Name: הזרקה תוך-ראשית מותנית של SOD1-ASO למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (CNS) ויעילות חיזוי בעכברי ALS בני אדם עם SOD1-G93A (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: למדו שיטת הזרקה תוך-ראשית מותנית חופשית-יד לעכברים לשחרור תרופות ישירות לנוזל המוח והשדרה. השיטה הוכחה במודל עכברי ALS עם SOD1-ASO והראתה ירידה של כ-60% ב-RNA של SOD1 בעמוד השדרה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.3 מ"ל 29 גרם, מזרק אינסולין 1/2 אינץ' להזרקת IT</td><td>סמית'ס מדיקל</td><td>4429-3</td><td></td></tr><tr><td>קידוח סטרילי בקוטר 0.5 מ"מ</td><td>כלי מדע מדויק (FST), או מקבילים</td><td>1900705</td><td></td></tr><tr><td>תפר מונופילמנט פרולן 5-0</td><td>אתיקון&nbsp;</td><td>8870H&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מקלות אלכוהול</td><td>דינרקס</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>מקלות אלכוהול</td><td>דינרקס</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>משכך הכאבים - בופרנורפין שחרור ממושך</td><td></td><td></td><td>נדרש מרשם</td></tr><tr><td>קליפר של בעלי חיים</td><td>וואהל</td><td>08787-450A</td><td></td></tr><tr><td>ערכת שעתוק הפוך cDNA בעלת קיבולת גבוהה של Applied Biosystems</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>43-688-14</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר Bead Ruptor 24</td><td>אומני אינטרנשיונל, בע"מ.</td><td>19-070</td><td></td></tr><tr><td>איסוף דם וחצוצרות הפרדת סרום</td><td>בקטון דיקינסון (BD)</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלוריד דיהידרט</td><td>JT בייקר</td><td>1335</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מזרק דיגיטלית</td><td>מנגנון הרווארד</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>מערכת אימונואסיי אוטומטית של אלה</td><td>R& D Systems</td><td>600-100</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים-פורלובה</td><td>דקרה</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>ג'נו/גריינדר</td><td>SPEX SamplePrep</td><td>2010</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 חומר חיטא יבש</td><td>בריינטרי סיינטיפיק, או מקביל</td><td>GER 5287-120V</td><td></td></tr><tr><td>מזרק המילטון עם מחט (26s/2"/2 (סגנון נקודה)</td><td>המילטון</td><td>80300</td><td>26s/2"/2:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 26 שניות: 26 שערים; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; אורך 2 אינץ'; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2: סגנון נקודות</td></tr><tr><td>תערובת הומוגניזציה של רקמות קשות 2.8 מ"מ קרמית (צינורות מחוזקים בעומק 2 מ"מ) (50/pk)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50-280-9286</td><td>ספק: Revvity Health Sciences Inc</td></tr><tr><td>משטח חימום</td><td>ק & H Manufacturing</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>פלטפורמת ICV</td><td>סטולטינג</td><td>502063</td><td></td></tr><tr><td>תא איזופלוראן עם מערכת סקוואנגינג</td><td>VetEquip</td><td>901820</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד היהידרט</td><td>EMD כימיקלים</td><td>1.05832</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מטצנבאום</td><td>כלי מדע מדויק (FST), או מקבילים</td><td>14016-14</td><td></td></tr><tr><td>Mouse GAPDH TaqMan Assay ID Mm99999915_g1</td><td>תרמופישר סיינטיפיק</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרודות מחט ל-CMAP, 28 G</td><td>נאטוס מדיקל (מותג טקה)</td><td>#902-DMF25-TP</td><td></td></tr><tr><td>NutraGel: תזונה מלאה</td><td>שירות ביולוגי</td><td>NGB-2</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק המחט אולסן-הגר</td><td>כלי מדע מדויק (FST), או מקבילים</td><td>12502-12</td><td></td></tr><tr><td>פולוקסאמר 188</td><td>מאצ'לר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלוריד אשלגן</td><td>JT בייקר</td><td>3045</td><td></td></tr><tr><td>קדם-מגבר (ל-CMAP)</td><td>מכשירי דיוק עולמיים (WPI)</td><td>SYS-DAM50</td><td></td></tr><tr><td>ערכת pNFH של ProteinSimple</td><td>R& D Systems</td><td>SPCKB-PS-000519</td><td></td></tr><tr><td>מקלות דגימה פרובידון-יודיד</td><td>דינרקס</td><td>1201</td><td></td></tr><tr><td>QIAzol Lysis Reagent&nbsp;</td><td>קיאגן</td><td>79306</td><td></td></tr><tr><td>מערכת QuantStudio 12K Flex</td><td>מערכות ביולוגיות יישומיות</td><td>4471087</td><td></td></tr><tr><td>סקופולה</td><td>פישרברנד</td><td>01-257-567</td><td></td></tr><tr><td>סיגנל v6.04</td><td>קיימברידג' עיצוב אלקטרוני</td><td>מספר סידורי 061144</td><td>CMAP Software&nbsp;</td></tr><tr><td>תא חילוץ בעלי חיים קטנים</td><td>יחידות טיפול נמרץ לבעלי חיים ניידות Thermocare דגם FW-1</td><td>FW-1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת סטריאוטקסית של חיה קטנה עם קונסולת תצוגה דיגיטלית</td><td>KOPF</td><td>דגם 940&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>עכברי SOD1 G93A</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>סטוק # 004435</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד נתרן</td><td>EMD כימיקלים</td><td>1.16224</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט די-בסיסי אנהידרוס</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>55136</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט מונו-בסיסי דיהידרט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>3819</td><td></td></tr><tr><td>סכין חד-פעמית סטרילית</td><td>Med Vet International, או המקבילה</td><td>MIL4410</td><td></td></tr><tr><td>וילון סטרילי</td><td>דינרקס</td><td>4410</td><td></td></tr><tr><td>רפידות גזה סטריליות</td><td>דיינארקס, או המקבילה</td><td>DRX-3354</td><td></td></tr><tr><td>סליין סטרילי</td><td>תרמופישר סיינטיפיק</td><td>14190094</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות סטריליות</td><td>אנסל, או מקביל</td><td>20277290</td><td></td></tr><tr><td>מבודד גירוי (עבור CMAP)</td><td>מכשירי דיוק עולמיים (WPI)</td><td>SYS-A365D</td><td></td></tr><tr><td>סטולטינג מיקרו דריל&nbsp;</td><td>סטולטינג</td><td>58610</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים מעוקלים (מלקחיים גראף - טיטניום)</td><td>כלי מדע מדויק (FST), או מקבילים</td><td>11652-10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים (מלקחי גרף - טיטניום)</td><td>כלי מדע מדויק (FST), או מקבילים</td><td>11650-10</td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי</td><td>דיינארקס, או המקבילה</td><td>3572</td><td></td></tr><tr><td>מזרק להזרקה תת-עורית של משכך כאבים</td><td>BD</td><td>309582</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Fast Advanced Master Mix</td><td>תרמופישר סיינטיפיק</td><td>4444556</td><td></td></tr><tr><td>מים (מילי-קיו)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>משקל משקל</td><td>מטלר טולדו &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; דגם XSR2002S</td><td>23-112795</td><td></td></tr><tr><td>עכברים מסוג פראי C57BL/6J</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>סטוק # 000664</td><td></td></tr></tbody></table>

הזרקה תוך-ראשית מותנית של sod1-aso למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (cns) ויעילות חיזוי בעכברי als בני אדם עם sod1-g93a

Lumbar Intrathecal Injection of SOD1-ASOs for Precise CNS Targeting and Predictive Efficacy in Human SOD1-G93A ALS Mice

כדי לאפיין במדויק את הדיוק והיעילות של מתן תוך-תיקי (IT) בעכברים בוגרים, ערכנו תחילה ניסויי אימות יסודיים תוך שימוש בצבע הכחול של אוונס (0.5%) כמעקב חזותי לזרימת נוזל הנוזל המוחי וחדירות הרקמות. עכברים בוגרים מסוג בר מסוג C57BL/6J (זן #000664; משקל 25-30 גרם) הורדמו באיזופלוראן (2-2.5%) בחמצן כדי להסיר תופעות תנועה, והאזור המותני הוכן בתנאים אספטיים. הזרקות ה-IT בוצעו באמצעות ניקור מותני למרחב התת-עכבישי במינונים עולים בודדים של 20 מיקרוליטר, 30 מיקרוליטר ו-50 מיקרוליטר, כדי להעריך מינון/נפח ויחס עוצמת הצביעה. מיקום המחט הנכון אושר על ידי התבוננות בתנועת זנב או התנגדות שלילית במהלך ההזרקה.
בתוך 5 דקות ממתן הצבע, העכברים עברו פרפיוז טרנסקרדיאלי עם מי מלח עם בופר פוספט קר (PBS) כדי להסיר שאריות צבע מהוסקולטורה. חוט השדרה הוצא בעדינות וצולמו תחת תאורה סטנדרטית על רקע ניטרלי. בדיקה ויזואלית גילתה התפלגות אחידה ואחידה בין הגב לבטן של כחול אוונס בכל העכברים שקיבלו צבע. נפחי הזרקה גבוהים יותר היו קשורים להגברת רוויית הצבע על ציר הרוסטרוקאודל, אם כי גם העכבר שהוזרק בנפח 20 מיקרוליטר הציג צביעה חזקה. לעומת זאת, עכברים שלא קיבלו צבע כחול של אוונס (קבוצת הביקורת שהוזרק לה סליין סטרילי) לא הראו צבע נראה או כתמים ברקמת חוט השדרה (איור 1). ממצאים אלו מראים שהזרקות IT בעכברים מאפשרות משלוח מהיר וניתן לשחזור של מומס לאורך חוט השדרה. מגבלות ניסויים אלו כוללות היעדר הערכה כמותית של התפלגות הצבע והיעדר ניתוח התפלגות צבע בנפח ההזרקה של 10 מיקרוליטר המשמש למתן ASO. עם זאת, בוצעה כימות במדידות מעורבות מטרות מאוחרות יותר ברמת ביטוי הגנים בעכברי SOD1-G93A אנושיים באמצעות ניתוח ביטוי גנים ספציפי ל-SOD1 בבני אדם. נפח ההזרקה של 10 מיקרולטר ששימש בניסויים הבאים למתן ASO נבחר כדי להבטיח מינון בטוח וסובל היטב בעכברים, וצפוי לספק חשיפה מספקת למערכת העצבים המרכזית בהתבסס על מחקרים קודמים38.
בהתבסס על אימות אנטומי זה, הערכנו לאחר מכן את הרלוונטיות הפונקציונלית של מתן IT באמצעות ASOs המכוונים ל-SOD1 המוטנטי, אסטרטגיה טיפולית מאומתת במודלים של SOD1-ALS. עכברים טרנסגניים המיזיגוטיים SOD1-G93A, הנושאים את גן SOD1 המוטנטי האנושי, מציגים ניוון נוירון מוטורי צפוי וירידה נוירומוסקולרית, מה שהופך אותם למודל פרה-קליני מבוסס. בגיל 5 שבועות, לפני הופעת התסמינים, העכברים קיבלו בולוס IT יחיד של ASO ספציפי ל-SOD1 בריכוז של 100 מיקרוגרם ב-10 מיקרוליטר. מינון זה נבחר בהתבסס על מחקרי אופטימיזציה קודמים שנערכו באמצעות מתן ICV בעכברים, כפי שדווח על ידי McCampbell ואח' (2018)36. כדי להשוות את היעילות בין מתן IT למתן ICV, קבוצה נפרדת קיבלה זריקות ICV באותו מינון ASO באמצעות מתן סטריאוטקטי. הבקרות קיבלו את ה-ASO הלא פעיל (בקרה שאינה מיקודת) דרך נתיב IT.
חמישה שבועות לאחר הטיפול (בגיל 10 שבועות), העכברים עברו בדיקת פוטנציאל פעולה שרירית מורכב (CMAP) תחת הרדמה איזופלורנית קלה. הקלטות CMAP משרירי הגפה האחורית שהושגו באמצעות פרוטוקולי גירוי עצב סיאטי סטנדרטיים חשפו שימור משמעותי של עוצמה הן בקבוצות שטופלו ב-IT והן בקבוצות ICV בהשוואה לקבוצות ביקורת לא פעילות שטופלו ב-ASO (p &lt; 0.0001 באמצעות ANOVA חד-כיווני עם מבחן פוסט-הוק של טוקי). חשוב לציין כי שימור המשרעת לא היה שונה באופן משמעותי בין שיטות העברת IT ל-ICV (p &gt; 0.05), מה שמעיד על הגנה נוירומוסקולרית דומה (איור 2A).
כדי להעריך סמנים ביולוגיים מערכתיים של שלמות העצבים, נמדדו רמות השרשרת הכבדה של חוטי העצב המזורחנים (pNFH) בסרום באמצעות מבחן אלקטרוכימינציה רגיש מאוד. דגימות דם שנאספו בנקודת הזמן של 5 שבועות לאחר ההזרקה הראו ירידה של &gt;40% בריכוז pNFH בעכברים שטופלו ב-ASO ביחס לעכברים שטופלו ברכב (p &lt; 0.0001), ללא הבדל משמעותי בין שיטות ה-IT ל-ICV (איור 2B). התגובה האחידה של הביומרקר המולקולרי מאשרת את הנתונים האלקטרופיזיולוגיים, ומרמזת כי העברת IT מפחיתה ביעילות תהליכים נוירודגנרטיביים במודל ALS זה.
כדי להעריך את מעורבות המטרה של SOD1-ASO ברמה המולקולרית, ביצענו PCR כמותי (RT-qPCR) על רקמות חוט השדרה הצווארי והחזה שנחתכו. סך ה-RNA הופק באמצעות פרוטוקול מבוסס עמודות, שהבטיח טוהר גבוה (A260/A280&gt;1.8), ואחריו סינתזת cDNA עם פריימר אקראי של הקסמר. הגברה כמותית של PCR המיקוד בתמלולי SOD1 אנושיים, שנורמל ל-GAPDH, חשף ירידה ממוצעת של 60% לאחר מתן IT ו-35% לאחר מתן ICV, שניהם משמעותיים יחסית לביקורת ASO לא פעילה (p &lt; 0.0001 לשניהם). השוואה ישירה בין מסלולי המשלוח הראתה פגיעה משמעותית במתן IT (p &lt; 0.0001), מה שמעיד על מעורבות יעילה יותר במטרה בעמוד השדרה דרך גישה ישירה לעמוד השדרה (איור 3). נדרשים מחקרים נוספים להערכת מעורבות מטרות באזורים אחרים של מערכת העצבים המרכזית.
ביחד, הנתונים המקיפים הללו מציעים אימות משכנע של הזרקות IT כטכניקה מדויקת, שחזורית ומינימלית פולשנית להעברת ASOs למערכת העצבים המרכזית (CNS) במודלים של עכברים. ניהול ה-IT הראה יעילות טיפולית ברמה של מתן ICV במגוון רחב של מדדי תוצאה, כולל שימור מתמשך של תפקוד נוירולוגי (CMAP), נורמליזציה של סמנים ביולוגיים רלוונטיים למחלה (pNFH), והפלה מולקולרית חזקה של תמלילי SOD1 אנושיים באזורים ממוקדים של מערכת העצבים המרכזית. ממצאים אלו מדגישים את הרב-שימושיות של מתן IT כמסלול קליני שניתן לתרגום לטיפולי ASO ממוקדים במערכת העצבים המרכזית, ומציע יעילות השווה ל-ICV תוך שמירה על פשטות פרוצדורלית והפחתת פולשניות. לכן, מתן IT ו-ICV הם גישות יעילות באותה מידה להתערבויות ממוקדות מערכת העצבים המרכזית, ומציעים גמישות בסביבות פרה-קליניות בהתאם לנגישות אנטומית, היתכנות פרוצדורלית והקשר טיפולי. דבר זה מציב את אספקת ה-IT כפלטפורמת תרגום מבטיחה לטיפולים עתידיים המיועדים למערכת העצבים המרכזית. כדי לתמוך במאמצי התרגום, אנו מציעים לבצע מחקרים פרה-קליניים נוספים להערכת התפוצה הפרמקוקינטית בנוזל המוח השדרה, באזורים שונים של מערכת העצבים המרכזית וקליטת תאי היעד, באמצעות טכניקות כמו היברידיזציה פלואורסצנטית במקום או אימונופלואורסצנציה.
<img alt="איור 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig1.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 1"> 
איור 1: הדמיית התפלגות צבע כחול של אוונס לאחר הזרקה תוך-אתקלית בעכברים בוגרים. Evans Blue Dye (0.5%) ניתנה באמצעות הזרקה תוך-תכלית ישירה (IT) בעכברים בוגרים כדי להעריך באופן איכותי את התפוצה של חוט השדרה. שלושה נפחי צבע שונים: 20 מיקרוליטר, 30 מיקרוליטר ו-50 מיקרוליטר סופקו בקבוצות ניסוי נפרדות (n = עכבר אחד לכל תנאי נפח). לאחר ההזרקה, חוטי השדרה נקטפו ונשטפו כדי להעריך את חדירת הצבע לפי עוצמת הצביעה לאורך הרקמה. תמונות של רקמת חוט השדרה מראות את היקף פיזור הצבע הקשור לכל נפח הזרקה, ומדגימות עלייה תלויה בנפח המינון בכיסוי ובעוצמת הצביעה בכל חוט השדרה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.</a>
<img alt="איור 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig2v2.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 2"> 
איור 2: טיפול אוליגונוקלאוטידים אנטיסנס שמכוון SOD1 משיב תפקוד מוטורי ומפחית את רמות הנוירופילמנט הפתולוגי בעכברים. עכברים טרנסגניים בוגרים SOD1-G93A קיבלו מנה אחת של אוליגונוקלאוטיד אנטיסנס פעיל המיועד ל-SOD1 (SOD1-ASO) באמצעות הזרקה תוך-תוך-תוך-חדרית (ICV) בגיל 5 שבועות, או הזרקת ASO בקרה לא פעילה באמצעות הזרקת IT. ההשפעה הטיפולית הוערכה בגיל 10 שבועות, כלומר 5 שבועות לאחר הטיפול. (א) הושגו הקלטות פוטנציאל פעולה של שריר מורכב (CMAP) להערכת תפקוד נוירומוסקולרי בבעלי חיים מטופלים. קבוצות שטופלו ב-SOD1-ASO (n = 5 - 6 לקבוצה) הראו היפוך בירידה ב-CMAP ביחס לקבוצת הביקורת, מה שמעיד על התאוששות פונקציונלית. (B) רמות פריפריאליות של שרשרת נוירופילמנט כבדה (pNFH), סמן ביולוגי של נוירודגנרציה, נמדדו מסרום שנאסף בשבוע 10 (n = 5 - 8 לכל קבוצה). טיפול ב-SOD1-ASO הוביל לירידה משמעותית ברמות pNFH במחזור בהשוואה לביקורת, מה שמרמז על החלשה של נזק נוירוני הקשור למחלה. כל הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. המובהקות הסטטיסטית נקבעה באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן ההשוואות המרובות של טוקי, כאשר ערכי p ≤ 0.0001 הצביעו על הבדלים חזקים בין קבוצות הטיפול. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig2v2large.jpg" target="_blank">אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.</a>
<img alt="איור 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig3.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 3"> 
איור 3: מתן SOD1-ASO מדכא באופן משמעותי ביטוי mRNA של SOD1 אנושי בחוט השדרה הטרנסגני של עכבר SOD1-G93A. כדי להעריך את יעילות המיקוד של אוליגונוקלאוטיד אנטיסנס (SOD1-ASO) המיועד SOD1 המועבר באמצעות הזרקה תוך-תוך-תוך-חדרית (ICV), נותח חתך צווארי ובית חזה של רקמת חוט השדרה מ-SOD1-G93A שעברו הרדמה בגיל 10 שבועות (5 שבועות לאחר ההנחה) לביטוי mRNA של SOD1 בבני אדם באמצעות תגובת שרשרת פולימראז כמותית (RT-qPCR) עם שעתוק הפוך. רמות תמלול SOD1 בבני אדם נמדדו ונרמלו ביחס לביטוי בקבוצה שטופלה ב-ASO הלא פעילה. התרשים מציג את שינוי הקפלים ב-mRNA של SOD1 אנושי (מנורמל ל-GAPDH) עבור כל קבוצת טיפול (n = 5-7 עכברים בכל קבוצה), ומדגיש ירידה משמעותית בוויסות בתגובה למתן SOD1-ASO. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. הבדלים סטטיסטיים בין קבוצות נקבעו באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA), ואחריו מבחן ההשוואות המרובות של טוקי, כאשר ערכי p ≤ 0.0001 הצביעו על הבדלים חזקים בין קבוצות הטיפול. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>רכיב</td>
			<td>FW</td>
			<td>כמות התוספת (לליטר או ק"ג)</td>
			<td>יחידות</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>נתרן פוספט מונו-בסיסי דיהידרט</td>
			<td></td>
			<td>0.034</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>נתרן פוספט די-בסיסי אנהידרוס</td>
			<td>142</td>
			<td>0.111</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>כלוריד נתרן</td>
			<td>58.44</td>
			<td>8.766</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>כלוריד אשלגן</td>
			<td>74.56</td>
			<td>0.224</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>סידן כלוריד דיהידרט</td>
			<td>147.02</td>
			<td>0.206</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>מגנזיום כלוריד הקסיהידרט</td>
			<td></td>
			<td>0.163</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>מים (מילי-קיו)</td>
			<td></td>
			<td>993</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>פולוקסאמר 188</td>
			<td></td>
			<td>0.01</td>
			<td>g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: הרכב aCSF.
איור משלים 1: מיקום העכבר להזרקה תוך-תוך-מותנית. מרית מעוקלת או סקופולה המונחת מתחת לבטן מכופפת את עמוד השדרה ומרחיבה את המרחב הבין-חולייתי. ההזרקה מכוונת לרמות L4-L5 או L5-L6, עם יישור נכון לאורך הציר המדיאלי של עמוד השדרה כפי שמוצג. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.</a>
קובץ משלים 1: רצף וכימיה של ASO. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/Supplementary%20File%201.pdf" target="_blank">אנא לחצו כאן להורדת הקובץ הזה.</a>

הזרקה תוך-ראשית מותנית של SOD1-ASO למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (CNS) ויעילות חיזוי בעכברי ALS בני אדם עם SOD1-G93A

Intrathecal (IT) administration of central nervous system (CNS)-targeted therapeutics offers a minimally invasive route for direct drug delivery into the ...

lumbar-intrathecal-injection-sod1-asos-for-precise-cns-targeting

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

השתלת מבשר עצבית היא אסטרטגיה מבטיח הגנה ו / או החלפת אבוד / נוירונים מתפקדת צוואר הרחם מנוע הסרעפת של פגיעה בחוט השדרה (SCI) לבין הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS). אנו מספקים פרוטוקול למסירה התא בחוט השדרה הצווארי קרן הגחון במודלים של מכרסמים ALS ו SCI.

Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS) נבחן קלינית התנהגותית. כתנאי ניתוח immunohistological נלווה להכנת חוט השדרה מתואר בפירוט.

בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS)

אנו מתארים שיטה למקד תרופות למערכת העצבים המרכזית או על ידי השתלת קטטר או ביצוע הזרקת בולוס לתוך החדר לרוחב הנכון בעכברים. אנו מתמקדים באופן ספציפי על המשלוח של אנטיסנס. טכניקה זו היא להתאמה בקלות לתרופות אחרות ולחולדות.

משלוח תוך חדרי ישיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית מכרסם

דו"ח זה מתאר טכניקה פשוטה ומהירה של נקב מחט intrathecal עבור transfection מקומי של siRNA בחוט השדרה המותני בעכבר תחת הרדמה קצרה אור בר קיימא.

בVivo siRNA Transfection וג&#39;ין מציאה בחוט השדרה באמצעות ראפיד פולשנית מותני intrathecal זריקות בעכברים

פרוטוקול וידאו זה מתאר שיטה רגישה, אמינה ומהירה להערכת הליקויים העצביים-שריריים במודל עכבר טרנסגני של טרשת אמיוטרופית צידית.

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS

מטרת המחקר הנוכחי הייתה לפתח ולאמת את העוצמה והבטיחות של נגיף השד הקשור ל- Adeno-9 (AAV9), באמצעות שימוש בטכניקה חדשה של מתן גנים תת-גנטי בעכברים בוגרים.

Subnial Adeno הקשורים וירוסים 9 (AAV9) וקטור משלוח ב עכברים למבוגרים

כאן אנו מציגים טכניקה הזרקה ישירה במחלה באמצעות הידרוכלוריד לידוקאין 1% פתרון ויראלי להבטיח משלוח וירוס יעיל adeno-הקשורים לבעלי חיים קטנים ולהקים מערכת הניקוד לחזות התמרה חושית יעילות המרכזי מערכת העצבים על פי מידת חולשה חולפת הנגרמת על ידי לידוקאין.

במחלה ישירה הזרקה של וירוסים Adeno-הקשורים רקומביננטי בעכברים מבוגרים

כאן, אנו מתארים שיטה להעברת תרופות למערכת העצבים המרכזית העכברוש על ידי שתילת קטטר לתוך החלל המותני הפנימי של עמוד השדרה. אנו מתמקדים במסירת מחלת האנטי-הגיונית, למרות ששיטה זו מתאימה גם לאספקה של שיטות טיפוליות אחרות.

משלוח פנימי של אנטי-סנס וליגונו, במערכת העצבים המרכזית של חולדה

מתואר הליך כירורגי לביצוע זריקות לתוך בור המים המותני של החולדה הצעירה. גישה זו שימשה להעברה תוך-תאית של וקטורים של ריפוי גנטי, אך צפוי כי גישה זו תוכל לשמש למגוון טיפולים, כולל תאים ותרופות.

משלוח וקטורי תוך-תאי בחולדות צעירות באמצעות הזרקת בור מים מותני

זריקה תוך-מותנית מייצגת דרך מתן רלוונטית לתרגום למתן טיפול גנטי למערכת העצבים המרכזית. פרוטוקול סטנדרטי מקיף זה לזריקות תוך-מותניות בעכברים וחולדות בילודים, צעירים ובוגרים נועד להנחות חוקרים באימוץ טכניקה זו למחקרי ריפוי גנטי פרה-קליניים.

הזרקה תוך-מותנית של וקטורים של ריפוי גנטי למיקוד מערכת העצבים המרכזית בעכברים וחולדות

למדו שיטת הזרקה תוך-ראשית מותנית חופשית-יד לעכברים לשחרור תרופות ישירות לנוזל המוח והשדרה. השיטה הוכחה במודל עכברי ALS עם SOD1-ASO והראתה ירידה של כ-60% ב-RNA של SOD1 בעמוד השדרה.

הזרקה תוך-ראשית מותנית של SOD1-ASO למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (CNS) ויעילות חיזוי בעכברי ALS בני אדם עם SOD1-G93A

גלה סרטונים נוספים