Name: הערכה רדיוכימית של פעילות אנזים גליקוגן סינתאז ברקמות בעלי חיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T14:50:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: חקור פעילות אנזים גליקוגן סינתאז ברקמות בעלי חיים באמצעות דגמי עכברים מהונדסים גנטית. שיטה זו מאפשרת מדידה ישירה ורגישות גבוהה לחקר מחלות אגירת גליקוגן ופיתוח טיפולים פוטנציאליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Preiss, J., Walsh, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreiss%2C+J+%22Biology+of+Carbohydrates%22">Biology of Carbohydrates</a>. Ginsburg, V., Robbins, P. 1, John Wiley. 199-314 (1981).</li>
<li>Pederson, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPederson%2C+BA+%22Enzymology+of+Complex+Alpha-Glucans%22">Enzymology of Complex Alpha-Glucans</a>. , CRC Press. 84-137 (2021).</li>
<li>Wayllace, N. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzyme-coupled+continuous+spectrophotometric+assay+for+glycogen+synthases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Rep%22%5BJournal%5D)">An enzyme-coupled continuous spectrophotometric assay for glycogen synthases.</a> Mol Biol Rep. 39 (1), 585-591 (2012).</li>
<li>Wilson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrophotometric+Methods+for+the+Study+of+Eukaryotic+Glycogen+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spectrophotometric Methods for the Study of Eukaryotic Glycogen Metabolism.</a> J Vis Exp. (174), e63046(2021).</li>
<li>Danforth, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+synthetase+activity+in+skeletal+muscle.+Interconversion+of+two+forms+and+control+of+glycogen+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Glycogen synthetase activity in skeletal muscle. Interconversion of two forms and control of glycogen synthesis.</a> J Biol Chem. 240, 588-593 (1965).</li>
<li>Leloir, L. F., Olavarria, J. M., Goldemberg, S. H., Carminatti, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+glycogen+from+uridine+diphosphate+glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of glycogen from uridine diphosphate glucose.</a> Arch Biochem Biophys. 81 (2), 508-520 (1959).</li>
<li>Schalin-Jantti, C., Harkonen, M., Groop, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+activation+of+glycogen+synthase+in+people+at+increased+risk+for+developing+NIDDM%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Impaired activation of glycogen synthase in people at increased risk for developing NIDDM.</a> Diabetes. 41 (5), 598-604 (1992).</li>
<li>Huang, X., Hansson, M., Laurila, E., Ahren, B., Groop, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+feeding+impairs+glycogen+synthase+activity+in+mice+without+effects+on+its+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat feeding impairs glycogen synthase activity in mice without effects on its gene expression.</a> Metabolism. 52 (5), 535-539 (2003).</li>
<li>Holt, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+CD71+Centyrin%3A+Gys1+siRNA+conjugate+reduces+glycogen+synthesis+and+glycogen+levels+in+a+mouse+model+of+Pompe+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel CD71 Centyrin: Gys1 siRNA conjugate reduces glycogen synthesis and glycogen levels in a mouse model of Pompe disease.</a> Mol Ther. 33 (1), 235-248 (2025).</li>
<li>Prats, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-dependent+translocation+of+glycogen+synthase+to+a+novel+structure+during+glycogen+resynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-dependent translocation of glycogen synthase to a novel structure during glycogen resynthesis.</a> J Biol Chem. 280 (24), 23165-23172 (2005).</li>
<li>Perezleon, J. A., Osorio-Paz, I., Francois, L., Salceda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+glycogen+synthase+and+GSK3beta%3A+Control+of+glycogen+content+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of glycogen synthase and GSK3beta: Control of glycogen content in retina.</a> Neurochem Res. 38 (5), 1063-1069 (2013).</li>
<li>Thomas, J. A., Schlender, K. K., Larner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+filter+paper+assay+for+UDP-glucose-glycogen+glucosyltransferase%2C+including+an+improved+biosynthesis+of+UDP-14C-glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">A rapid filter paper assay for UDP-glucose-glycogen glucosyltransferase, including an improved biosynthesis of UDP-14C-glucose.</a> Analytical Biochemistry. 25 (1), 486-499 (1968).</li>
<li>Parker, G. J., Lund, K. C., Taylor, R. P., McClain, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+of+glycogen+synthase+mediated+by+O-linked+N-acetylglucosamine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance of glycogen synthase mediated by O-linked N-acetylglucosamine.</a> J Biol Chem. 278 (12), 10022-10027 (2003).</li>
<li>Niederwanger, A., Kranebitter, M., Ritsch, A., Patsch, J. R., Pedrini, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gel+filtration+assay+to+determine+glycogen+synthase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+B+Analyt+Technol+Biomed+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A gel filtration assay to determine glycogen synthase activity.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 820 (1), 143-145 (2005).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+control+of+glycogen+metabolism+in+knockout+mice+lacking+the+muscle-specific+protein+phosphatase+PP1G%2FRGL%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Insulin control of glycogen metabolism in knockout mice lacking the muscle-specific protein phosphatase PP1G/RGL.</a> Mol Cell Biol. 21 (8), 2683-2694 (2001).</li>
<li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+and+humane+sacrifice+of+a+mouse+by+cervical+dislocation%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quick and humane sacrifice of a mouse by cervical dislocation.</a> CSH Protoc. 2006 (1), prot4357(2006).</li>
<li>Gomes, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+storage+and+muscle+glucose+transporters+%28GLUT-4%29+of+mice+selectively+bred+for+high+voluntary+wheel+running%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Glycogen storage and muscle glucose transporters (GLUT-4) of mice selectively bred for high voluntary wheel running.</a> J Exp Biol. 212 (Pt 2), 238-248 (2009).</li>
<li>Greenberg, C. C., Jurczak, M. J., Danos, A. M., Brady, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+branches+out%3A+new+perspectives+on+the+role+of+glycogen+metabolism+in+the+integration+of+metabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Glycogen branches out: new perspectives on the role of glycogen metabolism in the integration of metabolic pathways.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 291 (1), E1-E8 (2006).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Gilboe, D. P., Larson, K. L., Nuttall, F. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioactive+method+for+the+assay+of+glycogen+phosphorylases%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Radioactive method for the assay of glycogen phosphorylases.</a> Anal Biochem. 47 (1), 20-27 (1972).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>[<>14C] אורידין 5-דיפוספו-גלוקוז</td><td>כימיקלים אמריקאיים מתויגים ברדיו</td><td>ARC 0154</td><td></td></tr><tr><td>31 נייר כרומטוגרפיה ETCHR</td><td>ווטמן</td><td>3031 915</td><td></td></tr><tr><td>הידראט בנזמידין הידרוכלוריד</td><td>סיגמא</td><td>B6506</td><td></td></tr><tr><td>בטא מרקפטואנול</td><td>סיגמא</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>אמבטיה יבשה</td><td>טורי פיינס סיינטיפיק</td><td>SC25</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (200 proof)</td><td>PharmcoAaper</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>אתילן גליקול טטראצטית (EGTA)</td><td>סיגמא</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>אתילנדיאמינטרטראאצטית (EDTA)</td><td>סיגמא</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>מלח נתרן גלוקוז-6-פוספט</td><td>סיגמא</td><td>G7879</td><td></td></tr><tr><td>גליקוגן מכבד ארנב (סוג III)</td><td>סיגמא</td><td>G8876</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופלטה, תחתית שטוחה, באר 96</td><td>גריינר</td><td>655101</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופלטה, pcr, באר 96</td><td>DOT Scientific</td><td>951-PCR</td><td></td></tr><tr><td>מונה סינטילציה רב-תכליתי</td><td>בקמן קולטר</td><td>LS 6500</td><td></td></tr><tr><td>דיהידרט פלואוריד אשלגן</td><td>סיגמא</td><td>221872</td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל מעכב פרוטאז</td><td>GoldBio</td><td>GB-108-2</td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל סינטילציה</td><td>Reasearch Products International</td><td>111195</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקי סינטילציה</td><td>Reasearch Products International</td><td>125509</td><td></td></tr><tr><td>פלואוריד נתרן</td><td>סיגמא</td><td>S7920</td><td></td></tr><tr><td>קריעת רקמות</td><td>מוצרי Biospec</td><td>דגם 398</td><td></td></tr><tr><td>טוזיליזין כלורומתיל קטון (TLCK)</td><td>סיגמא</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>בסיס טריזמה (99.9%)</td><td>סיגמא</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>טריזמה הידרוכלוריד</td><td>סיגמא</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>אורידין 5-דיפוספו-גלוקוז</td><td>סיגמא</td><td>U-4625</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה רדיוכימית של פעילות אנזים גליקוגן סינתאז ברקמות בעלי חיים

Radiochemical Assessment of Glycogen Synthase Enzyme Activity in Animal Tissue

Glycogen is an important metabolite to many eukaryotic cells, integral to energy storage and quick energy release. The building of the molecule is ...

radiochemical-assessment-glycogen-synthase-enzyme-activity-animal

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

סרטון זה מתאר בדיקה ספקטרופוטומטרית להערכת פעילות גליקוגן סינתאז. השיטה מסתמכת על ירידה בספיגת NADH עם הזמן ומצביעה על פעילות גליקוגן סינתאז.

בדיקה ספקטרופוטומטרית לקביעת פעילות גליקוגן סינתאז

בסרטון זה אנו מתארים בדיקה ספקטרופוטומטרית איכותית כדי לקבוע את מידת ההסתעפות בדגימת גליקוגן בעלת מבנה לא מאופיין. השוואת מקסימום הספיגה של המדגם הלא מאופיין לזה של פוליסכרידים עם מבנים מסועפים ידועים מצביעה על נוכחות של הסתעפות במדגם הלא מאופיין.

בדיקת הסתעפות גליקוגן למדידת מידת הסתעפות הגליקוגן

אנו מתארים כאן שיטה ביוכימית מדויקת, לשחזור ונוחה לטיטרציה של גליקוגן במבחנה. טכניקה זו משתמשת בערכת assay Abcam גליקוגן והוא מבוסס על הידרוליזה רצופה של הגליקוגן לגלוקוז וגלוקוז טיטרציה על ידי הקרינה.

כותרות ביוכימית של גליקוגן<em&gt; במבחנה</em

צביעת חומצה שיף תקופתית היא טכניקה המדמה את תכולת הפוליסכריד של רקמות. מאמר זה מדגים פרוטוקול צביעת חומצה שיף תקופתי המותאם לשימוש בתאים חד-גרעיניים בדם היקפי מטוהרים מדם ורידי אנושי. דגימות כאלה מועשרות עבור לימפוציטים ותאי דם לבנים אחרים של מערכת החיסון.

גילוי גליקוגן בתאי הדם היקפי mononuclear עם תקופתי חומצה שיף מכתים

כאן, אנו מציגים assay אמין וקל למדידת תוכן הגליקוגן בתאי cyanobacterial. ההליך כרוך משקעים, דה פולימריזציה לבחירה, ואיתור של שאריות גלוקוז. שיטה זו מתאימה הן wildtype והן זנים מהונדסים גנטית והוא יכול להקל על ההנדסה המטבולית של cyanobacteria.

קביעת תוכן הגליקוגן בקיאנובקטריה

ויסות שלם של ספיגת גלוקוז בשרירים חשוב לשמירה על הומאוסטזיס של גלוקוז בכל הגוף. פרוטוקול זה מציג הערכה של ספיגת גלוקוז מגורה באינסולין ובהתכווצות בשרירי שלד בוגרים מבודדים ודגירה כאשר הם מתארים את ההשפעה של התערבויות פיזיולוגיות שונות על חילוף החומרים של גלוקוז בכל הגוף.

מדידת ספיגת גלוקוז מגורה באינסולין ובהתכווצות בשרירי שלד בוגרים מבודדים ומדגרים מעכברים

טכניקות למדידת הפעילות של אנזימי מפתח של מטבוליזם גליקוגן מוצגות, באמצעות ספקטרופוטומטר פשוט הפועל בטווח הנראה לעין.

שיטות ספקטרופוטומטריות לחקר מטבוליזם גליקוגן אאוקריוטי

ריכוז סוכרוז אופטימלי נקבע למיצוי גליקוגן בכבד באמצעות צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות סוכרוז. תוספת של שלב רתיחה של 10 דקות לעיכוב אנזימים מפרקים גליקוגן הוכחה כמועילה.

מיצוי מולקולות גליקוגן בכבד לקביעת מבנה הגליקוגן

הליך שלאחר קיבוע שונה מגביר את הניגודיות של חלקיקי גליקוגן ברקמה. מאמר זה מספק פרוטוקול שלב אחר שלב המתאר כיצד לטפל ברקמה, לבצע את ההדמיה ולהשתמש בשיטות סטרולוגיות כדי להשיג נתונים משוחדים וכמותיים על התפלגות גליקוגן תת-תאי ספציפית לסוג סיבים בשריר השלד.

כימות של התפלגות גליקוגן תת-תאית בסיבי שריר השלד באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים שידור

כמו המיטוכונדריה הם רק אחוז קטן של תא צמח, הם צריכים טיהור למגוון רחב של מחקרים. המיטוכונדריה ניתן לבודד מתוך מגוון איברי הצמח על ידי המגון, ואחריו דיפרנציאלית וצפיפות צנטריפוגה מעבר צבע כדי לקבל חלק מיטוכונדריאלי נקיים במיוחד.

בידוד, מדידות הנשימה של המיטוכונדריה מ תודרנית לבנה

חקור פעילות אנזים גליקוגן סינתאז ברקמות בעלי חיים באמצעות דגמי עכברים מהונדסים גנטית. שיטה זו מאפשרת מדידה ישירה ורגישות גבוהה לחקר מחלות אגירת גליקוגן ופיתוח טיפולים פוטנציאליים.

הערכה רדיוכימית של פעילות אנזים גליקוגן סינתאז ברקמות בעלי חיים

גלה סרטונים נוספים