Name: דיסקציה של רקמות הגולגולת של דג הזברה לאחר צביעה בכחול אלציאני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: למד פרוטוקול לדיסקציה של רקמות גולגולת בדגי זברה לאחר צביעה בכחול אלציאני. שיטה זו מאפשרת ניתוח מבני של סחוסי הפנים והגולגולת ברזולוציה גבוהה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Simões-Costa, M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+neural+crest+identity%3A+a+gene+regulatory+recipe%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Establishing neural crest identity: a gene regulatory recipe.</a> Development. 142 (2), 242-257 (2015).</li>
<li>Rocha, M., Singh, N., Ahsan, K., Beiriger, A., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+development%3A+insights+from+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Neural crest development: insights from the zebrafish.</a> Dev Dyn. 249 (1), 88-111 (2020).</li>
<li>Hammond, N. L., Dixon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+the+embryogenesis+of+lip+and+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Revisiting the embryogenesis of lip and palate development.</a> Oral Dis. 28 (5), 1306-1326 (2022).</li>
<li>Mork, L., Crump, G. Zebrafish craniofacial development: a window into early patterning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMork%2C+L+%22Craniofacial+development%22">Craniofacial development</a>. Yang, C. , Academic Press. 235-269 (2015).</li>
<li>Swartz, M. E., SheehanRooney, K., Dixon, M. J., Eberhart, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+a+palatogenic+gene+program+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Examination of a palatogenic gene program in zebrafish.</a> Dev Dyn. 240 (9), 2204-2220 (2011).</li>
<li>Selleri, L., Rijli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shaping+faces%3A+genetic+and+epigenetic+control+of+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Shaping faces: genetic and epigenetic control of craniofacial morphogenesis.</a> Nat Rev Genet. 24 (9), 610-626 (2023).</li>
<li>Beaty, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+geneenvironment+interaction+in+a+genome+wide+study+of+nonsyndromic+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Evidence for geneenvironment interaction in a genome wide study of nonsyndromic cleft palate.</a> Genet Epidemiol. 35 (6), 469-478 (2011).</li>
<li>Dixon, M. J., Marazita, M. L., Beaty, T. H., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%3A+understanding+genetic+and+environmental+influences%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate: understanding genetic and environmental influences.</a> Nat Rev Genet. 12 (3), 167-178 (2011).</li>
<li>Reynolds, K., Kumari, P., Sepulveda Rincon, L., Gu, R., Ji, Y., Kumar, S., Zhou, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+in+orofacial+clefts%3A+crosstalk%2C+pathogenesis+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling in orofacial clefts: crosstalk, pathogenesis and models.</a> Dis Model Mech. 12 (2), dmm037051(2019).</li>
<li>Raterman, S. T., Metz, J. R., Wagener, F. A. D. T. G., Von den Hoff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+of+craniofacial+malformations%3A+interactions+of+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models of craniofacial malformations: interactions of environmental factors.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 600926(2020).</li>
<li>Walker, M., Kimmel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+twocolor+acidfree+cartilage+and+bone+stain+for+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">A twocolor acidfree cartilage and bone stain for zebrafish larvae.</a> Biotechnic Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).</li>
<li>Eberhart, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+Mirn140+modulates+Pdgf+signaling+during+palatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">MicroRNA Mirn140 modulates Pdgf signaling during palatogenesis.</a> Nat Genet. 40 (3), 290-298 (2008).</li>
<li>Melvin, V. S., Feng, W., HernandezLagunas, L., Artinger, K. B., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+morpholinobased+screen+to+identify+novel+genes+involved+in+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A morpholinobased screen to identify novel genes involved in craniofacial morphogenesis.</a> Dev Dyn. 242 (7), 817-831 (2013).</li>
<li>Spoorendonk, K. M., Hammond, C. L., Huitema, L. F. A., Vanoevelen, J., SchulteMerker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+unique+model+system+in+bone+research%3A+the+power+of+genetics+and+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Ichthyol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a unique model system in bone research: the power of genetics and in vivo imaging.</a> J Appl Ichthyol. 26, 219-224 (2010).</li>
<li>Farmer, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+series+of+Irx+cluster+mutants+reveals+diverse+roles+in+facial+cartilage+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A comprehensive series of Irx cluster mutants reveals diverse roles in facial cartilage development.</a> Development. 148 (16), dev197244(2021).</li>
<li>Rochard, L., Monica, S. D., Ling, I. T. C., Kong, Y., Roberson, S., Harland, R., Halpern, M., Liao, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+Wnt+pathway+genes+wls%2C+wnt9a%2C+wnt5b%2C+frzb+and+gpc4+in+regulating+convergentextension+during+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Roles of Wnt pathway genes wls, wnt9a, wnt5b, frzb and gpc4 in regulating convergentextension during palate morphogenesis.</a> Development. 143 (14), 2541-2547 (2016).</li>
<li>Liu, S., Narumi, R., Ikeda, N., Morita, O., Tasaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemicalinduced+craniofacial+anomalies+caused+by+disruption+of+neural+crest+cell+development+in+a+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Chemicalinduced craniofacial anomalies caused by disruption of neural crest cell development in a zebrafish model.</a> Dev Dyn. 249 (7), 794-815 (2020).</li>
<li>Zinck, N., FranzOdendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+wholemount+bone+and+cartilage+staining+requires+acidfree+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Accurate wholemount bone and cartilage staining requires acidfree conditions.</a> Anat Rec. 304 (5), 958-960 (2021).</li>
<li>Stenzel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+redundant+roles+for+zebrafish+her+genes+during+mineralization+and+craniofacial+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Distinct and redundant roles for zebrafish her genes during mineralization and craniofacial patterning.</a> Front Endocrinol. 13, 1033843(2022).</li>
<li>Tomasiewicz, H. G., Hesselbach, R., Carvan, M. J., Goldberg, B., Berg, C. A., Petering, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+system+for+environmental+health+studies+in+the+grad+classroom%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model system for environmental health studies in the grad classroom.</a> Zebrafish. 11 (4), 384-395 (2014).</li>
<li>Cubbage, C. C., Mabee, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+cranium+and+paired+fins+in+the+zebrafish+Danio+rerio+%28Ostariophysi%2C+Cyprinidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Morphol%22%5BJournal%5D)">Development of the cranium and paired fins in the zebrafish Danio rerio (Ostariophysi, Cyprinidae).</a> J Morphol. 229 (2), 121-160 (1996).</li>
<li>Schindelin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+opensource+platform+for+biologicalimage+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an opensource platform for biologicalimage analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Tuckett, F., MorrissKay, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcian+Blue+staining+of+glycosaminoglycans+in+embryonic+material%3A+effect+of+different+fixatives%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Alcian Blue staining of glycosaminoglycans in embryonic material: effect of different fixatives.</a> Histochem J. 20 (3), 174-182 (1988).</li>
<li>Dougherty, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+requirements+for+wnt9a+and+irf6+in+extension+and+integration+mechanisms+during+zebrafish+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct requirements for wnt9a and irf6 in extension and integration mechanisms during zebrafish palate morphogenesis.</a> Development. 140 (1), 76-81 (2013).</li>
<li>Goodwin, A. F., et al. From bench to bedside and back: improving diagnosis and treatment of craniofacial malformations utilizing animal models. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoodwin%2C+AF+%22Craniofacial+development%22">Craniofacial development</a>. Yang, C. , Academic Press. 459-492 (2015).</li>
<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+an+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196(2012).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+alizarin+Red+staining+to+detect+chemically+induced+bone+loss+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae.</a> J Vis Exp. (178), e63251(2021).</li>
<li>Klingenberg, C. P., Barluenga, M., Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shape+analysis+of+symmetric+structures%3A+quantifying+variation+among+individuals+and+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Shape analysis of symmetric structures: quantifying variation among individuals and asymmetry.</a> Evolution. 56 (10), 1909-1920 (2002).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>אגרוז</td><td>לונזה ביו-סיינס</td><td>50004</td><td>לציפוי צלחות פטרי</td></tr><tr><td>כחול אלצ'יאני 8G&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>א3157</td><td>להכתמת סחוסים</td></tr><tr><td>סידן כלוריד דיהידראט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>12022</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>מצלמה</td><td>אולימפוס</td><td>DP28</td><td>לרכישת תמונות</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>רוש מדעי החיים</td><td>10236276001</td><td>לסימון גרעינים</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>האניוול</td><td>32221</td><td>ממס לכתם כחול אלציאני</td></tr><tr><td>פיג׳י</td><td></td><td></td><td>גרסה: ImageJ 1.54f</td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>דומונט</td><td>דומונט</td><td>לביצוע נתיחות</td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>MP ביו-רפואי</td><td>193996</td><td>להכנת שטיפות והרכבת דוגמאות&nbsp;</td></tr><tr><td>מי חמצן</td><td>MP ביו-רפואי</td><td>194057</td><td>להכנת תמיסת אקונומיקה</td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד הקסהידרט</td><td>SARD ביוסיינסס</td><td>SBRC0217</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>מגנזיום גופרתי הפטהידרט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>M2773</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>MS-222 (טריקאין)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>א5040</td><td>להרדמת זחלים</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>עמ' 9541</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>אשלגן הידרוקסיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>484016</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונו-בסיסי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>עמ' 0662</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S3014</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>71640</td><td>להכנת מאגרים</td></tr><tr><td>סטריאוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>SZX61</td><td>לביצוע נתיחות</td></tr><tr><td>Tween-20 (טווין-20)</td><td>היימדיה</td><td>TC287</td><td>חומר ניקוי, המשמש לחדירה לתאים</td></tr></tbody></table>

דיסקציה של רקמות הגולגולת של דג הזברה לאחר צביעה בכחול אלציאני

Dissection of Zebrafish Craniofacial Tissues Upon Staining with Alcian Blue

שלד הגולגולת של דג הזברה הוא סחוסי לחלוטין עד 5 ימים לאחר ההפריה (dpf) ולכן ניתן לצבוע אותו באמצעות כחול אלציאני, שהוא צבע בסיסי המסוגל להיקשר לגליקוזאמינוגליקנים הנמצאים בשפע בסחוסים23. התוצאה היא שהסחוס נצבע בכחול (איור 1) כך שניתן להבחין בינו לבין רקמות אחרות שנמצאות בזחל באמצעות מיקרוסקופ סטריאו סטנדרטי שזמין ברוב סביבות המעבדה לתואר ראשון. ברגע שהחלמון נגרד (איור 1B) והעיניים מוסרות (איור 1C), אפשר לראות...

Zebrafish, given its optical transparency, is an excellent vertebrate model to study the mechanisms by which craniofacial cartilages form in the embryo. ...

dissection-zebrafish-craniofacial-tissues-upon-staining-with-alcian

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

פרוטוקול זה מתאר את הליך זיהוי ביתור איברים דג הזברה הבוגרת.

Dissection של איברים מן דג הזברה למבוגרים

סרטון זה מתאר את הטכניקה של מיקרודיסקציה של המוח מדג זברה בוגר. שיטה זו מסייעת בהשגת נויאורוספירות שמקורן במוח שלם שניתן ללמוד עוד יותר.

דיסקציה מוחית של דגי זברה: טכניקה של נוירוביולוגיה של דגים

הדמיה של כלי דם במוח בפיתוח דג הזברה זחל הוא תאר. טכניקות כדי להקל על ההדמיה 3D ולשנות התפתחות כלי דם במוח באמצעות טיפולים כימיים גם מסופקות.

הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

ויזואליזציה של נתונים ניסיוניים הפכה מרכיב מרכזי בהצגת תוצאות לקהילה המדעית. דור של הקלטת הזמן לשגות חי של עוברים גובר תורם למצגת טובה יותר והבנה של תהליכים התפתחותיים מורכבים. פרוטוקול זה הוא מדריך צעד אחר צעד לתיוג תא באמצעות photoconversion חלבון קאאד של דג הזברה.

ויזואליזציה של Craniofacial פיתוח בsox10: קאאד מהונדס דג הזברה הקו באמצעות זמן לשגות מיקרוסקופיה confocal

confocal הדמיה זמן לשגות היא טכניקה רבת עוצמה שימושית לאפיון התפתחות עוברית. כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה ולאפיין המורפוגנזה craniofacial בסוג פראי, כמו גם PDGFRA, smad5, וSMO עוברים שעברו מוטציה.

ניתוח Craniofacial המורפוגנזה בדג הזברה שימוש 4D מיקרוסקופיה confocal

כאן נתאר 3 מודלים פציעה דג זברה מבוגרים, שלהם להשתמש בשילוב עם טיפול תרופות לדיכוי המערכת החיסונית. אנו מספקים הדרכה על הדמיה של התחדשות הרקמות ועל גילוי מינרליזציה עצם המצוי בו.

דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם

כאן, אנו מציגים סדרה סטנדרטית של פרוטוקולים להתבונן sulcus עינית, נעלה את מבנה שזוהתה לאחרונה, והתפאורה אבולוציונית בעיניים חוליות. באמצעות רימות דג זברה, נדגים טכניקות הדרושות כדי לזהות גורמים שתורמים היווצרות וסגירת sulcus עינית מעולה.

ויזואליזציה של Sulcus עינית הממונה במהלך מופרה רזבורה rerio

פרוטוקול זה ממחיש החיסונית רציפים של האנטי ואימונוהיסטוכימיה על קריודורים מן השלב המוקדם של העוברים ומאפשרים לניתוחי לוקליזציה מדויקים באוכלוסיות תאים ספציפיות.

מרפאוולוגיה רציפה ואימונוהיסטוכימיה על קריוסינות עוברי דג

כאן, השתמשנו בכתמים אדומים של אליזרין כדי להראות שחשיפה לאצטט עופרת גורמת לשינוי במסת העצם אצל זחלי דגי זברה. ניתן להתאים שיטת צביעה זו לחקר אובדן עצם באובדן זחלי דגי זברה הנגרמים על ידי חומרים רעילים מסוכנים אחרים.

שימוש בכתמים אדומים של אליזרין לאיתור אובדן עצם הנגרם כימית בזחלי דגי זברה

כאן, אנו מציגים שיטה ליישור והקפאה של דגימות זחלי דג זברה מרובות (Danio rerio) ואיסוףן בשקופית אחת לניתוח טרנסקריפטומי מרחבי.

סידור קומפקטי מרחבית של קטעי דג זברה זחלים לניתוח טרנסקריפטומי מרחבי

עבודה זו מתארת פרוטוקול לכימות צורת הסחוס הקרניופציאלי באמצעות תוכנה חופשית (tpsDigs2, MorphoJ ו-PAST) למדידת שינויים במבנה הפנים של זחלי דגי זברה.

ניתוחים מורפומטריים של צורה: ארגז כלים לתוכנת ניתוח לכימות צורת קרניופנים בדגי זברה

למד פרוטוקול לדיסקציה של רקמות גולגולת בדגי זברה לאחר צביעה בכחול אלציאני. שיטה זו מאפשרת ניתוח מבני של סחוסי הפנים והגולגולת ברזולוציה גבוהה.

דיסקציה של רקמות הגולגולת של דג הזברה לאחר צביעה בכחול אלציאני

גלה סרטונים נוספים