Name: פיתוח וסטנדרטיזציה של מיקרושיטה אקס-ויבו לכימות תוך-תאי של וינקריסטין בתאי ALL ראשוניים באמצעות LC-MS/MS (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: למדו לכמת וינקריסטין בתאי ALL ראשוניים באמצעות שיטת LC-MS/MS. פרוטוקול זה מאפשר הערכת צבירת התרופה ושיפור מעקב תרפויטי בטיפול בלוקמיה לימפובלסטית חריפה אצל ילדים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Inaba, H., Pui, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+diagnosis+and+treatment+of+pediatric+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in the diagnosis and treatment of pediatric acute lymphoblastic leukemia.</a> J Clin Med. 10 (9), 1926(2021).</li>
<li>Pui, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Childhood+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+progress+through+collaboration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Childhood acute lymphoblastic leukemia: progress through collaboration.</a> J Clin Oncol. 33 (27), 2938-2948 (2015).</li>
<li>Gaudichon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+extramedullary+relapse+in+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+reconciling+biological+concepts+and+clinical+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Rev%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of extramedullary relapse in acute lymphoblastic leukemia: reconciling biological concepts and clinical issues.</a> Blood Rev. 36, 40-56 (2019).</li>
<li>Dhyani, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+potential+of+alkaloids%3A+a+key+emphasis+on+colchicine%2C+vinblastine%2C+vincristine%2C+vindesine%2C+vinorelbine+and+vincamine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Anticancer potential of alkaloids: a key emphasis on colchicine, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine and vincamine.</a> Cancer Cell Int. 22, 206(2022).</li>
<li>Mateus, A., Matsson, P., Artursson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+measurement+of+intracellular+unbound+drug+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Rapid measurement of intracellular unbound drug concentrations.</a> Mol Pharmaceutics. 10 (6), 2467-2478 (2013).</li>
<li>Chien, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+method+to+determine+intracellular+drug+concentrations+in+cellular+uptake+assays%3A+application+to+metformin+in+organic+cation+transporter+1-transfected+human+embryonic+kidney+293+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Metab+Dispos%22%5BJournal%5D)">Rapid method to determine intracellular drug concentrations in cellular uptake assays: application to metformin in organic cation transporter 1-transfected human embryonic kidney 293 cells.</a> Drug Metab Dispos. 44 (3), 356-364 (2016).</li>
<li>Calcagno, A. M., Ambudkar, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+expression+of+drug+resistance-linked+ABC+transporters+in+cancer+cells+by+quantitative+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of expression of drug resistance-linked ABC transporters in cancer cells by quantitative RT-PCR.</a> Methods Mol Biol. 637, 121-132 (2010).</li>
<li>Richter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+donor+to+the+lab%3A+a+fascinating+journey+of+primary+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">From donor to the lab: a fascinating journey of primary cell lines.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 648272(2021).</li>
<li>Borgmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Childhood+ALL+blasts+retain+phenotypic+and+genotypic+characteristics+upon+long-term+serial+passage+in+NOD%2FSCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Childhood ALL blasts retain phenotypic and genotypic characteristics upon long-term serial passage in NOD/SCID mice.</a> Pediatr Hematol Oncol. 17 (8), 635-650 (2000).</li>
<li>Rosati, M. M., Corrêa, J. R., de Sousa Mariano, S., Cardoso, A., Andrés Yunes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+leukemia+relapse+to+induction+chemotherapy+for+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine model of leukemia relapse to induction chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia.</a> J Vis Exp. (224), e68797(2025).</li>
<li>Dams, R., Huestis, M. A., Lambert, W. E., Murphy, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+effect+in+bioanalysis+of+illicit+drugs+with+LC-MS%2FMS%3A+influence+of+ionization+type%2C+sample+preparation%2C+and+biofluid%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Matrix effect in bioanalysis of illicit drugs with LC-MS/MS: influence of ionization type, sample preparation, and biofluid.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 14 (11), 1290-1294 (2003).</li>
<li>Yang, Y., Cruickshank, C., Armstrong, M., Mahaffey, S., Reisdorph, R., Reisdorph, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+sample+preparation+approach+for+mass+spectrometry-based+profiling+of+plasma+results+in+improved+coverage+of+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+A%22%5BJournal%5D)">New sample preparation approach for mass spectrometry-based profiling of plasma results in improved coverage of metabolome.</a> J Chromatogr A. 1300, 217-226 (2013).</li>
<li>Zhang, J., Dasgupta, A., Ayala, R., Bonapace, C., Kassim, S., Faustino, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+standard+variability%3A+root+cause+investigation%2C+parallelism+for+evaluating+trackability+and+practical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioanalysis%22%5BJournal%5D)">Internal standard variability: root cause investigation, parallelism for evaluating trackability and practical considerations.</a> Bioanalysis. 16 (15), 771-776 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>בקבוקון 2.0 מ"ל עם מבחן בורג</td><td>אספקת זרימה</td><td>8-2400</td><td>שימש עם תוספות זכוכית עם קפיץ (5 x 29 מ"מ) מאותה חברה (קטגוריה 5-29015)</td></tr><tr><td>בקבוקון 2.0 מ"ל עם מבחן בורג</td><td>אספקת זרימה</td><td>8-2400</td><td>שימש עם תוספות זכוכית עם קפיץ (5 x 29 מ"מ) מאותה חברה (קטגוריה 5-29015)</td></tr><tr><td>אצטוניטריל</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>100030</td><td></td></tr><tr><td>אצטוניטריל</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>24010152</td><td></td></tr><tr><td>AIM V</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>12055091</td><td></td></tr><tr><td>מערכת כרומטוגרפית ACQUITY UPLC H-Class</td><td>ווטרס קו.</td><td>https://www.waters.com/nextgen/br/pt/products/chromatography/chromatography-systems/acquity-uplc-h-class-plus-system.html?srsltid=AfmBOoo0mjNgaucBI-Exv97cEmWE96_lVkqKi2IR0IPtA-h1feG-WvtW</td><td></td></tr><tr><td>רוזנת 3 פלורידה</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>A49892</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>D 8418</td><td></td></tr><tr><td>פאלקון 50 מ"ל</td><td>סארסטדט</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פורמית</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>F0507</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק זכוכית</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>41121800</td><td></td></tr><tr><td>חממה</td><td>PHCBI</td><td>MCO-50M-PE</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטיוב 1.5 מ"ל</td><td>אפנדורף</td><td>41121702</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטיוב 2.0 מ"ל</td><td>אפנדורף</td><td>30120094</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>מרק (סיגמא-אלדריץ')</td><td>PPB006</td><td></td></tr><tr><td>ספיבאק miVac</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>56340</td><td></td></tr><tr><td>התוכנה לרכישת נתונים</td><td>ווטרס קו.</td><td>MassLynx</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר מסה משולש עם קוודרופול Xevo TQ-S micro</td><td>ווטרס קו.</td><td>https://www.waters.com/nextgen/us/en/products/mass-spectrometry/mass-spectrometry-systems/xevo-tq-s-micro.html?srsltid=AfmBOoqqmLRNfHGqvtnwaL7xYOOEXPV3NJ9qYNH9HAwqXKXrMvLRQXSW</td><td></td></tr><tr><td>אולטרסוני סוניקטור</td><td>קימיס</td><td>Q335D</td><td></td></tr><tr><td>וינבלסטין 1 מ"ג/מ"ל</td><td>ליבס</td><td>https://www.libbs.com.br/nossos-produtos/antineoplasico-faulblastina/</td><td>וינבלסטין סולפט</td></tr><tr><td>וינקריסטין</td><td>קיימן כימיקלים</td><td>11764</td><td></td></tr></tbody></table>

פיתוח וסטנדרטיזציה של מיקרושיטה אקס-ויבו לכימות תוך-תאי של וינקריסטין בתאי all ראשוניים באמצעות lc-ms/ms

Development and Standardization of an Ex Vivo Micromethod for Intracellular Quantification of Vincristine in Primary ALL Cells by LC-MS/MS

תוצאות כרומטוגרפיות מייצגות שהושגו לאחר בדיקות הצטברות תוך-תאית באמצעות כל תאי PDX ראשוניים שדגרו עם VCR ו-VINB מוצגות באיור 1. הדגימות הוכנו באמצעות 2.5 ×-106 תאים לכל תנאי. בתנאים הכרומטוגרפיים שתוארו, הווידאו נשמר בעקביות על 2.85 דקות עם אפקט מטריצה מינימלי, וצורת השיא הייתה סימטרית וברורה היטב. פרופילים אלו ממחישים את ההתנהגות הכרומטוגרפית הצפויה של VCR ו-VINB כאשר הפרוטוקול מבוצע כראוי.
לפני יישום פרוטוקול זה על תאי לוקמיה ראשוניים, בוצעו בדיקות רא...

פיתוח וסטנדרטיזציה של מיקרושיטה אקס-ויבו לכימות תוך-תאי של וינקריסטין בתאי ALL ראשוניים באמצעות LC-MS/MS

Quantifying intracellular vincristine (VCR) in primary pediatric acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells is essential for understanding sample-specific ...

המטרה שלנו היא למדוד וינקריסטין תוך-תאי בדגימות קליניות רלוונטיות ולחקור אינטראקציות בין תאי תרופות. האתגר הניסויי הנוכחי הוא אופטימיזציה של זמן הדגירה בכל המודלים. בנוסף, התאמת תרופות תלויה במודל מגבילה את החוסן, במיוחד בדגימות המטופלים הראשוניות.כדי להתחיל, יש להפשיר את דגימת התא המוקפאת על ידי סיבוב עדין של הבקבוקון בבקבוק המכיל 15 מיליליטר מים מזוקקים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עד שהתכולה הופשרה במלואה. העבר את תכולת הבקבוקון לצינור חרוטי בנפח 50 מיליליטר המכיל 15 מיליליטר PBS סטרילי 1X באמצעות פיפט פסטר חד-פעמי סטרילי. הכניסו את הצינור לצנטריפוגה על 300G למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.לאחר הצנטריפוגה, יש להשליך את הסופרנטנט על ידי הפיכת הצינור בתנועה חלקה אחת. עכשיו, תלה מחדש את כדור התא ב-10 מיליליטר של AIM V Medium באמצעות פיפט פסטר חד-פעמי. ספירת תאים ברי קיימא באמצעות מונה אוטומטי ומדדה את גודל התא הממוצע.חשב את הנפח הנדרש לקבלת 2.5 כפול 10 לכוח של שישה תאים ברי קיימא באמצעות פרופורציה פשוטה המבוססת על ריכוז התאים הנמדד. וורטקס את תמיסת הוינקרסטין הרבה לפני השימוש. הוסף את AIM V Medium לצינור מיקרו בנפח שני מיליליטרים, ואז 2.5 כפול 10 להספק של שישה תאים, ואז הוסף את נפח תמיסת הוינקריסטין הנדרש.מערבולת לרגע וסובב את הצינור במשך חמש שניות כדי לאסוף נוזל מהפקק. לאחר מכן, דגרו את המיקרו-צינורות הפתוחים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו-חמצני למשך שלוש שעות. לאחר הדגירה, סגור את מכסי הצינורות וצנטריפוגה את הדגימות ב-300G למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.השליכו בזהירות את הסופרנטנט באמצעות פיפטה. ואז להוסיף מיליליטר אחד של PBS בטמפרטורת החדר לצינור. לאחר חזרה על שלבי הצנטריפוגה והשטיפה, הסר בזהירות את כל הסופרנטנט שנותר באמצעות פיפטה.החזירו את הכדור ב-100 מיקרוליטר של PBS ומערבולת עד שהכדור יתלה לחלוטין. כעת, הוסיפו 400 מיקרוליטר של מתנול קר המכיל 0.1 מיקרומולר וינבלסטין בטמפרטורה של מינוס 20 מעלות צלזיוס ישירות לדגימה, תוך הימנעות ממגע עם דפנות הצינור. אחסן את הדגימות בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס במהלך הלילה.קיררו את הצנטריפוגה ל-4 מעלות צלזיוס לפני שמוציאים את הדגימות מהמקפיא של מינוס 80 מעלות צלזיוס. מיד לאחר הוצאת הדגימות מהמקפיא, צנטריפוגה אותן ב-13,000 גרם למשך 20 דקות בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, העבר 300 מיקרוליטר של הסופרנטנט למיקרו-צינור בנפח 1.5 מיליליטר באמצעות פיפטה.ייבשו את הדגימות לחלוטין על ידי הנחתן במכשיר ריכוז ואקום שמכוון ל-45 מעלות צלזיוס למשך שעה ו-40 דקות. לאחר הייבוש, תלו מחדש כל כדור ב-400 מיקרוליטר מים המכילים 0.1% חומצה פורמית באמצעות פיפטה. מערבולת בעדינות עד שהכדור נמס לחלוטין.עכשיו, צנטריפוגה שוב את הדגימות ב-13,000G למשך 20 דקות בארבע מעלות צלזיוס. העבר 300 מיקרוליטר של הסופרנטנט לבקבוקון עליון בורג בנפח 2 מיליליטר לניתוח ספקטרומטריית מסה בכרומטוגרפיה נוזלית-טנדם. במסך הבית של התוכנה, פתח רשימת דגימות וצור רשימה חדשה על ידי הזנת שמות הדגימה, נפחי ההזרקה, מיקומי המבחנות והשיטה לשימוש.הניחו בקבוקון המכיל מים אולטרה-טהורים במגש האוטוסמפלר, וסימנו אותו כבקבוקון ריק ברשימת הדגימות. הרץ את הריקנות בין כל סט של שלוש הזרקות כדי למנוע העברה. בחר את השורות הרצויות ברשימת הדוגמאות והתחל באיסוף נתונים על ידי לחיצה על 'הרצה' ואישור עם אישור. לאחר סיום הריצה, בחר דגימה מהתוצאות וצפה בכרומטוגרמות על ידי לחיצה על כרומטוגרמה בתפריט העליון.לבסוף, במסך הבית, לחץ על קישורי יעד. בחר את הקבצים שרצו זה עתה ולחץ על התהליך. בחר את שיטת ה-vincristine ולחץ על OK כדי ליצור טבלאות פלט.ניתוח כרומטוגרפי של תאי זנוגרפט ראשוניים שמקורו בלוקמיה לימפובלסטית חריפה שנגזרו עם וינקריסטין מיקרומולר אחד במשך שלוש שעות הראה בעקביות שיא סימטרי ומדויק ב-VCR ב-2.85 דקות, ואישר שמירה מתאימה והפרעות מטריצה מינימליות. עקומות כיול של וינקריסטין שנוצרו ב-AIM V Media הראו ליניאריות חזקה בריכוזים בין 0.001 ל-10 מיקרומולר. באופן דומה, כאשר שניים כפול 10 בכוח של שש RS4; נוספו 11 תאים, ונצפתה תגובה ליניארית מ-0.01 למיקרומולר אחד.ניתוח מסלול זמן של הצטברות וינקריסטין גילה ש-RS4; 11 תאים הפגינו רמה ביחס וינקריסטין לווינבלסטין בין שעתיים לשלוש עם עלייה מתונה בארבע עד חמש שעות, בעוד שתאי PDX ראשוניים הגיעו לשיא בשעתיים וירדו לאחר מכן, מה שתמך בבחירת שלוש שעות כזמן דגירה מאוזן. הצטברות וינקריסטין מנורמלת השתנתה בין שישה דגימות מטופלים ב-PDX ונצפתה מתאם חיובי בין יחסי וינקריסטין ווינבלסטין לא נורמליים לבין נפח התאים הממוצע. ניתוח פיצול אישר כי שיא הבסיס של וינקרסטין תואם ליון הקדום ביחס מטען ראשי 413.38, שיצר יון כימות ב-392.47 ויון אישור ב-383.38 תחת אנרגיית קונוס של 40 וולט ואנרגיית התנגשות של 16 וולט.הפרוטוקול שלנו מתגבר על מגבלות של גישות עקיפות על ידי מתן אפשרות למדידת תרופות תוך-תאית ישירה ורגועה בעיקר בתאי לוקמיה. הגישה שלנו מאפשרת מדידה ישירה של וינקריסטין תוך-תאי, גם אם ההצבעה בתאים נמוכה. בעתיד נחקור האם הבדלים בהצטברות תרופות תוך-תאית קשורים לעמידות במבחנה ונחקור מנגנונים קשורים.

development-standardization-an-ex-vivo-micromethod-for-intracellular

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

אנו מתארים שיטה למעקב אחר קרע endomembrane שהושרו על ידי החיידקים תוך...

מידות תא יחיד של קרע vacuolar נגרמים על ידי פתוגנים תאיים

מיומנות מטבולית של מערכות במבחנה ב הוא דרישת מפתח עבור biotransformation ומכירה של סמים toxicants. בפרוטוקול זה, אנו מתארים את היישום של בדיקות מטבוליות התייחסות להעריך בשלב שאני המטבוליזם בתרביות תאים.

ספקטרומטריית מסה וגישות מבוססי Luminogenic לאפיון שלב I מטבולית כשירות של<em&gt; במבחנה</em&gt; תא תרבויות

הנה, cytometry זרימת multispectral הדמיה עם תכונה אנליטית שמשווה תמונות פירוט בהיר של 3 סמנים autophagy ו quantifies שיתוף שלהם לוקליזציה, יחד עם ספירת LC3 ספוט, שימש למדוד autophagy באופן אובייקטיבי, כמותי, סטטיסטית וחסכונית.

הערכת השטף autofagic ידי מדידת LC3, p62, ו LAMP1 Co-localization באמצעות multispectral הדמיה cytometry

פלטפורמת מניפולציה משולבת תא מפותחת לשימוש בשילוב עם התקנה בודדת המסה בדיקה מאסיבית עבור ניתוח מקוון של תאים ההשעיה בודדים תחת תנאי הסביבה.

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לסימון שלטי דם חוץ-תאיים שמקורם בטסיות דם כדי לפקח על נדידתם וקליטתם בגזירי סחוס המשמשים כמודל לדלקת מפרקים ניוונית.

תיוג של שלל חוץ-תאי לניטור הגירה וספיגה של סחוס

כתב יד זה מתאר כיצד להעריך במערכת החיסונית של vivo של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בתאי הגידול (EVs) באמצעות ציטומטריית זרימה. רכבים חשמליים שמקורם בגידולים העוברים מוות תאי אימונוגני שנגרם כתוצאה מהטיפול נראים רלוונטיים במיוחד במערכון הגידול. פרוטוקול זה מדגים את ההערכה של אוקסליפלטין-induced emunostimulatory גידול EVs אבל יכול להיות מותאם להגדרות שונות.

ב-Vivo הקרנה אימונוגנית של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בגידול על ידי ציטומטריית זרימה של תאי T טחול

שלל חוץ-תאי (EVs) תורמים לביולוגיה תאית ולתקשורת בין-תאית. יש צורך לבדיקות מעשיות כדי לדמיין ולתייג ספיגת EVs על ידי התאים. הפרוטוקול הנוכחי מציע את בדיקת ספיגת EV על ידי שימוש בהדמיית פלואורסצנטיות תלת ממדית באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקל, לאחר בידוד EV על ידי מכשיר מיקרופלואידי מבוסס ננו-סינון.

ספיגת ארסיה חוץ-תאית באמצעות ניתוח הדמיית מיקרוסקופ קונפוצלי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול למדידה מדויקת ואמינה של מטבוליטים בסוגי תאים נדירים. שיפורים טכניים, כולל נוזל מעטפת שונה למיון תאים ויצירת דגימות ריקות רלוונטיות, מאפשרים כימות מקיף של מטבוליטים עם קלט של 5000 תאים בלבד לדגימה.

מטבולומיקה ממוקדת על תאים ראשוניים נדירים

פרוטוקול זה מתאר את בידוד שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות משרירי השלד של העכברים וממח עצם באמצעות עיכול אנזימטי וכרומטוגרפיה של הרחקת גודל, ומאפשר שחזור שניתן לשחזור של שברים מועשרים בוסיקולות מרקמות מורכבות מבנית ובעלות תפוקה נמוכה לניתוח מולקולרי במורד הזרם.

בידוד וזיקולות חוץ-תאיות קטנות משריר השלד של עכברו וממח עצם באמצעות כרומטוגרפיה של הוצאת גודל

פרוטוקול זה מדגים כיצד ליצור מסומן פלורסנטי, גידולים המשובטים מוגדר גנטית בעין תסיסנית / דיסקים דמותי מחושים (EAD). הוא מתאר כיצד לנתח את EAD והמוח מן הזחלים instar השלישי וכיצד לעבד אותם לחזות ולכמת שינויים בהתבטאות גנים הפולשנות הגידול.

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

למדו לכמת וינקריסטין בתאי ALL ראשוניים באמצעות שיטת LC-MS/MS. פרוטוקול זה מאפשר הערכת צבירת התרופה ושיפור מעקב תרפויטי בטיפול בלוקמיה לימפובלסטית חריפה אצל ילדים.

פיתוח וסטנדרטיזציה של מיקרושיטה אקס-ויבו לכימות תוך-תאי של וינקריסטין בתאי ALL ראשוניים באמצעות LC-MS/MS

גלה סרטונים נוספים