Name: בדיקת פליטת פוספוליפידים ספציפית לליפופרוטאין בצפיפות גבוהה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: למדו פרוטוקול למדידת פליטת פוספוליפידים פלואורסצנטיים על ידי HDL בפלזמה אנושית. שיטה זו מאפשרת הערכת סיכון למחלת לב וכלי דם במחקר ובאבחון קליני.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Grundy, S. M., et al. 2018 AHA/ACC/AACVPR/AAPA/ABC/ACPM/ADA/AGS/APHA/ASPC/NLA/PCNA guideline on the management of blood cholesterol: A report of the american college of cardiology/american heart association task force on clinical practice guidelines. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGrundy%2C+SM+%22Circulation%22">Circulation</a>. 139 (25), e1082-e1143 (2019).</li>
<li>Zhong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+coronary+heart+disease+in+Japanese-American+men+with+mutation+in+the+cholesteryl+ester+transfer+protein+gene+despite+increased+HDL+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Increased coronary heart disease in Japanese-American men with mutation in the cholesteryl ester transfer protein gene despite increased HDL levels.</a> J Clin Invest. 97 (12), 2917-2923 (1996).</li>
<li>Madsen, C. M., Varbo, A., Nordestgaard, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extreme+high+high-density+lipoprotein+cholesterol+is+paradoxically+associated+with+high+mortality+in+men+and+women%3A+Two+prospective+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Extreme high high-density lipoprotein cholesterol is paradoxically associated with high mortality in men and women: Two prospective cohort studies.</a> Eur Heart J. 38 (32), 2478-2486 (2017).</li>
<li>Ko, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+cholesterol+and+cause-specific+mortality+in+individuals+without+previous+cardiovascular+conditions%3A+The+CANHEART+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein cholesterol and cause-specific mortality in individuals without previous cardiovascular conditions: The CANHEART study.</a> J Am Coll Cardiol. 68 (19), 2073-2083 (2016).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+efflux+capacity+is+an+independent+predictor+of+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+patients+with+coronary+artery+disease%3A+A+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Cholesterol efflux capacity is an independent predictor of all-cause and cardiovascular mortality in patients with coronary artery disease: A prospective cohort study.</a> Atherosclerosis. 249, 116-124 (2016).</li>
<li>Rosenson, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysfunctional+HDL+and+atherosclerotic+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Dysfunctional HDL and atherosclerotic cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 13 (1), 48-60 (2016).</li>
<li>Khera, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+efflux+capacity%2C+high-density+lipoprotein+function%2C+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cholesterol efflux capacity, high-density lipoprotein function, and atherosclerosis.</a> N Engl J Med. 364 (2), 127-135 (2011).</li>
<li>Rohatgi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL+cholesterol+efflux+capacity+and+incident+cardiovascular+events%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">HDL cholesterol efflux capacity and incident cardiovascular events.</a> N Engl J Med. 371 (25), 2383-2393 (2014).</li>
<li>Sankaranarayanan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+assay+for+ABCA1-mediated+cholesterol+efflux+using+bodipy-cholesterol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">A sensitive assay for ABCA1-mediated cholesterol efflux using bodipy-cholesterol.</a> Journal of Lipid Research. 52 (12), 2332-2340 (2011).</li>
<li>Schachtl-Riess, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+reagents%2C+cell+numbers%2C+and+calculation+method+influence+high-throughput+measurement+of+HDL-mediated+cholesterol+efflux+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Lysis reagents, cell numbers, and calculation method influence high-throughput measurement of HDL-mediated cholesterol efflux capacity.</a> J Lipid Res. 62, 100125(2021).</li>
<li>Harada, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+uptake+capacity%3A+A+new+measure+of+HDL+functionality+for+coronary+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Cholesterol uptake capacity: A new measure of HDL functionality for coronary risk assessment.</a> J Appl Lab Med. 2 (2), 186-200 (2017).</li>
<li>Horiuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+and+application+of+a+novel+cholesterol+efflux+assay+using+immobilized+liposomes+as+a+substitute+for+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Validation and application of a novel cholesterol efflux assay using immobilized liposomes as a substitute for cultured cells.</a> Biosci Rep. 38 (2), BSR20180144(2018).</li>
<li>Lorkowski, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+cell-free+fluorescent+assay+for+HDL+function%3A+Low+apolipoprotein+a1+exchange+rate+associated+with+increased+incident+cardiovascular+events%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">A novel cell-free fluorescent assay for HDL function: Low apolipoprotein a1 exchange rate associated with increased incident cardiovascular events.</a> J Appl Lab Med. 5 (3), 544-557 (2020).</li>
<li>Denimal, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rethinking+%27good+cholesterol%27+for+cardiovascular+risk+stratification%5BTitle%5D)+AND+%22QJM%3A+An+Int+J+Med%22%5BJournal%5D)">Rethinking 'good cholesterol' for cardiovascular risk stratification.</a> QJM: An Int J Med. 117 (4), 243-245 (2023).</li>
<li>Borja, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-apolipoprotein+A-I+exchange+is+independently+associated+with+cholesterol+efflux+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">HDL-apolipoprotein A-I exchange is independently associated with cholesterol efflux capacity.</a> J Lipid Res. 56 (10), 2002-2009 (2015).</li>
<li>Borja, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-apoa-I+exchange%3A+Rapid+detection+and+association+with+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDL-apoa-I exchange: Rapid detection and association with atherosclerosis.</a> PLoS One. 8 (8), e71541(2013).</li>
<li>Remaley, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+specificity+for+lipid+efflux+by+the+human+ABCAI+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein specificity for lipid efflux by the human ABCAI transporter.</a> Biochem Biophys Res Commun. 280 (3), 818-823 (2001).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free%2C+high-density+lipoprotein-specific+phospholipid+efflux+assay+predicts+incident+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cell-free, high-density lipoprotein-specific phospholipid efflux assay predicts incident cardiovascular disease.</a> J Clin Invest. 133 (18), e165370(2023).</li>
<li>Neufeld, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoA-I-mediated+lipoprotein+remodeling+monitored+with+a+fluorescent+phospholipid%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">ApoA-I-mediated lipoprotein remodeling monitored with a fluorescent phospholipid.</a> Biology (Basel). 8 (3), 53(2019).</li>
<li>Davidson, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+apolipoprotein+B+depletion+on+HDL+subspecies+composition+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">The effects of apolipoprotein B depletion on HDL subspecies composition and function.</a> J Lipid Res. 57 (4), 674-686 (2016).</li>
<li>Phillips, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cellular+cholesterol+efflux%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cellular cholesterol efflux.</a> J Biol Chem. 289 (35), 24020-24029 (2014).</li>
<li>Oram, J. F., Yokoyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein-mediated+removal+of+cellular+cholesterol+and+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein-mediated removal of cellular cholesterol and phospholipids.</a> J Lipid Res. 37 (12), 2473-2491 (1996).</li>
<li>Phillips, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+ABCA1+a+lipid+transfer+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Is ABCA1 a lipid transfer protein.</a> Journal of Lipid Research. 59 (5), 749-763 (2018).</li>
<li>Smith, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abca1+mediates+concurrent+cholesterol+and+phospholipid+efflux+to+apolipoprotein+A-I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Abca1 mediates concurrent cholesterol and phospholipid efflux to apolipoprotein A-I.</a> J Lipid Res. 45 (4), 635-644 (2004).</li>
<li>Ossoli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+X+causes+renal+disease+in+LCAT+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein X causes renal disease in LCAT deficiency.</a> PLoS One. 11 (2), e0150083(2016).</li>
<li>Martínez-Beamonte, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+extra+virgin+olive+oil+high+in+bioactive+compounds+on+atherosclerosis+in+apoe-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Nutr+Food+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of extra virgin olive oil high in bioactive compounds on atherosclerosis in apoe-deficient mice.</a> Mol Nutr Food Res. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-דימיריסטויל-sn-גליצרו-3-פוספוכולין</td><td>אוונטי ריסרץ'</td><td>850345</td><td>14:0 PC (DMPC) כלורופורם סולויטון</td></tr><tr><td>1,2-דיולואיל-sn-גליצרו-3-פוספואתנולאמין-N- (ליסאמין רודמין B סולפוניל) (מלח אמוניום)</td><td>אוונטי ריסרץ'</td><td>810150-C</td><td>תמיסת כלורופורם LRh-PE</td></tr><tr><td>סרט דביק</td><td>Applied Biosystems&nbsp;</td><td>4306311</td><td>סרט דבק שקוף MicroAmp &nbsp;</td></tr><tr><td>סרט טפלון בצפיפות גבוהה של Bay Corporation 1/2 אינץ' x 520</td><td>פתרונות בדיקות רפואיות</td><td>86732</td><td></td></tr><tr><td>צינורות זכוכית בורוסיליקט בגודל 20 מ"מ וחד; 150 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-961-33</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>סדרת סורוול X Pro</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>366927</td><td>מתאים ל-HPLC, &ge; 99.8%</td></tr><tr><td>אבקת כולסטרול</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>C8667</td><td>3&beta;-הידרוקסית-5-כולסטן, 5-כולסטן-3&בטא;-אול</td></tr><tr><td>נייר שקילה מזכוכית</td><td>קול-פאלמר</td><td>&nbsp; UX-01338-02</td><td>לטיפול ב-LC-CSH</td></tr><tr><td>לוח דגירה</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1402-9700</td><td>TempPlate 96 Semi Farm Semi skirt 0.2mL לוחות PCR &nbsp;</td></tr><tr><td>חומר הסרת שומנים (LRA)</td><td>סופלקו</td><td>13358-U</td><td>LC-CSH</td></tr><tr><td>לוח מדידה</td><td>גריינר ביו-וואן&nbsp;</td><td>655076</td><td>מיקרופלטה, PS, 96-באר, F-BOTTOM (באר הארובה), שחור; פלוטראק, קישור תרופתית</td></tr><tr><td>מיקרוסופט אקסל</td><td>Microsoft 365 MSO&nbsp;</td><td>גרסה 2507</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפט MultiFlex</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50-550-206</td><td>ל-aspiraitng supernatant במהלך שטיפות LC-CSH</td></tr><tr><td>קורא לוחות רב-תוויות</td><td>פרקין אלמר &nbsp;</td><td>1420-050</td><td>מונה רב-תוויות Victor3 Wallac1420</td></tr><tr><td>סליין רגיל</td><td>איכות ביולוגית&nbsp;</td><td>114-055-101</td><td>לשימושים מרובים&nbsp;</td></tr><tr><td>פאראפילם</td><td>קול-פאלמר</td><td>HS23452</td><td>לכסות את החלק העליון של צינור הזכוכית במהלך מערבולת</td></tr><tr><td>בקבוקי ארלןמאייר פוליקבונט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>10-041-8</td><td>עבור תמיסה של 10% טריטון-X</td></tr><tr><td>פלזמה אנושית מאוגדת (נגזר בדם) לי הפארין)</td><td>Innovative Research Inc</td><td>IPLAWBLIH</td><td>פלזמה ייחוס, בקרה חיובית (PC)&nbsp;</td></tr><tr><td>מגברי סרפקט X 100&nbsp;</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>28314</td><td>10% טריטון X-100, מדלל פי 10 עם מים מזוקקים</td></tr><tr><td>תרמומיקסר</td><td>אפנדורף</td><td>5382000023</td><td>תרמומיקסר C עם תרמובלוק 96 בארות</td></tr><tr><td>תרמומיקסר סמארטבלוק</td><td>אפנדורף</td><td>5306000006</td><td>SmartBlock עם 96 בארות</td></tr><tr><td>פיפטות העברה (3 מ"ל, פלקון)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-711-9CM</td><td>להסרת בועות מהחלק העליון של הבאר</td></tr><tr><td>מערבל מערבולת</td><td>דייגר</td><td>3030A</td><td>מחזיק סיכום לצינור זכוכית למעלה</td></tr></tbody></table>

בדיקת פליטת פוספוליפידים ספציפית לליפופרוטאין בצפיפות גבוהה

High-Density Lipoprotein-Specific Phospholipid Efflux Assay

Plasma levels of high-density lipoprotein (HDL)-cholesterol (HDL-C) is currently a key metric for the clinical assessment of cardiovascular disease (CVD) ...

high-density-lipoprotein-specific-phospholipid-efflux-assay

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

Assay כולסטרול נועדה לכמת את שיעור בזרימת כולסטרול מן התאים בתרבית ואת היכולת של פלזמה acceptors לקבל את הכולסטרול מתאי שוחרר. Assay כולל תיוג תאים עם איזון כולסטרול, הכולסטרול בין בריכות תאיים ושחרור של כולסטרול כדי acceptor תאיים.

בזרימת כולסטרול Assay

פרוטאוליפוזומים משמשים לחקר תעלות מטוהרות וטרנספורטרים שהוקמו מחדש בסביבה ביוכימית מוגדרת היטב. מודגם הליך ניסיוני למדידת פליטה בתיווך חלבונים אלה. מתוארים השלבים להכנת פרוטאוליפוסומים, ביצוע ההקלטות וניתוח נתונים כדי לקבוע כמותית את התכונות הפונקציונליות של החלבון המשוחזר.

Proteoliposome מבוסס הזרימה Assay כדי לקבוע מאפייני מולקולה בודדת של Cl<sup-&gt;</sup&gt; ערוצים ומסועים

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד והכימות של רנ"א קטן של ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה.

בידוד של ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה עבור Non-קידוד RNA קטנים כימות

ליפאזות (פוספו)ליפאזות חזויות רבות מאופיינות בצורה גרועה מבחינת הספציפיות של הסובסטרט והתפקודים הפיזיולוגיים שלהן. כאן אנו מספקים פרוטוקול לייעול פעילות האנזימים, חיפוש אחר סובסטרטים טבעיים ומציעים פונקציות פיזיולוגיות לאנזימים אלה.

הגדרת מצע ספציפי עבור מועמדי lipase ו פוספוליפאז

אנו מתארים בדיקה מבוססת פלואורסצנטית למדידת ערבול פוספוליפידים בליפוזומים חד-צדדיים גדולים שהורכבו מחדש עם אופסין.

Assay מבוסס-הקרינה של פעילות פוספוליפידים Scramblase

נתאר כאן fluorometric assay ללא תא הביוכימי לקביעת ה-HDL-השומנים peroxidation. זה מהיר ולא לשחזור assay יכול לשמש כדי לקבוע פונקציה HDL במחקרים בקנה מידה גדול והוא יכול לתרום להבנת פונקציית ה-HDL מחלות אנושיות.

ללא תא הביוכימי Fluorometric Assay אנזימטי למדידה תפוקה גבוהה של שומנים בדם Peroxidation של ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה

פרוטוקול זה מספק גישה יעילה מדידת ספיגת כולסטרול LDL במחירים זרם בזמן אמת באמצעות תא חי הדמיה למערכת סוגי תאים שונים. טכניקה זו מספקת פלטפורמה למסך את פעילות פרמקולוגית של תרכובות להשפיע על זרם LDL תוך מעקב אחר עבור תא ומורפולוגיה cytotoxicity ומכאן פוטנציאליים.

ספיגת כולסטרול LDL Assay באמצעות תא חי הדמיה ניתוח עם התא לניטור תקינות

מדידה של קיבולת בזרימת במבחנה כולסטרול סרום או פלזמה במודלים macrophage התא הוא כלי מבטיח כמו סמן עבור טרשת עורקים. במחקר הנוכחי, אנו לייעל לתקנן שיטה בזרימת להארכה-כולסטרול פלורסנט, לפתח ניתוח תפוקה גבוהה באמצעות לוחות 96-ובכן.

תפוקה גבוהה התווית על-ידי Nitrobenzoxadiazole כולסטרול בזרימת Assay

כאן, אנו מתארים פרוטוקולים באמצעות חיישני שומנים פלואורסצנטיים וליפוזומים כדי לקבוע אם חלבון מחלץ ומעביר פוספטידילסרין או פוספטידילינוזיטול 4-פוספט במבחנה.

מדידות מבוססות פלואורסצנטיות של פוספטידילסרין/פוספטידילינוזיטול 4-חילופי פוספט בין ממברנות

במסמך זה, אנו מדגימים פרוטוקול מותאם BODIPY 493/503 מבוסס פלואורסצנטיות לאפיון טיפות שומנים ברקמת הכבד. באמצעות שימוש בהקרנות אורתוגונליות ושחזורים תלת-ממדיים, הפלואורופור מאפשר הבחנה מוצלחת בין סטאטוזיס מיקרו-שלפוחית וסטאטוזיס מקרו-שלפוחית ועשוי לייצג גישה משלימה לפרוטוקולים ההיסטולוגיים הקלאסיים להערכת סטאטוזיס בכבד.

ניתוח טיפות שומנים מוכתמות פלואורסצנטיות עם שחזור תלת ממדי להערכת סטאטוזיס בכבד

אנו מציגים שיטה חסכונית להערכת חדירות הממברנה הליפוזומלית עם רגישות ורזולוציה עדיפות על פני טכניקות קונבנציונליות. באמצעות תגובת החלפת ליגנד מכוסה חדשה, טכניקה זו מזהה שינויים המושרים על ידי פוספוליפאזA 2 בממברנות המודל. גישה נגישה זו, המשולבת בקלות עם ניתוחים סטנדרטיים, משפרת את הרזולוציה לחקר ביופיזיקה של ממברנות ואינטראקציות רעלים.

בדיקת חדירות קרום ליפוזום לחקירת ההשפעות של קבוצות פוספטידילינוזיטול פוספט על הפעולה הממברנוטרופית של ארס PLA2

למדו פרוטוקול למדידת פליטת פוספוליפידים פלואורסצנטיים על ידי HDL בפלזמה אנושית. שיטה זו מאפשרת הערכת סיכון למחלת לב וכלי דם במחקר ובאבחון קליני.

בדיקת פליטת פוספוליפידים ספציפית לליפופרוטאין בצפיפות גבוהה

גלה סרטונים נוספים