הפרדה אוטומטית של HPLC באמצעות LC-mate: דוגם אוטומטי משולב ואוסף חלקיקים לטיהור בקנה מידה מיקרו

המחקר שלנו מתמקד בעיצוב כלי שמתחבר ישירות למערכות HPLC כדי לאוטומט את כל השלבים הידניים החוזרים על עצמם. הזרקת דגימות ידנית ואיסוף החלקים הם מאוד מייגעים. LC-Mate מציעה פתרון אוטומטי חוצה פלטפורמות לטיהור דגימות HPLC.

בתחילה, בדוק את חיבורי הצנרת של הממס בין מערכת ה-HPLC, ה-LC-Mate ועמודת הכרומטוגרפיה כדי להבטיח מסלולי זרימה תקינים. כדי לבדוק את חיבור קו העברת האות בין גלאי ה-UV ל-LC-Mate, חבר את החוט השחור לטרמינל האדום ואת החוט הלבן לטרמינל השחור כדי להתאים לקוטביות האות האנלוגי. התבונן בתצוגת LC-Mate כדי לוודא שגל האות האנלוגי מופיע.

אם אין גל נראה, הפוך את חיבורי החוטים על ידי חיבור החוט השחור לטרמינל השחור והחוט הלבן לטרמינל האדום. כדי לבדוק את חיבור הטריגר בין גלאי האולטרה סגול ל-LC-Mate, חבר את קצה כבל הנתונים היחיד ליציאת הגלאי האולטרה-סגול. חבר את החוטים השחורים והלבנים מהקצה השני של הכבל לטרמינלי ההדק השחור והכחול ב-LC-Mate בהתאמה. הדק את הטרמינלים כדי להבטיח חיבור טריגר יציב.

לאחר מכן, ודא הפעלה תקינה של מערכת HPLC ו-LC-Mate. לחץ על סמל LC Mate בממשק כדי להריץ אוטומטית את תוכנית הבדיקה העצמית של המערכת ולאתחול מודולי חומרה מרכזיים. המתן לטון הקצר של ההנחיה ולהיעלמות הודעת הבדיקה העצמית כדי לאשר שהאתחול הושלם.

הגדר את תנאי ההפרדה של HPLC והתחל בהסרה כדי לאזן את העמודה. בממשק הבדיקה, הזן את נפח ההזרקה, זמן השחרור וזמני החזרה, ואז לחץ על אייקון ההתחלה כדי להתחיל את פעולת הדגימה האוטומטית, אוסף השברים ו-HPLC. זהה תנאי הפרדה אפשריים, כולל רזולוציה, זמן ריצה, זמן שימור, נפח הזרקה ואורך גל אולטרה סגול.

בחר את מודול פונקציית הסף בצד השמאלי של הממשק כדי לפתוח את מסך הגדרת הפרמטרים. הזן את נפח ההזרקה, זמני החזרה, סף וזמן השחרור, ולחץ על Start כדי להתחיל בפעולה אוטומטית. עקוב אחרי מדדי המצב.

צפה בהזרקה מתבצעת כדי לאשר הכנסת דגימה. בדוק את מדד ההפרדה בתהליך כדי לוודא שההפרדה הכרומטוגרפית מתרחשת. שים לב למדד ריקון המזרק כדי לזהות מתי המזרק מנקה נוזל שנותר.

כדי לבצע איסוף שברים לפי זמן, בחר את מודול איסוף התזמון מהצד השמאלי של הממשק כדי לפתוח את תפריט הפרמטרים. נפח הזרקת קלט, זמני חזרה, זמן שחרור וזמני איסוף נדרשים. לחץ על כפתור ההתחלה כדי להפעיל את הרצף האוטומטי החוזר.

לאחר מכן, בחר במודול הפונקציות Collect All בצד שמאל של הממשק. קבע ערך סף איסוף כדי לאסוף את כל הפסגות הכרומטוגרפיות בנפרד. לניקוי צינור, הכנס את צינור ההזרקה של הסמפלר האוטומטי לבקבוק קטן המכיל ממס נקי.

בחר את מודול הניקוי מהצד השמאלי של הממשק כדי לפתוח את תפריט הפרמטרים. לאחר מכן קבע את נפח ההזרקה בין אפס ל-1000, ואת זמני החזרה לניקוי צינור המזרקים. לחצו על ניקוי תחת ניקוי הושלמו כדי להתחיל בניקוי צינורות המזרקים.

עקוב אחרי ספירת המחזורים כדי לעקוב אחרי מחזורי השטיפה שהושלמו. הגדר את זמן הניקוי לניקוי צינור האיסוף. לחצו על ניקוי מתחת לצינור הנוכחי כדי להתחיל בניקוי צינור האיסוף.

עקוב אחרי תצוגת הצינור הנוכחית כדי לאשר ניקוי רציף מצינור 0 לצינור 10. הפעל שמירה אוטומטית כדי לאפשר למערכת לשמור כרומטוגרמות לאחר כל מחזור שחרור. חלופה נוספת היא ללחוץ על כפתור השמירה אחרי ה-elution כדי לשמור נתונים ידנית.

לאחר הזנת המטא-דאטה בתיבת הדיאלוג, בחר את מיקום האחסון מתוך אחסון מקומי, כרטיס SD או כונן אוטובוס סידורי אוניברסלי חיצוני. הפרדה חצי-מוכנה של HPLC עם LC-Mate השיגה הזרקת דגימה רציפה ויציבה ואיסוף חלקיקים במהלך טיהור 2"O-גלויל-היפרוזיד. זיהומים קלים הוסרו ביעילות כדי לקבל 2" O-גלואל-היפרוזיד מטוהר באמצעות מערכת LC-Mate.

הזרקת דגימות רציפה ויציבה ואיסוף חלקים הושגו גם הם בהצלחה במהלך טיהור פלורידזין וטרילובטין. הדגמה שמערכת LC-Mate משפרת משמעותית את היעילות התפעולית על ידי הפחתת התערבות ידנית משמעותית. סטיית התקן היחסית של אזור שיא הזרקת הטבעת המלאה הייתה 0.813%, מה שמעיד על יציבות ויכולת שחזור מצוינת של הזרקות LC-Mate.

מערכת זו מאפשרת טיהור אוטומטי ואיסוף חלקיקים מדויק לתהליכי עבודה יעילים בקנה מידה מאקרו של HPLC. וריאנט האות הנכון, בחירת מצב נכונה והגדרת הפרמטרים הם קריטיים ליישום מוצלח של מכשיר LC-Mate. אנו מתכננים להגדיל את קיבולת הערוצים ולשלב גלאים חדשים לשיפור תאימות בין פלטפורמות.