Name: חידוד של OnePot PURE וייצור ריבוזום גולמי לסינתזה של חלבון ללא תאים הניתנת לשחזור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-22T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: למדו את פרוטוקול OnePOT PURE המשופר לסינתזת חלבון ללא תאים עם ריבוזומים גולמיים. שיטה זו מייצרת תוצאות עקביות יותר ומפחיתה שונות בין אצוות למחקר בביולוגיה סינתטית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Laohakunakorn, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bottom-up+construction+of+complex+biomolecular+systems+with+cell-free+synthetic+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Bottom-up construction of complex biomolecular systems with cell-free synthetic biology.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8 (213), 1-26 (2020).</li>
<li>Silverman, A. D., Karim, A. S., Jewett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+gene+expression%3A+an+expanded+repertoire+of+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cell-free gene expression: an expanded repertoire of applications.</a> Nat Rev Genet. 21 (3), 151-170 (2019).</li>
<li>Shimizu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+translation+reconstituted+with+purified+components%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cell-free translation reconstituted with purified components.</a> Nat Biotechnol. 19 (8), 751-755 (2001).</li>
<li>Shimizu, Y., Ueda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pure+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Pure technology.</a> Methods Mol Biol. 607, 11-21 (2010).</li>
<li>Wang, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+in+vivo+His-tagging+of+enzyme+pathways+for+in+vitro+single-pot+multienzyme+catalysis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed in vivo His-tagging of enzyme pathways for in vitro single-pot multienzyme catalysis.</a> ACS Synth Biol. 1 (2), 43-52 (2012).</li>
<li>Shepherd, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+and+synthesis+of+a+30-cistron+translation-factor+module%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">De novo design and synthesis of a 30-cistron translation-factor module.</a> Nucleic Acids Res. 45 (18), 10895-10905 (2017).</li>
<li>Villarreal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+microbial+consortia+enable+rapid+assembly+of+pure+translation+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Synthetic microbial consortia enable rapid assembly of pure translation machinery.</a> Nat Chem Biol. 14 (1), 29-35 (2018).</li>
<li>Lavickova, B., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+robust%2C+and+low-cost+method+to+produce+the+PURE+cell-free+system%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple, robust, and low-cost method to produce the PURE cell-free system.</a> ACS Synth Biol. 8 (2), 455-462 (2019).</li>
<li>Grasemann, L., Lavickova, B., Elizondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OnePot+PURE+cell-free+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">OnePot PURE cell-free system.</a> J Vis Exp. (172), e62625(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+protein+expression+in+the+One-Pot+PURE+system%3A+insights+into+reaction+composition+and+translation+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimizing protein expression in the One-Pot PURE system: insights into reaction composition and translation efficiency.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1496-1508 (2025).</li>
<li>Yadav, S., Perkins, A. J. P., Liyanagedera, S. B. W., Bougas, A., Laohakunakorn, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+regeneration+from+pyruvate+in+the+PURE+system%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">ATP regeneration from pyruvate in the PURE system.</a> ACS Synth Biol. 14 (1), 247-256 (2025).</li>
<li>Doerr, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+cell-free+RNA+and+protein+synthesis+with+minimal+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Biol%22%5BJournal%5D)">Modelling cell-free RNA and protein synthesis with minimal systems.</a> Phys Biol. 16 (2), 025001(2019).</li>
<li>Christodoulou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heteronuclear+NMR+investigations+of+dynamic+regions+of+intact+Escherichia+coli+ribosomes%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Heteronuclear NMR investigations of dynamic regions of intact Escherichia coli ribosomes.</a> PNAS. 101 (30), 10949-10954 (2004).</li>
<li>Garenne, D., Thompson, S., Brisson, A., Khakimzhan, A., Noireaux, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+all-E+coli+TXTL+toolbox+3.0%3A+new+capabilities+of+a+cell-free+synthetic+biology+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">The all-E coli TXTL toolbox 3.0: new capabilities of a cell-free synthetic biology platform.</a> Synth Biol. 6 (1), 1-8 (2021).</li>
<li>Romantseva, E., Alperovich, N., Ross, D., Lund, S. P., Strychalski, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+DNA+template+preparation+on+variability+in+cell-free+protein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of DNA template preparation on variability in cell-free protein production.</a> Synth Biol. 7 (1), 1-17 (2022).</li>
<li>Thornton, E. L., Boyle, J. T., Laohakunakorn, N., Regan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis+as+a+method+to+rapidly+screen+machine+learning-generated+protease+variants%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis as a method to rapidly screen machine learning-generated protease variants.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1710-1718 (2025).</li>
<li>Laohakunakorn, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLaohakunakorn%2C+N+%22Cell-free+3PGA+energy+solution%22">Cell-free 3PGA energy solution</a>. , Protocols.io. (2020).</li>
<li>Kalpaxis, D. L., Theocharis, D. A., Coutsogeorgopoulos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+studies+on+ribosomal+peptidyltransferase%3A+the+behaviour+of+the+inhibitor+blasticidin+S%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic studies on ribosomal peptidyltransferase: the behaviour of the inhibitor blasticidin S.</a> Eur J Biochem. 154 (2), 267-271 (1986).</li>
<li>Blaha, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+functional+ribosomal+complexes+and+effect+of+buffer+conditions+on+tRNA+positions+observed+by+cryoelectron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of functional ribosomal complexes and effect of buffer conditions on tRNA positions observed by cryoelectron microscopy.</a> Methods Enzymol. 317, 292-309 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2x יוטיוב</td><td>סיגמא</td><td>Y2377-250G</td><td></td></tr><tr><td>חומצות אמינו</td><td>סיגמא</td><td>LAA21-1KT</td><td></td></tr><tr><td>אצטט אמוניום חופשי מ-RNAse</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>AM9070G</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד אמוניום</td><td>סיגמא</td><td>09718-1KG</td><td></td></tr><tr><td>אמפיצילין</td><td>סיגמא</td><td>A8351-5G</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3) מיומן באי-קולי</td><td>NEB</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק, צנטריפוגה (Nalgene)</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>3120-9500</td><td>בקבוק קו-פולימר פוליפרופילן</td></tr><tr><td>בקבוק, זכוכית (דוראן) 250 מ"ל, 500 מ"ל, 1 ליטר, 2 ליטר</td><td>VWR</td><td>215-1593, 215-1594, 215-1595, 215-1596</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת ברדפורד, Quick Start 1x ריאגנט צבע</td><td>ביו-ראד</td><td>5000205</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>הראוס מגאפוג' 16R</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה, מיקרו</td><td>אפנדורף</td><td>5424R&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>עמודת הכרומטוגרפיה</td><td>ביו-ראד</td><td>7321010</td><td></td></tr><tr><td>קריאטין פוספט</td><td>סיגמא</td><td>27920</td><td></td></tr><tr><td>קובטים, חצי מיקרו 1.6 מ"ל</td><td>פישרברנד</td><td>FB55147</td><td></td></tr><tr><td>די-נתרן מימן אורתופוספט דיהידרט</td><td>פישר כימיקל</td><td>S/4450/60</td><td></td></tr><tr><td>קלטת דיאליזה, Slide-A-Lyzer G3, 2 kDa MWCO, 15 מ"ל</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>A52962</td><td></td></tr><tr><td>אורתופוספט די-אשלגן מימן אנהידרוס</td><td>פישר כימיקל</td><td>P/5240/60</td><td></td></tr><tr><td>DTT ללא שקילה</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>A39255</td><td></td></tr><tr><td>יחידת סינון, צנטריפוגלי 3kDa MWCO Amicon Ultra 15</td><td>EMD מיליפור</td><td>UFC900324</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק, 500 מ"ל</td><td>VWR</td><td>214-1133</td><td></td></tr><tr><td>פלאסק, מבולבל 2.5 ליטר;</td><td>טונייר</td><td>SS-5013</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פולינית</td><td>סיגמא</td><td>F7878-100MG</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>סיגמא</td><td>G5516-1L</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>פישרברנד</td><td>H/1200/PB17</td><td></td></tr><tr><td>בופר HEPES, תמיסת 1 M pH 7.3</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>BP299</td><td></td></tr><tr><td>אימידאזול</td><td>סיגמא</td><td>I2399-500G</td><td></td></tr><tr><td>חממה</td><td>אפנדורף</td><td>ניו ברונסוויק אינובה ורג; 42</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>R0392</td><td></td></tr><tr><td>כדורי KOH</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>P1767-500G</td><td></td></tr><tr><td>חומצה L-גלוטמית המימגנזיום מלח טטרהידרט</td><td>סיגמא</td><td>49605-250G</td><td></td></tr><tr><td>חומצה L-גלוטמית מונואשלגן מלח מונוהידרט</td><td>סיגמא</td><td>49601-500G</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום אצטט טטרהידרט</td><td>סיגמא</td><td>M5661-50G</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד מגנזיום</td><td>פלוקה</td><td>63020-1L</td><td></td></tr><tr><td>הגדרת ערבוב מגנטי</td><td>סטיוארט</td><td>US152</td><td></td></tr><tr><td>ננודרופ</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>ננודרופ 2000</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי מגני NEBExpress Ni-NTA</td><td>NEB</td><td>S1423S</td><td></td></tr><tr><td>פאראפילם</td><td>סיגמא</td><td>P7543-1EA</td><td></td></tr><tr><td>פיפט, מחקר אפנדורף רב-ערוצי Plus 30-300 ומיקרו; L</td><td>אפנדורף</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>אטם דבק לפלטות לקורא לוחות</td><td>אקסלסיינטיפיק</td><td>STR-SEAL-PLT (סטרילי)</td><td></td></tr><tr><td>חותם נושם בלוח</td><td>סטארלאב</td><td>E2796-3005</td><td></td></tr><tr><td>אטם נייר אלומיניום</td><td>אקסלסיינטיפיק</td><td>FCS-25</td><td></td></tr><tr><td>קורא לוחות</td><td>ביו-טק</td><td>סינרגיה H1</td><td></td></tr><tr><td>מנענע לוחות</td><td>אלשנג</td><td>MBI100-4A</td><td></td></tr><tr><td>צלחת, באר 384</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>242764</td><td></td></tr><tr><td>פלטה, באר בעומק 96 1 מ"ל</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>736-0601</td><td></td></tr><tr><td>פלטה, באר 96 בעומק 2 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>82.1972.002</td><td></td></tr><tr><td>פלטה, 96 באר PCR</td><td>סארסטדט</td><td>721,978</td><td></td></tr><tr><td>פלטה, באר אופטית 96</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>10057581</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד אשלגן</td><td>סיגמא</td><td>P5405-500G</td><td></td></tr><tr><td>אורתופוספט די-הידרוגן אשלגן</td><td>פישר כימיקל</td><td>P/4800/53</td><td></td></tr><tr><td>תגובת חילוץ חלבון (BugBuster)</td><td>EMD מיליפור</td><td>70584-3</td><td></td></tr><tr><td>שרף טיהור חלבונים (cOmplete)</td><td>רוש</td><td>5893682001</td><td></td></tr><tr><td>שייקר רוטיסרי</td><td>סטארלאב</td><td>RM-Multi 1</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד נתרן</td><td>פישר כימיקל</td><td>S/3105/70</td><td></td></tr><tr><td>גלאי סוניקציה, FisherBrand 15-50 מ"ל</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>12931181</td><td></td></tr><tr><td>סוניקייטור</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB120</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר</td><td>ג'נוויי</td><td>ג'נובה פלוס</td><td></td></tr><tr><td>ספרמידין</td><td>סיגמא</td><td>S2626-1G</td><td></td></tr><tr><td>TCEP 0.5 מטר</td><td>סופלקו</td><td>646547</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Fisher NTP, טריס ממופר</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>R1481</td><td></td></tr><tr><td>tRNA מ-E. coli MRE600</td><td>רוש</td><td>10109541001</td><td></td></tr><tr><td>טריפטון</td><td>פורמדיום</td><td>TRP02</td><td></td></tr><tr><td>צינור, דרגת PCR של 0.2 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>72,737,002</td><td></td></tr><tr><td>שפופרת, ביז'ו סטרילין 7 מ"ל פוליסטירן</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>129A</td><td></td></tr><tr><td>צינור, קוני (Falcon) 15 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>צינור, קוני (Falcon) 50 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>צינור, מיקרוצנטריפוגה (אפנדורף) 1.5 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>72.690.001</td><td></td></tr><tr><td>צינור, מיקרוצנטריפוגה (אפנדורף) 2 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>72.695.700</td><td></td></tr><tr><td>שפופרת, צנטריפוגציה S100 &nbsp;</td><td>בקמן-קולטר</td><td>355619</td><td></td></tr><tr><td>צינור, S30 צנטריפוגה&nbsp;</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>3118-0050</td><td></td></tr><tr><td>אולטרה-צנטריפוגה</td><td>בקמן-קולטר</td><td>אופטימה XPN-100</td><td></td></tr><tr><td>רוטור אולטרה-צנטריפוגה</td><td>בקמן-קולטר</td><td>רוטור 70Ti בזווית קבועה</td><td></td></tr><tr><td>מים מזוקקים ללא DNase/RNase אולטרה-פיור</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>10977049</td><td></td></tr><tr><td>וורטקסר</td><td>VWR</td><td>444-2791</td><td></td></tr><tr><td>תמצית שמרים</td><td>אוקסואיד</td><td>LP0021T</td><td></td></tr></tbody></table>

חידוד של onepot pure וייצור ריבוזום גולמי לסינתזה של חלבון ללא תאים הניתנת לשחזור

Refinement of OnePot PURE and Crude Ribosome Production for Reproducible Cell-free Protein Synthesis

חידוד של OnePot PURE וייצור ריבוזום גולמי לסינתזה של חלבון ללא תאים הניתנת לשחזור

Recent advances have enabled the Protein synthesis Using Recombinant Elements (PURE) cell-free system to be produced in individual laboratories ...

שיפרנו את מערכת OnePOT PURE ואת הכנת הריבוזום הגסה כדי לשפר את השכפול והנגישות, מה שאפשר למעבדות נוספות לבנות ולפתור תקלות במערכות עמידות ללא תאים למחקר ביולוגיה סינתטית. אתגרי הניסוי כוללים שונות בין אצווה, חוסר יציבות וקטורי ביטוי, וזנים שגדלים לאט, שכולם פוגעים בשחזוריות ובביצועים עקביים בהכנת מערכות PURE פנימיות. קבענו כי שליטה מדויקת בגידול הזן, החיסון וריכוז הגליצרול משפרת משמעותית את השחזוריות והתפוקה בתרוכות OnePOT PURE וריבוזום בין משתמשים ושכפולים ביולוגיים.אנו מתמודדים עם המחסור בפרוטוקול נגיש ומשוחזר להכנת PURE וריבוזומים פנימית, ועוזרים למעבדות להתגבר על חסמים טכניים ולאמץ עמידות עצמית למחקר ביולוגיה סינתטית. הפרוטוקול שלנו משפר את השחזוריות והגמישות על ידי סטנדרטיזציה של תנאי גדילה ושימוש בגליצרול, ומייעל את הכנת הריבוזום באמצעות אולטרה-צנטריפוגציה בלבד, תוך הימנעות משיטות טיהור מורכבות או יקרות יותר. כדי להתחיל, הפשיר את כדורי תאי BL21 הקפואים על קרח והוסיפו 50 מיליליטר של בופר ריבוזום A לצינור חרוטי נקי.באמצעות פיפטה, קחו 100 מיקרוליטר של בופר ריבוזום A מהצינור הקוני והוספו לבקבוקון DTT ללא משקל. שאיפו בעדינות עד שהכדור של ה-DTT נמס לחלוטין ליצירת תמיסת DTT במשקל 0.5 מולר. לאחר מכן, הפיפטה של 100 מיקרוליטר מתמיסת DTT במשקל 0.5 מולר חזרה לצינור הקוני של 50 מיליליטר ו

refinement-onepot-pure-crude-ribosome-production-for-reproducible

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

זיהום של ההכנות של הריבוזומים אוקריוטים מטוהרים באמצעות שיטות מסורתיות על ידי שיתוף טיהור nucleases ו פרוטאזות משפיע לרעה על ניתוחים ביוכימיים ומבניים במורד הזרם. שיטה מהירה ופשוטה טיהור chromatographic משמש כדי לפתור את הבעיה הזו באמצעות הריבוזומים שמרים כמערכת מודל.

טיהור chromatographic של הריבוזומים שמרים מאוד פעיל

פרוטוקול זה מפרט את השלבים, ' עלויות ' הציוד הנדרש לייצר e. coli-המבוסס על תמציות תא וליישם במבחנה תגובות סינתזת חלבון תוך 4 ימים או פחות. למנף את אופי גמיש הפלטפורמה עבור יישומים רחב, נדון תנאי ריאקציה, כי ניתן להתאים אופטימיזציה.

Escherichia coli-המבוסס על סינתזת החלבון ללא תא: פרוטוקולים עבור טכנולוגיית פלטפורמה חזקים, גמישים ונגישים

פרוטוקול זה מתאר את השיטה, חומרים, ציוד ושלבים עבור הכנת מלמטה למעלה של RNA וחלבון הפקת תאים סינתטיים. התא הפנימי מימית של התאים הסינתטיים הכיל S30 ליפוסט חיידקי כדורית בתוך bilayer ליפיד (כלומר, ליפוזומים יציבים), באמצעות העברת תחליב המים בשמן שיטה.

הכנת חלבון הפקת תאים סינתטיים באמצעות שולפת תא חינם בקטריאלי, ליפוזומים והעברת אמולסיה

אנו מציגים שיטה מהירה וחסכונית לייצור מערכת TX-TL נטולת תאים PURE רקומביננטית באמצעות ציוד מעבדה סטנדרטי.

מערכת ללא תאים טהורים של OnePot

המחקר מתאר פרוטוקול ליצירת כמויות גדולות (מיקרוגרם-מ"ג) של DNA עבור קמפיינים הקרנת חלבונים מרסיסי גנים סינתטיים ללא שיבוט או שימוש בתאים חיים. התבנית המינימלית מתעכלת באופן אנזימטי ומעגלית ולאחר מכן מוגברת באמצעות הגברה איזותרמית מתגלגלת של מעגל. תגובות חופש התא יכול להתבצע עם המוצר שלא שאושר.

שיטות מהירות ואנזימטיות להגברה של תבניות ליניאריות מינימליות לאבן טיפוס של חלבונים באמצעות מערכות נטולות תאים

עבודה זו מתארת את הכנת תמצית התאים מ-Escherichia coli (E. coli) ולאחר מכן תגובות של סינתזת חלבונים ללא תאים (CFPS) תוך פחות מ-24 שעות. הסבר על פרוטוקול אוטו-אינדוקציה ללא תאים (CFAI) מפרט שיפורים שנעשו כדי להפחית את הפיקוח על החוקרים ולהגדיל את כמויות תמצית התאים המתקבלות.

מתאים לסינתזת חלבונים ללא תאים תוך 24 שעות באמצעות זרימת עבודה של אינדוקציה אוטומטית ללא תאים

פרוטוקול זה מתאר את מערכת סינתזת החלבונים ללא תאים (CFPS) המשמשת לבניית תאים סינתטיים. הוא מתאר שלבי מפתח עם תוצאות מייצגות במיקרו-תאים שונים. מטרת הפרוטוקול היא לבסס שיטות עבודה מומלצות למעבדות מגוונות בקהילת התאים הסינתטיים, ולקדם את ההתקדמות בפיתוח תאים סינתטיים.

מערכת סינתזת חלבונים ללא תאים לבניית תאים סינתטיים

קולואידים Alkanethiolate זהב התייצב המכונה אשכולות monolayer מוגן (MPCs) מסונתזים, המאופיינת, ו התאספו לתוך סרטים דקים כממשק ספיחה עבור אלקטרוכימיה חלבון monolayer של חלבון חיזור פשוטות...

סינתזה, הרכבה, אפיון monolayer מוגן סרטים Nanoparticle זהב עבור אלקטרוכימיה monolayer חלבון

אנו מציגים את הסינתזה של הידרוג'ל-תיווך intein פיצול חלבון. אבני הבניין של הידרוג'ל הזה הוא שני קופולימרים חלבון המכילים כל מקטע של חלבון trimeric המשמש כcrosslinker וחצי אחד של intein מפוצלת. ערבוב של שני קופולימרים החלבון מעורר תגובת טרנס שחבור intein, מניב יחידת פוליפפטיד שעצמי מרכיבה לתוך הידרוג'ל. הידרוג'ל זו משלבת חלבונים כדוריים מאוד פונקציונליים pH והטמפרטורה יציבה, תואם עם ממסים אורגניים, ובקלות.

סינתזה של חלבון מלאכותי בתיווך intein Hydrogel

מתואר מכשיר מיקרו-מיוצר עם תאי תגובה בנפח פמטוליטר הניתנים לאטימה. דוח זה כולל פרוטוקול לאיטום מגיבי סינתזת חלבון נטולי תאים בתוך תאים אלה לצורך הבנת תפקיד הצפיפות והכליאה בביטוי גנים.

מערכים רבים סגר Femtoliter הלשכה לביולוגיה ללא סלולארי

למדו את פרוטוקול OnePOT PURE המשופר לסינתזת חלבון ללא תאים עם ריבוזומים גולמיים. שיטה זו מייצרת תוצאות עקביות יותר ומפחיתה שונות בין אצוות למחקר בביולוגיה סינתטית.

חידוד של OnePot PURE וייצור ריבוזום גולמי לסינתזה של חלבון ללא תאים הניתנת לשחזור

גלה סרטונים נוספים