איסוף נוזלי שטיפת אף של עכברים ללא זיהום דם

המחקר שלנו מתמקד בפיתוח שיטה לאיסוף נוזל שטיפת אף מעכברים בכמויות גדולות, תוך התמודדות עם שני אתגרים עיקריים: השגת יבול גבוה ומניעת זיהום דם.

ישנן שתי גישות לאיסוף נוזל שטיפת האף: מסלול הלוע, המניב נפחים גדולים יותר, ומסלול קנה הנשימה, המפחית את זיהום הדם.

השיטה שלנו מאפשרת איסוף נפח גדול של נוזל שטיפת אף מהלוע, בעוד שהנחת כדורי צמר גפן בפיו של המכרסם מסייעת למזער את זיהום הדם. הגישה היא פשוטה וחסכונית כאחד.

כדי לזהות זיהום דם בדגימה, אנו משתמשים בשיטה הפורנזית, המכונה תגובת לומינול. תגובת הלומינול היא פשוטה ורגישה יותר משיטות אחרות.

ריכוז ה-IgG בדם גבוה בהרבה מזה שבנוזל שטיפת האף. השיטה שלנו, המונעת זיהום דם, חיונית במחקר אימונולוגי. הוא מתאים גם לניתוח מולקולות אחרות, כמו המיקרוביום, שבהן זיהום דם יכול לפגוע בדיוק.

[קריין] כדי להתחיל, הניחו את העכבר שהורדם על גבו על צלחת כירורגית, וקבעו את כל ארבע הגפיים באמצעות סיכות. בעזרת מזרק של מיליליטר אחד, אספו דם מהלב. בעזרת מספריים, פתח את חלל הבטן כדי לחשוף את האיברים הקרביים והסרעפת. חתכו את הסרעפת והצלעות כדי לחשוף את הפרוזדור הימני. לאחר מכן, נקב את הפרוזדור הימני במספריים כדי לנקז את הדם שנותר. הניחו שלושה כדורי צמר גפן לתוך פיה של החיה תוך כדי משיכת הלשון קדימה. לאחר מכן, הרם את הראש למצב אף כלפי מעלה, והשתמש במספריים כדי להפריד את הלסת התחתונה כדי למנוע זיהום דם בנוזל שטיפת האף. החלף את כדורי הצמר גפן בכדורים טריים כדי למנוע זיהום דם. לאחר הפסקת הדימום, יש להזריק 200 מיקרוליטר של PBS סטרילי לתוך הצ'ואנה ולאסוף את נוזל שטיפת האף שנפלט מהנחיריים לתוך צינור של 1.5 מיליליטר. כדי להכין את תמיסת המלאי לזיהוי כימילומינסנציה, ממיסים מיליגרם אחד של לומינול וחמישה מיליגרם של נתרן מי חמצן במיליליטר אחד של מים סטריליים בתוך צינור של 1.5 מיליליטר. מכסים את הצינור בנייר אלומיניום, ושומרים אותו בארבע מעלות צלזיוס עד לשימוש. לאחר מכן, הכינו פיתרון עבודה על ידי דילול תמיסת המלאי פי עשרה במים נטולי יונים. פיפטה שני מיקרוליטרים של דגימת נוזל שטיפת האף לבארות של צלחת של 96 בארות. הוסף 100 מיקרוליטר מתמיסת הלומינול המדוללת לכל באר, ונער לזמן קצר את צלחת 96 הבארות כדי לערבב את התוכן. התבונן ישירות בתגובת הכימילומינסנציה בחושך. איור זה מציג השוואה של ריכוזי אימונוגלובולין A על פני סוגי דגימות שונים. בנוזל שטיפת האף, ריכוז האימונוגלובולין A נמוך יותר בדגימות שנאספו בשיטה החדשנית בהשוואה לשיטה הקונבנציונלית, בעוד שדגימות נוזל שטיפת הסימפונות והסימפונות אינן מראות הבדלים מהותיים בין שתי השיטות. נתונים אלה מצביעים על כך שהשיטה החדשה מפחיתה את הזיהום בדגימות האף, מה שמוביל למדידות מדויקות יותר של אימונוגלובולין A. דפוס דומה נצפה עבור אימונוגלובולין G, עם ריכוזים נמוכים משמעותית בנוזל שטיפת האף שנאסף בשיטה החדשנית בהשוואה לשיטה הקונבנציונלית. לעומת זאת, דגימות נוזל שטיפת סימפונות וסרום שוב אינן מראות הבדלים משמעותיים בין שתי השיטות, מה שמצביע על כך שהגישה החדשה מפחיתה באופן עקבי את הזיהום בדגימות האף ומשפרת את האמינות של מדידות אימונוגלובולין G.