מודל כריתת גפה אחורית מתחת לברך של עכברוש ועצבוב שרירים ממוקד מיידי

מחקר בוחן כאב הקשור לפגיעה עצבית וקטיעה, וכיצד ניתוב מחדש של עצבים עשוי להשפיע על כאב זה. קטיעה מגבילה הערכות כאב סטנדרטיות. פרוטוקול זה משתמש במבחנים שונוי ומספריים חלופיים כדי למדוד התנהגויות כאב לאחר קטיעה.

ראשית, השג חולדה מסוג Sprague Dawley בגיל שמונה עד 10 שבועות ובמשקל של 250 עד 300 גרמים. הפעל את משטח החימום והכן שטח ניתוח סטרילי. סדר את כל הכלים והחומרים הסטריליים הדרושים לניתוח.

לאחר הרדמת החולדה באמצעות isoflurane במינון השראה של 4% ומינון תחזוקה של 1% עד 2%, גלחו את האזור החל מהגב התחתון לאורך כל הגפה האחורית. נקו את אתר הניתוח באמצעות תמיסת חיטוי Povidone iodine, ולאחר מכן נגבו אותו בעזרת פד אלכוהול. חזרו על הליך זה פעמיים נוספות.

השתמש במזרק טוברקולין להזרקת 1 mg/kg של meloxicam באופן תת-עורי. השתמש בסרגל כדי לסמן את קו מפרק הברך. סמן שני סימנים נוספים, במרחק של 2 cm ו-3 cm דיסטלית לברך.

השתמשו בסקלפל כדי לבצע חיתוך היקפי של העור שלושה סנטימטרים דיסטלית לברך. בצעו דיסקציה קהה וחדה כדי להפריד את העור מהשרירים שמתחתיו באופן היקפי עד שייסוג בחופשיות. חזרו על תהליך ההפרדה דרך שכבות השריר העמוקות יותר כדי לבצע דיסקציה עד לעצם תוך שמירה על מישורי הרקמה.

השתמשו בטוש כדי לסמן את הטיביה (tibia) והפיבולה (fibula) סנטימטר אחד פרוקסימלית לחתך ההיקפי. השתמשו במסמסי עצם קטנים כדי לקטוע את הטיביה והפיבולה במיקום המסומן. השתמשו בכלי כריתה תרמית (cautery) כדי לשלוט בדימום ולהשיג המוסטזיס.

בדוק את קצה העצם השתח השוליים החדים או קצץ אותם לפי הצורך. השתמש בתפר קלוע ספיג 4-O כדי לקרב את השוליים הקדמיים של מדורי השריר מעל הטיביה, ואבטח אותם באמצעות ארבעה עד שישה תפרי קטיעה במרווחים שווים. יישר וסגור את מדורי השריר הקדמיים והאחוריים יחד מעל העצם כדי ליצור כרית שריר.

סגרו את העור לצדדים באמצעות תפרים מקטעים, שזורים ונספגים במידה 4-O, תוך הימנעות מהצבתם באזור השהיה של משקל על הגדם. מרחו דבק עורי לאורך קו החיתוך. בצעו חיתוך אורכי של 1.5 עד שני סנטימטרים במורד השוק (gluteal splitting incision), כחמישה מילימטרים posterior לעצם הירך.

השתמשו בדיסקציה קהה כדי להפריד בין השרירים הגלוטאליים לשרירי ההמסטרינג, וחשפו את עצב הסיאטיק פרוקסימלית לפיצולו לשלוש (trifurcation). זהו את הענפים המוטוריים הפרוקסימליים, כולל הענף הגדול שמתחת לשריר ה-caudal femoralis (או CFM) והחלוקות שלו. הרימו את ה-CFM באמצעות פינצטה וחתכו אותו.

השתמשו בפינצטת Dumont מיקרו-כירורגית עדינה כדי לבודד את הענפים של ה-semimembranosis וה-biceps femoris באמצעות דיסקציה קהה. תפסו את האפינוריום (epinurium) ופתחו אותו לאורכו באמצעות מספרי קפיץ עגולים ועדינים. לאחר מכן, הפרידו את ענפי העצב.

שמרו על הענף של ה-caudofemoralis והפרידו את שאר הענפים ליד גזע ה-sciatic. כופפו את הענפים המוטוריים כלפי מטה כדי להקל על ה-coaptation. השתמשו במספרי קפיץ קמורים כדי לפתוח את ה-epinurium ולהפריד אותו לצורך ניורו-ליזציה של ה-sciatic trifurcation.

השתמשו בפינצטה עדינה כדי להפריד בעדינות את ענפי העצב. השתמשו בפינצטה כדי לתפוס כל אחד משלושת הענפים – ה-common peroneal, ה-tibial וה-sural – במרחק של 5 עד 10 מילימטרים דיסטלית מהטריפורקציה (trifurcation). תוך הפעלת מתיחה, חתכו כל עצב באופן דיסטלי והסִירו קטע של 5 עד 10 מילימטרים.

השתמשו בתפרים מסוג nylon 10-0 לביצוע הקואפטציות (coaptations), על ידי חיבור העצב הפרינאלי המשותף (common perineal nerve) לשריר ה-semimembranosis תחילה. השתמשו בלפחות שלושה קשרים לכל תפר. ודאו שהמיקום הוא ללא מתח, תוך הימנעות מהידוק יתר ומקימוט של העצב, וסדרו את הקואפטציות ללא זוויות חדות.

לאחר מכן, חברו את עצב הטיביאלי (tibial nerve) לענף הגדול של שריר ה-biceps femoris, ואת עצב הסוראל (sural nerve) לענף הקטן של שריר ה-biceps femoris. עבור קטיעה ללא עיצב עצב מחדש של שריר מטרה, לאחר חשיפת ענפי עצב השיאטיק (sciatic branches), השתמשו בתפר משי 5-O ובפינצטה כדי לקשור את העצבים הפרוניאלי המשותף (common peroneal), הטיביאלי והסוראל, תוך וידוי שהליגטורה יוצרת קפל בעצב ומאובטחת בארבעה קשרי ריבוע. משכו בעדינות כל עצב פרוקסימלית באמצעות הקשר, ובצעו חיתוך אחד עד שני מילימטרים דיסטלית לליגטורה.

הסיר 10 millimeters של מקטע העצב הדיסטלי ולאחר מכן המשך בקטיעה כפי שהודגם קודם לכן. לאחר סגירת החתך, מרח דבק עור לאורך קו החתך. עקוב אחר החולדה מדי יום במשך שבעה ימים כדי לבדוק את שלמות הפצע, סימני זיהום, כאב או מצוקה, והתערע במידת הצורך בהתאם להנחיות ה-IACUC.

ספי thresholds של משיכה מכנית שנמדדו בבדיקת Von Frey פחתו באופן משמעותי מערכי הבסיס ונשארו נמוכים לאורך נקודות הזמן שלאחר הקטיעה. בדיקת סיכות (Pin testing) הראתה מגמה של עלייה בתגובות נוציות (noxious responses) לאורך זמן בהשוואה למצב הבסיס. רגישות יתר לקור של הגדם הייתה חזקה ונשמרה לאורך כל נקודות הזמן בהשוואה למצב הבסיס.

פרוטוקול זה מאפשר להעריך אסטרטגיות שונות לניהול עצבים בהקשר של קטיעה. האתגר הגדול ביותר בעת ביצוע פרוטוקול זה הוא מניפולציה לא טראומטית של עצבים שרוחבם פחות ממילימטר אחד. מחקרים עתידיים יכולים להרחיב עבודה זו כדי לשפר מודלים ולפתח שיטות מהימנות יותר לחקר כאב פאנטום בגפה.