Name: טיהור יעיל של פוליפפטידים דמויי אלסטין (ELPs) מ-E. coli באמצעות שיטת חילוץ והשקעה מבוססת ממס אורגני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: למדו שיטת חילוץ והשקעה מבוססת ממס אורגני לטיהור פוליפפטידים דמויי אלסטין מ-E. coli. השיטה המהירה שומרת על פעילות חלבוני היתוך ומאפשרת שליטה משופרת ברמות אנדוטוקסין ליישומים ביורפואיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Despanie, J., Dhandhukia, J. P., Hamm-Alvarez, S. F., MacKay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides%3A+therapeutic+applications+for+an+emerging+class+of+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides: therapeutic applications for an emerging class of nanomedicines.</a> J Control Release. 240, 93-108 (2016).</li>
<li>MacEwan, S. R., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in drug delivery.</a> J Control Release. 190, 314-330 (2014).</li>
<li>Jenkins, I. C., Milligan, J. J., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+encoded+elastin-like+polypeptides+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Genetically encoded elastin-like polypeptides for drug delivery.</a> Adv Healthc Mater. 10 (13), e2100209(2021).</li>
<li>Ju, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targeting+of+immunosuppressants+using+a+bifunctional+elastin-like+polypeptide%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular targeting of immunosuppressants using a bifunctional elastin-like polypeptide.</a> Bioconjug Chem. 30 (9), 2358-2372 (2019).</li>
<li>Nettles, D. L., Chilkoti, A., Setton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 62 (15), 1479-1485 (2010).</li>
<li>Meyer, D. E., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+recombinant+proteins+by+fusion+with+thermally+responsive+polypeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Purification of recombinant proteins by fusion with thermally responsive polypeptides.</a> Nat Biotechnol. 17 (11), 1112-1115 (1999).</li>
<li>VerHeul, R., Sweet, C., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simple+purification+of+elastin-like+polypeptides+directly+from+whole+cells+and+cell+lysates+by+organic+solvent+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and simple purification of elastin-like polypeptides directly from whole cells and cell lysates by organic solvent extraction.</a> Biomater Sci. 6 (4), 863-876 (2018).</li>
<li>Sweet, C., Aayush, A., Readnour, L., Solomon, K. V., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+fast+organic+extraction-precipitation+method+for+improved+purification+of+elastin-like+polypeptides+that+is+independent+of+sequence+and+molecular+weight%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of a fast organic extraction-precipitation method for improved purification of elastin-like polypeptides that is independent of sequence and molecular weight.</a> Biomacromolecules. 22 (5), 1990-1998 (1990).</li>
<li>Darji, S., Aayush, A., Estes, K. M., Strock, J. D., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+mechanism+of+elastin-like+polypeptide-enzyme+fusion+stabilization+in+organic+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Unravelling the mechanism of elastin-like polypeptide-enzyme fusion stabilization in organic solvents.</a> Biomacromolecules. 25 (1), 272-281 (2024).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+chemistry+of+biological+free+energy+transduction+as+demonstrated+by+elastic+protein-based+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Physical chemistry of biological free energy transduction as demonstrated by elastic protein-based polymers.</a> J Phys Chem B. 101 (51), 11007-11028 (1997).</li>
<li>Guo, Y., Liu, S., Jing, D., Liu, N., Luo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+elastin-like+polypeptides+and+their+applications+in+drug+delivery+system+and+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">The construction of elastin-like polypeptides and their applications in drug delivery system and tissue repair.</a> J Nanobiotechnology. 21, 418(2023).</li>
<li>Yi, A., Sim, D., Lee, S. -B., Sarangthem, V., Park, R. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bioengineered+elastin-like+polypeptide-based+system+for+targeted+gene+delivery+in+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Biosyst%22%5BJournal%5D)">Application of bioengineered elastin-like polypeptide-based system for targeted gene delivery in tumor cells.</a> Biomater Biosyst. 6, 100050(2022).</li>
<li>Clement, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+the+recombinant+expression+and+chemical+synthesis+of+a+short+cysteine-rich+insecticidal+spider+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Venom+Anim+Toxins+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison between the recombinant expression and chemical synthesis of a short cysteine-rich insecticidal spider peptide.</a> J Venom Anim Toxins Trop Dis. 21, 19(2015).</li>
<li>Miranda, L. P., Alewood, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+chemical+synthesis+of+peptides+and+small+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accelerated chemical synthesis of peptides and small proteins.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (4), 1181-1186 (1999).</li>
<li>Eweje, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+protein+nanoparticles+for+cytosolic+delivery+of+nucleic+acids+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Self-assembling protein nanoparticles for cytosolic delivery of nucleic acids and proteins.</a> Nat Biotechnol. , (2025).</li>
<li>Hassouneh, W., Christensen, T., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides+as+a+purification+tag+for+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides as a purification tag for recombinant proteins.</a> Curr Protoc Protein Sci. 6 (11), 1-16 (2010).</li>
<li>Yakhnin, A. V., Vinokurov, L. M., Surin, A. K., Alakhov, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+fluorescent+protein+purification+by+organic+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Green fluorescent protein purification by organic extraction.</a> Protein Expr Purif. 14 (3), 382-386 (1998).</li>
<li>Aayush, A., Darji, S., Estes, K. M., Yeh, E., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+elastin-like+polypeptide-based+nucleic+acid+delivery+system+targeted+to+EGFR%2B+bladder+cancer+cells+using+a+layer-by-layer+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of an elastin-like polypeptide-based nucleic acid delivery system targeted to EGFR+ bladder cancer cells using a layer-by-layer approach.</a> Biomacromolecules. 25 (9), 5729-5744 (2024).</li>
<li>Christensen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+order+controls+expression+level+and+activity+of+elastin-like+polypeptide+fusion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Fusion order controls expression level and activity of elastin-like polypeptide fusion proteins.</a> Protein Sci. 18 (7), 1377-1387 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-מרקפטואנול</td><td>ביו-ראד</td><td>161-0710</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>30% אקרילאמיד/ביס-אקרילאמיד</td><td>TCI</td><td>A3218</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>אצטון</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A949</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>אצטוניטריל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A996</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>אמפיצילין</td><td>ביוטכנולוגיה ביולוגית זהב</td><td>A-301-25</td><td>אנטיביוטיקה</td></tr><tr><td>APS (אמוניום פרסולפאט)</td><td>ביו-ראד</td><td>1610700</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>בוטנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>L13171</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ביוריאגנטים של פישר</td><td>BP118-500</td><td>רכיב בופר Lysis</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>דיקון לאבס</td><td>UN1170</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>אתיל אצטט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>E195</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>Research Products International</td><td>G22020-0.5</td><td>רכיב מדיה של Terrific Broth (TB)</td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A144SI-212</td><td>רכיב בופר Lysis</td></tr><tr><td>כתם קומאסי מיידי</td><td>אבקאם</td><td>AB119211</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>IPTG</td><td>ביוטכנולוגיה ביולוגית זהב</td><td>12481C25</td><td>רכיב ביטוי חלבון</td></tr><tr><td>איזופרופנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A451-1</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>K2HPO4 (פספט אשלגן מונובסיסי)</td><td>מדעי הוורדס</td><td>470302-246</td><td>חלק 2 רכיב מאגר</td></tr><tr><td>KH2PO4 (פוטזיום פוספט דיבאסיק)</td><td>מדעי הוורדס</td><td>470302-254</td><td>חלק 2 רכיב מאגר</td></tr><tr><td>L-פרולין</td><td>Research Products International</td><td>P5200-500.0</td><td>רכיב מדיה של Terrific Broth (TB)</td></tr><tr><td>ליזוזים</td><td>ביוטכנולוגיה ביולוגית זהב</td><td>L-040-1</td><td>רכיב בופר Lysis</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A452</td><td>ממס אורגני</td></tr><tr><td>מאגר דגימה מקורי</td><td>ביו-ראד</td><td>161-0738</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>סולם חלבונים</td><td>ביוטכנולוגיה ביולוגית זהב</td><td>P008-500</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>מאגר ג'ל מתפרק</td><td>ביו-ראד</td><td>1610798</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>סודים דודציל סולפט (SDS)</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>J18220-36</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S318-500</td><td>רכיב בופר Lysis</td></tr><tr><td>בופר ג'ל ערימה</td><td>ביו-ראד</td><td>1610799</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>ביו-ראד</td><td>1610801</td><td>רכיב SDS-PAGE</td></tr><tr><td>בסיס טריס</td><td>ביוריאגנטים של פישר</td><td>BP-152</td><td>רכיב בופר Lysis</td></tr><tr><td>טריפטון</td><td>Research Products International</td><td>T60065-1000.0</td><td>רכיב מדיה של Terrific Broth (TB)</td></tr><tr><td>תמצית שמרים</td><td>Research Products International</td><td>Y20025-1000.0</td><td>רכיב מדיה של Terrific Broth (TB)</td></tr></tbody></table>

טיהור יעיל של פוליפפטידים דמויי אלסטין (elps) מ-e. coli באמצעות שיטת חילוץ והשקעה מבוססת ממס אורגני

Efficient Purification of Elastin-Like Polypeptides (ELPs) from E. coli Using an Organic Solvent-based Extraction and Precipitation Method

לאחר השלבים הסופיים של הפרוטוקול, השלב הבא הוא המחשת תוצאת ההוצאה-משקעים באמצעות ניתוח SDS-PAGE וצביעה כחולה של קומסי. כאשר יש שלב ליזיס לפני ההפקה אורגנית, יש להופיע רצועת ELP בולטת. במקרה של ELP-I-Cm2, תחום זה מופיע בעוצמה של 100 קילודאלטון (איור 3A).
סקר של שילובי ממס אורגניים שונים הראה יעילות הפקה משתנה (איור 3B), כאשר כל שילוב מניב ריכוזים וטוהרים שונים. אנו בוחרים את השילובים הטובים ביותר למיצוץ-משקעים בהתבסס על טוהר ומבחן תפקו...

טיהור יעיל של פוליפפטידים דמויי אלסטין (ELPs) מ-E. coli באמצעות שיטת חילוץ והשקעה מבוססת ממס אורגני

Elastin-like polypeptides (ELP) are engineered biopolymers built from repetitive pentapeptide sequences that mimic motifs found in mammalian tropoelastin. ...

efficient-purification-elastin-like-polypeptides-elps-from-e-coli

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

כאן אנו מתארים פרוטוקול לטיהור מאוד פעיל Hsp104, AAA hexameric + חלבון מן שמרים, אשר זוגות הידרוליזה ל-ATP disaggregation חלבון. תכנית זו מנצל לבנות His6-tagged לטיהור זיקה...

טיהור Hsp104, Disaggregase חלבון

בסרטון זה, אנו מדגימים כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשלב הפוך כדי לטהר פפטידים מתערובת חלבון ליזט מעוכל. פפטידים מטוהרים אלה עוברים לאחר מכן ליופיליזציה ומאוחסנים ליישומים במורד הזרם. ניתוח של פפטידים יכול לעזור להבין את המכניקה המעורבת איתות תאי וסרטן.

טיהור פפטידים: טכניקה מבוססת RP-HPLC למיצוי פפטידים מליזטים חלבונים מעוכלים

פוליפפטידים דמויי אלסטין הם biopolymers גירוי מגיב עם יישומים החל טיהור חלבון רקומביננטי לאספקת סמים. פרוטוקול זה מתאר את הטיהור ואפיון של פוליפפטידים כמו אלסטין והתכת פפטיד או חלבון שלהם מחיידקי Escherichia באמצעות שלב טמפרטורת פתרון מעבר ההתנהגות הקריטית נמוך יותר שלהם כאלטרנטיבה פשוטה לכרומטוגרפיה.

טיהור ללא chromatographic של פוליפפטידים דמויי אלסטין רקומביננטי וFusions עם פפטידים וחלבונים מן<em&gt; חיידקי Escherichia</em

טכנולוגיות רקומביננטיות אפשרו למעצבי חומרים ליצור חלבונים מלאכותיים חדשים עם פונקציות מותאמות אישית ליישומי הנדסת רקמות. לדוגמה, ניתן לתכנן חלבוני מטריצה חוץ-תאיים מלאכותיים כך שישלבו תחומים מבניים וביולוגיים שמקורם ב-ECMs מקוריים. כאן, אנו מתארים את הבנייה והטיהור של חלבוני aECM המכילים חזרות דמויות אלסטין.

עיצוב ובנייה של תאי מטריקס המלאכותי (aECM) חלבונים מ<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; להנדסת רקמות עור

הפרוטוקול מספק מתודולוגיה solubilize בוצה פרטנית אירובית כדי לחלץ פולימרים תאיים דמוי אלגינט (ALE).

הפקת חומרים פולימריים המבני התאי מ אירובי גרגירי בוצה

Hydrogels מהונדסים חלבון רקומביננטי הן ממינוי תרבית תאים 3D הם מאפשרים tunability מלאה של עמוד השדרה פולימר ולכן, microenvironment את התא. כאן, אנו מתארים התהליך של היטהרות חלבון רקומביננטי כמו אלסטין ויישומו בחיי הידרוג 3D תא אנקפסולציה.

הייצור של חלבון כמו אלסטין Hydrogels כימוס, Immunostaining של תאים ב- 3D

הציגו כאן הם פרוטוקולים ליצירת פפטיד מבוסס unilamellar שלפוחיות קטנות מסוגל לצמיחה. כדי להקל על ייצור vesiculo של פפטיד הממברנה, אלה שלפוחיות מצוידות עם תמלול-תרגום מערכת ו-פפטיד קידוד פלמיד.

ב והשרירים סינתזה של ממברנות פפטיד הפרה עבור הצמיחה שלפוחית אוטונומית

בממשק של ממיסים אורגניים ומימית, מותאם המותאם לאלסטין וחלבונים בעלי מבנה מולקולרי מורכבים כגון שלפוחיות, סיבים ומדבקות מופעלות על ידי פרמטרים סביבתיים. פרוטוקולי ההרכבה המתוארים מניבים תאים מבוססי חלבון ממברנה (PMBCs) עם מאפיינים שניתן לסמוך עליהם, המאפשרים כימוס של מטענים שונים.

בימוי האסיפה של אלסטין כמו חלבונים לתוך הגדרת מבנים Supraולקולריים מוגדרים מחוץ לגופית

חיידקים מפרישים שלפוחיות חוץ-תאיות בגודל ננומטר (EVs) הנושאות מולקולות ביולוגיות ביו-אקטיביות. מחקר EV מתמקד בהבנת הביוגנזה שלהם, תפקידם באינטראקציות ובמחלות בין מיקרובים למיקרובים ולמיקרובים מארחים, כמו גם ביישומים הטיפוליים הפוטנציאליים שלהם. זרימת עבודה לבידוד מדרגי של כלי רכב חשמליים מחיידקים שונים מוצגת כדי להקל על סטנדרטיזציה של מחקר EV.

בידוד וטיהור מדרגיים של שלפוחיות חוץ-תאיות מ-Escherichia coli וחיידקים אחרים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר משקעי חלבונים מבוססי ממסים בתנאים מבוקרים להתאוששות וטיהור חזקים ומהירים של דגימות פרוטאום לפני ספקטרומטריית מסות.

משקעי חלבון אורגניים מבוססי ממסים לטיהור פרוטאום חזק לפני ספקטרומטריית מסה

מאמר זה מתאר מתודולוגיה לביטוי יתר של Nsp15 רקומביננטי, נוקלאז רעיל, במערכת ביטוי C41(DE3), ואחריה טיהור החלבון המתויג באמצעות כרומטוגרפיה של זיקה והדרת גודל. ניתן להתאים את הפרוטוקולים האלה לחלבונים רעילים מאתגרים אחרים.

שאיבת יתר וטיהור נוקלאז רעיל מ-Escherichia coli

למדו שיטת חילוץ והשקעה מבוססת ממס אורגני לטיהור פוליפפטידים דמויי אלסטין מ-E. coli. השיטה המהירה שומרת על פעילות חלבוני היתוך ומאפשרת שליטה משופרת ברמות אנדוטוקסין ליישומים ביורפואיים.

טיהור יעיל של פוליפפטידים דמויי אלסטין (ELPs) מ-E. coli באמצעות שיטת חילוץ והשקעה מבוססת ממס אורגני

גלה סרטונים נוספים