליפרופילן או תפר כירורגי ויקריל (5-0, נספג)</td><td>מוצרי וולטר (אתיקון)</td><td>S139044 (W9442)</td><td></td></tr><tr><td>ידית אזמל (# 3) עם להבי אזמל (#11)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>10003-12, 10011-00</td><td></td></tr><tr><td>מספריים (מספריים צרים במיוחד)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>14088-10</td><td>לחתוך את העור</td></tr><tr><td>מספריים (מספריים עדינים)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>14094-11</td><td>לחיתוך תפרים</td></tr><tr><td>תפר כירורגי פרולן (פוליפרופטלן)</td><td>Ethicon (ג'ונסון & ג'ונסון)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פינצטה (מלקחיים #5)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה (מלקחיים מלוטשים של Inox)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td><חזק>חד פעמי</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין 1 מ"ל</td><td>SITEKMED</td><td></td><td>להעמיס שמן וזלין למיקרו-מזרק, לתת תרופות</td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים</td><td>SPL מדעי החיים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צמר גפן</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>משקפי כיסוי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-545E</td><td></td></tr><tr><td>מחט מזרק אינסולין (27 גרם)</td><td>SITEKMED</td><td></td><td>להסרת דברים מחור (קרניוטומיה)</td></tr><tr><td>מגבונים ללא מוך CLEANWIPER</td><td>נטלינק</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>מגבות נייר</td><td>לוסקאן</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרפילם</td><td>סטאטלאב</td><td>STLPM996</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות סטריליות</td><td>דרמגריפ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מסנן מזרק סטרילי (0.2 &mu; m)</td><td>קורנינג</td><td>431229</td><td></td></tr><tr><td><חזק>תרופות/כימיקלים (ריאגנטים)</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% פורמלין חומצי או 4% פרפורמלדהיד</td><td>כימיקלים תרמו סיינטיפיק</td><td>J61899. א.ק.</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אלכוהול של יוד (5%))</td><td>חידוש</td><td></td><td></td></tr><tr><td>משחה אנטיביוטית Baneocin (בציטראצין + ניאומיצין)</td><td>סנדוז.</td><td></td><td>חומר אנטיבקטריאלי לשימוש חיצוני</td></tr><tr><td>אקווה פולימאונט</td><td>מדעים רב-לאומיים</td><td>18606-20</td><td></td></tr><tr><td>ג'ל עיניים Carbomer Vidisic (ג'ל עיניים)</td><td>באוש+לומב (סנטן)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוספירות FluoSphere שעברו שינוי קרבוקסילט (אדום)</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>פ-8801</td><td></td></tr><tr><td>דקסמתזון (4 מ"ג/מ"ל)</td><td>אלרה (KRKA)</td><td></td><td>גלוקוקורטיקואיד סינטטי</td></tr><tr><td>מזוקק H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אתנול (70%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פלקסופרופן 2.5% (קטופרופן)</td><td>ויק</td><td></td><td>תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs)</td></tr><tr><td>תמיסת גלוקוז 5%</td><td>סולופארם</td><td></td><td></td></tr><tr><td>עיזים נגד ארנב IgG (H+L) נספג צולב, Alexa Fluor 546</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>א-11010</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>קריזו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תמיסת לידוקאין (2% / 4%)</td><td>סולופארם</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל (NGS)</td><td>אבקם</td><td>אילן אלכסנדר</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח חומציים פוספט (PBS)</td><td>אקו-סרוויס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נוגדן ארנב נגד פרוואלבומין</td><td>מרק מיליפור</td><td>AB15736</td><td></td></tr><tr><td>ארנב רקומביננטי מונוקלינלי נוגדן נגד קלבינדין</td><td>אבקם</td><td>ab108404</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח (0.9% NaCl ב-H2O)</td><td>סולופארם</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>50-178-1844</td><td></td></tr><tr><td>שמן וזלין</td><td>ג'נל</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

התמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים של עכברים על ידי הזרקה תת-עכבישית של aav2

Widespread Transduction of Mouse Neocortical Neurons by Subarachnoid Injection of AAV2

בסדרת ניסויים פיילוט, השתמשנו בשיטת ההזרקה התוך-קורטיקלית המסורתית כדי להמיר נוירונים פירמידליים בשכבה חמש בניאו-קורטקס העכבר על ידי AAV2 הנושא את הגן המהיר channelrhodopsin (oChIEF) שהתמזג עם חלבון פלואורסצנטי EGFP תחת מקדם CaMKII. בהתאם למאפיין האופייני של AAV212, קיבלנו אזור זיהום קטן יחסית, שרוחבו אינו עולה על 1 מ"מ (איור 1A). אולם בחלק מהניסויים ראינו התפשטות גדולה באופן יוצא דופן של AAV2, בחלק מהמקרים מכסה את הניאו-קורטקס של יותר ממחצית מחצי הכדור של המ...

התמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים של עכברים על ידי הזרקה תת-עכבישית של AAV2

Recombinant adeno-associated viruses are a flexible and powerful tool for the delivery and expression of various genes of interest in many areas of ...

widespread-transduction-mouse-neocortical-neurons-subarachnoid

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן אנו מציגים את הזריקה תוך גולגולתי של וקטורים AAV תיוג הניאון של גליה נוירונים בקליפת המוח הראייתית.

הזרקה תוך גולגולתי של Adeno הקשורים וקטורים ויראליים

מקור: Li, D., et al. הזרקה תוך-תקלית ישירה של נגיפים רקומביננטיים הקשורים לאדנו בעכברים בוגרים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את הליך ההזרקה התוך-תקלית של נגיפים הקשורים לאדנו (AAV) לנוזל המוח (CSF) של עכבר ער, המכסה הכנת מזרק, יישור עמוד השדרה והחדרת מחט מדויקת. שיטה זו מאמתת העברת גנים ממוקדת, ותומכת בפוטנציאל שלה לטיפולים במערכת העצבים המרכזית.

העברה תוך-תקלית של וירוסים במודל עכבר לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית

וקטורים ויראליים לאפשר למניפולצית גן ממוקדת. אנחנו מדגימים את שיטה לביטוי גנים מותנים או אבלציה בחוט שדרת העכבר, באמצעות הזרקת stereotaxic של וקטור ויראלי לקרן האחורית, אתר בולט של קשר הסינפטי בין afferents החושיים הראשוניים ועצב של מערכת העצבים המרכזית.

הזרקת Stereotaxic של וקטור ויראלי למניפולציה גנטית מותנית בחוט השדרה המאוס

ב-15 השנים האחרונות, וקטורים שמקורם באדנווירוס כלבים מסוג 2 (CAV2) הוכיחו את יעילותם בהתמרת תאים במבחנה וב-vivo ונמצאים בשימוש נרחב לחיסון וריפוי גנטי. כאן, אנו מתארים הליך לבנייה, ייצור וטיהור של וקטורי CAV2, מה שמוליד תרחיפים נגיפיים בעלי טיטר גבוה.

ייצור וטיהור של וקטורים שמקורם באדנווירוס כלבים מסוג 2 שאינם משוכפלים

כאן אנו מדגימים טכניקה להתמרה עצבית נרחבת על ידי הזרקה תוך-חדרית של נגיף הקשור לאדנו למוח העכבר היילוד.  שיטה זו מספקת דרך מהירה וקלה להשיג ביטוי לכל החיים של טרנסגנים המועברים באופן ויראלי.

הזרקת נגיפי Intracerebroventricular של ילודים עכבר המוח לתמרה עצבית מתמשכת ונרחבת

סרטון זה מציג את הליך הגולגולת המאפשר הדמיה כרונית של נוירונים בקליפת המוח הרטרו-טחולית של העכבר באמצעות מיקרוסקופ פוטונים שני פוטונים in vivo בקו טרנסגני Thy1-GFP. גישה זו משולבת עם הזרקת נגיף הקשור לאדנו המבטא mCherry לתוך ההיפוקמפוס הגבי. טכניקות אלו מאפשרות ניטור ארוך טווח של פלסטיות מבנית תלוית ניסיון ב-RSC.

שני פוטונים סימולטני<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של תשומות Synaptic ויעדי Postsynaptic בקליפת עכבר Retrosplenial

מטרת המחקר הנוכחי הייתה לפתח ולאמת את העוצמה והבטיחות של נגיף השד הקשור ל- Adeno-9 (AAV9), באמצעות שימוש בטכניקה חדשה של מתן גנים תת-גנטי בעכברים בוגרים.

Subnial Adeno הקשורים וירוסים 9 (AAV9) וקטור משלוח ב עכברים למבוגרים

תוך הזרקה של recombinase תלויה רקומביננטי adeno-הקשורים וירוס (rAAV) ניתן להשתמש כדי לטפל בכל סוג התא גנטית שכותרתה בחוט השדרה. כאן נתאר כיצד מגלי נוירונים ב הצופר הגבי של חוט השדרה המותני. טכניקה זו מאפשרת פונקציונלי חקירתו של המשנה נוירון מניפולציה.

הביטוי Adeno-הקשורים Transgene וירוס בתיווך בנוירונים מבחינה גנטית מוגדרים של חוט השדרה

כאן אנו מציגים טכניקה הזרקה ישירה במחלה באמצעות הידרוכלוריד לידוקאין 1% פתרון ויראלי להבטיח משלוח וירוס יעיל adeno-הקשורים לבעלי חיים קטנים ולהקים מערכת הניקוד לחזות התמרה חושית יעילות המרכזי מערכת העצבים על פי מידת חולשה חולפת הנגרמת על ידי לידוקאין.

במחלה ישירה הזרקה של וירוסים Adeno-הקשורים רקומביננטי בעכברים מבוגרים

פרוטוקול זה מדגים שיטה חדשנית ליישום טיפולים גנטיים על תת-אוכלוסיות של תאים בחולדות ילודים בגילאים שלאחר הלידה 5-10 ימים על ידי הזרקת משנה כימוגנטית אנטרוגרדית לקליפת המוח הסומטומוטורית ורקומבינאז Cre הניתן להובלה רטרוגרדית לחוט השדרה הצווארי.

התמקדות במערכת הקורטיקוספינלית בחולדות ילודים עם וקטור דו-ויראלי באמצעות ניתוח משולב של המוח ועמוד השדרה

פרוטוקול זה מתאר את הביטוי החוץ רחמי בתיווך ויראלי של Neurod1 לאחר שבץ איסכמי קליפת המוח. Neurod1 מועבר (1) באמצעות מערכת Cre-Flex AAV בעכברים מסוג בר במהלך השלב התת-חריף לאחר שבץ מוחי (7 ימים) ו-(2) באמצעות וקטור AAV יחיד בעכברים מדווחים מותנים במהלך השלב הכרוני שלאחר השבץ (21 ימים).

מערכות AAV ומודלים של עכברים לחקירת ביטוי חוץ רחמי של Neurod1 בתאים שעברו התמרה בזמנים תת-חריפים וכרוניים לאחר שבץ איסכמי

למדו שיטת הזרקה תת-עכבישית של AAV2 לעכברים לשם תמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים. השיטה מאפשרת ביטוי סלקטיבי בנוירונים פירמידליים בשכבה חמש ומשמרת את רקמת המוח להקלטות עתידיות.

התמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים של עכברים על ידי הזרקה תת-עכבישית של AAV2

גלה סרטונים נוספים