מבחן העדפת ריח למדידת הטיות הדוניות של חוש הריח במודלים של דיכאון בעכברים

הטיה שלילית בעיבוד רגשי היא מאפיין עיקרי של הפרעות דיכאון. הטיה זו מעניינת במיוחד כדי להבין טוב יותר את הפיזיופתולוגיה של המחלה. כאן אנו מציעים פרוטוקול להערכה מהימנה של הערכת ריח מולדת באמצעות ריחות הקשורים לערכיות שונה במודלים של דיכאון עכברים זכרים ונקבות כאחד.

הערכת הטיה נהנתנית במודלים של עכברים היא חיונית, הן כדי להעריך טוב יותר את הפנוטיפ דמוי הדיכאון המושרה, והן ככלי לחקירת מנגנונים עצביים מאחורי שינויים אלה בהקצאת ערכיות. בסך הכל, פרוטוקול זה מספק דרכים חדשות למחקר תרגומי להבנת המנגנון העומד בבסיס דיכאון ויעילות הטיפול. בעתיד ננסה לפענח את המעגלים המוחיים שמאחורי העיבוד הרגשי המשובש והמנגנונים הפוטנציאליים הספציפיים למין, יחד עם פעולתן של תרופות נוגדות דיכאון על המסלולים הללו.

כדי להתחיל, הכינו את מערך הניסוי באמצעות זירה דו-תאית בגודל 45 ס"מ על 50 ס"מ על 25 ס"מ עם קירות פרספקס אפורים ורצפה לבנה. חלקו את הזירה לשני תאים שווים של 25 ס"מ על 45 סנטימטרים, בעזרת קיר פרספקס אפור בגודל 37 ס"מ על 25 סנטימטרים. אבטח את צלחת הפטרי המחוררת עם דבק והנח אותם בתחתית הקיר בכל תא.

לאחר מכן השתמש בדבק דו צדדי או Blu Tack כדי לקבע כל צלחת פטרי אנכית על קיר הזירה. לאחר מכן, מקמו מצלמה שני מטרים מעל הזירה כדי לתעד את התנהגות בעלי החיים ולאפשר מעקב אוטומטי אחר תנועותיהם לאורך הניסוי. כעת חלקו את העכברים לשתי קבוצות ניסוי לפחות, עכברי הביקורת ועכברי קבוצת הניסוי.

העבירו כל עכבר לחדר הבדיקות ההתנהגותיות 30 דקות לפני תחילת הניסוי. בעזרת מד לוקס, הגדר את התאורה בזירה לכ-40 לוקס וודא שהתאורה מפוזרת באופן שווה. לאחר מכן, הוסיפו נייר סינון נקי בגודל 42.5 מילימטרים לכל אחת משתי צלחות הפטרי בזירה.

ביום הראשון, הניחו בעדינות את כל העכברים מאותו כלוב דיור יחד לזירה למשך 10 דקות כדי להפחית את הניאופוביה. ביום הבדיקה הכינו בבקבוקון זכוכית את הריח מתחת למכסה המנוע הכימי, תוך שימוש בדילול הנכון. מדללים את הריח בשמן מינרלי או במים מזוקקים בהתאם לתכונותיו הכימיות.

רגע לפני בדיקת כל עכבר, השתמש במיקרו פיפטה עם קצה מסנן כדי לאסוף 200 מיקרוליטר מתמיסת הריח מתחת למכסה המנוע. הוצא את התמיסה על נייר הסינון באחת מצלחות הפטרי. השאירו את נייר הסינון השני בצלחת הפטרי השנייה ללא טיפול.

העבירו את צלחות הפטרי לחדר הבדיקות. לאחר מכן קבע אותם אנכית על קיר הזירה. הנח כל עכבר בנפרד בזירה במרכז בין שני התאים.

הקלט את ההתנהגות למשך 10 דקות באמצעות המצלמה העילית. הוציאו את העכבר מהזירה לאחר תום תקופת התצפית. הסר את צלחת פטרי הריח מהזירה.

לאחר מכן נקו את הזירה באמצעות תמיסת חיטוי אתנול 70% וייבשו אותה היטב. השלך את נייר הסינון המשומש והכן את דגימת הריח הבאה לעכבר הבא. השתמש בתוכנת מעקב אוטומטית כדי לתעד את מיקום העכבר לאורך כל הבדיקה.

הגדר אזורים מובחנים בתוך הזירה לניתוח. במהלך ההתרגלות, כל העכברים בילו לפחות 50 שניות הן באזורי הריח והן באזורי הבקרה, מה שמעיד על מעורבות מספקת במשימה. חשוב לציין, עכברים שנחשפו ל-UCMS בילו את אותו זמן באזור הריח מאשר קבוצת הביקורת.

אם כי ניתן היה להבחין בהבדל מסוים באזורים אחרים. עכברי ביקורת נעו באופן משמעותי יותר מנקבות UCMS כאשר נחשפו לשתן זכרי, אך לא במהלך התרגלות או חשיפה ל-TMT. כל הקריאות של התגובה ההדונית מראות הבדלים משמעותיים או נטייה סטטיסטית בין נקבות הביקורת לנקבות UCMS.

השפעה זו נראית גם באמצעות מדד חקר הריח העולמי, שהוא מדד משולב של תגובה נהנתנית ותנועתית. מדד חקר הריח נמצא בקורלציה חיובית עם ציון הרגשיות הן עבור שתן זכר והן עבור TMT בעכברים נקבות. בעכברים זכרים, לא נצפו הבדלים במהלך ההתרגלות או במרחק הכולל שהועבר דרך המבחן.

הזמן שהושקע באזור הריח מראה ירידה משמעותית בשתן הנשי ובחקר TMT ב-UCMS בהשוואה לביקורת. עכברי UCMS נכנסים פחות באופן משמעותי לאזור הריח, או נוטים לעשות זאת, ומציגים מדד העדפה מופחת משמעותית הן לשתן נשי והן ל-TMT. מדד חקר הריח מראה שינוי שלילי בתגובה התנהגותית לשתן נקבה ו-TMT של עכברי UCMS בהשוואה לביקורת, אשר נוטים להיות בקורלציה חיובית עם ציון הרגשיות של החיה.