Name: בדיקת ניטרול הפחתת פלואורסצנציה של נגיף הפטיטיס E למדידת טיטרים של נוגדנים מנטרלים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-22T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: למד את שיטת FRNT לבדיקת ניטרול נגיף הפטיטיס E באמצעות תאי Huh7 וצביעה אימונופלואורסצנטית. השיטה מאפשרת חישוב טיטר NT50 של נוגדנים מנטרלים לפיתוח חיסונים וטיפולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Smith, D. B., et al. International Committee on Taxonomy of Viruses Hepeviridae Study Group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+proposals+for+classification+of+the+family+Hepeviridae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Consensus proposals for classification of the family Hepeviridae.</a> J Gen Virol. 95 (Pt 10), 2223-2232 (2014).</li>
<li>Nan, Y., Zhang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+and+infection+of+hepatitis+E+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular biology and infection of hepatitis E virus.</a> Front Microbiol. 7, 1419(2016).</li>
<li>Kamar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+E+virus+and+chronic+hepatitis+in+organ-transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Hepatitis E virus and chronic hepatitis in organ-transplant recipients.</a> N Engl J Med. 358 (8), 811-817 (2008).</li>
<li>Purcell, R. H., Emerson, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+E%3A+An+emerging+awareness+of+an+old+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis E: An emerging awareness of an old disease.</a> J Hepatol. 48 (3), 494-503 (2008).</li>
<li>Nimgaonkar, I., Ding, Q., Schwartz, R. E., Ploss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+E+virus%3A+Advances+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis E virus: Advances and challenges.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 15 (2), 96-110 (2018).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Hepatitis+E%22">Hepatitis E</a>. , WHO. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-e">https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-e</a> (2025).</li>
<li>Songtanin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+E+virus+infections%3A+Epidemiology%2C+genetic+diversity%2C+and+clinical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Hepatitis E virus infections: Epidemiology, genetic diversity, and clinical considerations.</a> Viruses. 15 (6), 1389(2023).</li>
<li>Lee, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+infection+with+camelid+hepatitis+E+virus+in+a+liver+transplant+recipient+who+regularly+consumes+camel+meat+and+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic infection with camelid hepatitis E virus in a liver transplant recipient who regularly consumes camel meat and milk.</a> Gastroenterology. 150 (2), 355-357 (2016).</li>
<li>Zhou, Z., Xie, Y., Wu, C., Nan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hepatitis+E+virus+open+reading+frame+2+protein%3A+Beyond+viral+capsid%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The hepatitis E virus open reading frame 2 protein: Beyond viral capsid.</a> Front Microbiol. 12, 739124(2021).</li>
<li>Nair, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+induced+synthesis+of+a+novel+viral+factor+mediates+efficient+replication+of+genotype-1+hepatitis+E+virus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress induced synthesis of a novel viral factor mediates efficient replication of genotype-1 hepatitis E virus.</a> PLoS Pathog. 12 (4), e1005521(2016).</li>
<li>Meister, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+systems+for+the+study+of+hepatitis+E+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">Cell culture systems for the study of hepatitis E virus.</a> Antiviral Res. 163, 34-49 (2019).</li>
<li>Fu, R. M., Decker, C. C., Dao Thi, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+models+for+hepatitis+E+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Cell culture models for hepatitis E virus.</a> Viruses. 11 (7), 608(2019).</li>
<li>Kaushik, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+salts+block+hepatitis+E+virus+replication+by+inhibiting+the+activity+of+viral+RNA-dependent+RNA+polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Zinc salts block hepatitis E virus replication by inhibiting the activity of viral RNA-dependent RNA polymerase.</a> J Virol. 91 (21), 10-1128 (2017).</li>
<li>Gupta, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+activity+of+zinc+oxide+nanoparticles+and+tetrapods+against+the+Hepatitis+E+and+Hepatitis+C+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antiviral activity of zinc oxide nanoparticles and tetrapods against the Hepatitis E and Hepatitis C viruses.</a> Front Microbiol. 13, 881595(2022).</li>
<li>Ansari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+controllability+analysis+reveals+the+antiviral+potential+of+Etravirine+against+hepatitis+E+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22mSystems%22%5BJournal%5D)">Network controllability analysis reveals the antiviral potential of Etravirine against hepatitis E virus infection.</a> mSystems. 10 (9), e00438-25(2025).</li>
<li>Gremmel, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+E+virus+neutralization+by+porcine+serum+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis E virus neutralization by porcine serum antibodies.</a> J Clin Microbiol. 61 (11), e00373-23(2023).</li>
<li>Cai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+neutralizing+assay+for+antibodies+and+sera+against+hepatitis+E+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A high-throughput neutralizing assay for antibodies and sera against hepatitis E virus.</a> Sci Rep. 6 (1), 25141(2016).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+high-throughput+neutralization+assay+for+hepatitis+E+virus+%28HEV%29+involving+detection+of+secreted+Porf2%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">An optimized high-throughput neutralization assay for hepatitis E virus (HEV) involving detection of secreted Porf2.</a> Viruses. 11 (1), 64(2019).</li>
<li>Meng, J., Dubreuil, P., Pillot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+PCR-based+seroneutralization+assay+in+cell+culture+for+diagnosis+of+hepatitis+E%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A new PCR-based seroneutralization assay in cell culture for diagnosis of hepatitis E.</a> J Clin Microbiol. 35 (6), 1373-1377 (1997).</li>
<li>Emerson, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neutralization+epitopes+and+broad+cross-genotype+neutralization+of+Hepatitis+E+virus+confirmed+by+a+quantitative+cell-culture+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Putative neutralization epitopes and broad cross-genotype neutralization of Hepatitis E virus confirmed by a quantitative cell-culture assay.</a> J Gen Virol. 87 (3), 697-704 (2006).</li>
<li>Deshmukh, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+candidate+hepatitis+E+virus+DNA+vaccine+expressing+complete+and+truncated+ORF2+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of candidate hepatitis E virus DNA vaccine expressing complete and truncated ORF2 in mice.</a> Vaccine. 25 (22), 4350-4360 (2007).</li>
<li>Gupta, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression%2C+purification+and+characterization+of+the+hepatitis+E+virus+like-particles+in+the+Pichia+pastoris%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Expression, purification and characterization of the hepatitis E virus like-particles in the Pichia pastoris.</a> Front Microbiol. 11, 141(2020).</li>
<li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+Reduction+Neutralization+Test%3A+A+novel%2C+rapid%2C+and+efficient+method+for+characterizing+the+neutralizing+activity+of+antibodies+against+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Issues+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence Reduction Neutralization Test: A novel, rapid, and efficient method for characterizing the neutralizing activity of antibodies against dengue virus.</a> Curr Issues Mol Biol. 47 (3), 140(2025).</li>
<li>Bewley, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+SARS-CoV-2+neutralizing+antibody+by+wild-type+plaque+reduction+neutralization%2C+microneutralization+and+pseudotyped+virus+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by wild-type plaque reduction neutralization, microneutralization and pseudotyped virus neutralization assays.</a> Nat Protoc. 16 (6), 3114-3140 (2021).</li>
<li>Islam, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+against+the+Japanese+encephalitis+virus+are+produced+by+a+12%C3%A1kDa+E+coli+expressed+envelope+protein+domain+III+%28EDIII%29+tagged+with+a+solubility-controlling+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies against the Japanese encephalitis virus are produced by a 12ákDa E coli expressed envelope protein domain III (EDIII) tagged with a solubility-controlling peptide.</a> Vaccine. 56, 127143(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL microfuge tubes</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>12-well cell culture dish</td><td>Corning</td><td>3512</td><td></td></tr><tr><td>37 degree incubator shaker</td><td>Thermo Scientific</td><td>50163013</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylindole</td><td>Abcam</td><td>AB104139</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>50mL centrifuge tube</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>6-well cell culture dish</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Alexa flour 594 secondary IgG Antibody</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11012</td><td></td></tr><tr><td>Anti-ORF2 antibody</td><td>Genscript</td><td>NA</td><td>Custom synthesized by Genscript and characterized in our laboratory14</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG antibody</td><td>Genscript</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>HIMEDIA</td><td>MB083</td><td>BSA</td></tr><tr><td>Confocal microscope</td><td>Olympus</td><td>FV3000</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, high glucose</td><td>HIMEDIA</td><td>AL007A</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>GIBCO</td><td>16000-044</td><td>FBS</td></tr><tr><td>ImageJ 1.54g</td><td>ImageJ.org (Wayne Rasband and contributors, NIH, USA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>HIMEDIA</td><td>RM-10701</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>HIMEDIA</td><td>GRN3660</td><td>PFA</td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Saline pH 7.4</td><td>HIMEDIA</td><td>TL1006</td><td>PBS</td></tr><tr><td>Polyethyleneglycol 6000</td><td>SIGMA</td><td>81255</td><td>PEG6000</td></tr><tr><td>SOLIScript 1-step Probe Kit</td><td>SOLIS BIODYNE</td><td>08-57-00250</td><td></td></tr><tr><td>TRI reagent</td><td>Molecular Research Centre</td><td>TR118</td><td></td></tr><tr><td>Triton X100</td><td>SIGMA</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>GIBCO</td><td>25300-54</td><td></td></tr></tbody></table>

בדיקת ניטרול הפחתת פלואורסצנציה של נגיף הפטיטיס e למדידת טיטרים של נוגדנים מנטרלים

Hepatitis E Virus Fluorescence Reduction Neutralization Test for Measuring Neutralizing Antibody Titers

בדיקת ניטרול הפחתת פלואורסצנציה של נגיף הפטיטיס E למדידת טיטרים של נוגדנים מנטרלים

Virus neutralization assay measures the neutralization potential of an antibody or a mixture of antibodies against the corresponding virus. It is a ...

hepatitis-e-virus-fluorescence-reduction-neutralization-test-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים בדיקות מיקרו-נטרול למדידת נוגדנים מנטרלים באמצעות תאי כליות כלבים Madin-Darby המבטאים יתר על המידה חומצה סיאלית מקושרת α2,6 בסרה. בדיקה זו משמשת לעתים קרובות עבור סרולוגיה אנושית...

בדיקת מיקרו-נטרול למדידת נוגדנים מנטרלים בסרום אנושי

סרטון זה מדגים בדיקה המודדת שפעת נוירמינידז (NA) המעכבת טיטרים נוגדנים בדגימת סרום. דגימת סרום המכילה נוגדנים נגד NA מתווספת לצלחת מיקרווול מצופה פטואין. עם הוספת הנגיף, הנוגדנים מונעים מ-NA נגיפי לנתק את הפטואין ולחשוף את הגלקטוז שלו. לאחר מכן מוסיפים לקטין מצומד פרוקסידז, שנקשר לגלקטוז החשוף. טיטר נוגדנים מעכבי NA נקבע באמצעות בדיקה קולורימטרית, שבה מצע פרוקסידאז נבקע על ידי פרוקסידאז מצומד לקטין משותק כדי לייצר צבע.

בדיקה למדידת נוגדנים מעכבי שפעת Neuraminidase Inhibition Titers

סרטון זה מדגים בדיקת immunofluorescence שנועדה למדוד את נטרול נגיף הציטומגלווירוס האנושי (HCMV). נוגדנים ספציפיים לווירוס מעורבבים עם הנגיף ומודגרים עם תאי פיברובלסט אנושיים. הנוגדנים מנטרלים את הנגיף, והופכים אותו ללא מסוגל להדביק את התאים המארחים, בעוד נגיפים שאינם מנוטרלים מדביקים את התאים. לאחר הדגירה, מידת הנטרול נקבעת על ידי כימות התאים הנגועים בנגיף באמצעות אימונופלואורסנציה.

שיטה immunofluorescence למדוד את נטרול של cytomegalovirus אנושי

סרטון זה מציג בדיקת נטרול המודדת את יעילות הסרום בנטרול נגיפי SARS-CoV-2. הוא כולל וירוסים פסאודוטייפים, דילול בסרום וכימות מבוסס לומינסנציה, החושף את טיטר הניטרול.

הערכת נוגדנים מנטרלים פונקציונליים של SARS-CoV-2

אנו מתארים את בדיקת הלקטין המקושרת לאנזים (ELLA) למדידת טיטר נוגדנים לעיכוב שפעת נויראמינידאז (NA) ב-sera. הבדיקה משתמשת באגלוטינין בוטנים כדי לכמת שאריות גלקטוז שהופכות לנגישות כאשר NA מסיר חומצה סיאלית מצלחות מצופות פטואין, 96 בארות.

מדידת טיטר נוגדנים עיכוב Neuraminidase שפעת ידי enzyme-linked Assay לקטינים

מחקר זה מתאר   מבוססי הדמיה assay מיקרו-נטרול לנתח את היחסים בין אנטיגני וירוסים. פרוטוקול מעסיקה וסורק ויש לו ארבעה שלבים, כולל טיטרציה, quantitation טיטרציה, נטרול, ו quantitation הניטרול. את assay עובד היטב עם שפעת A במחזור הנוכחי (H1N1) pdm09, A (H3N2), ווירוסים B.

אופטימיזציה של Assay כמותי מיקרו-נטרול

אנו מתארים שיטה שבאמצעותה אנו מזהים שאריות קריטי הנדרש עבור האיגוד של נוגדנים חד-שבטיים אנושית או מאתר שמכוונות את hemagglutinin נגיפי שפעת A וירוסים. הפרוטוקול ניתן להתאים glycoproteins משטח אחר וירוס, נוגדנים נטרול המתאימים שלהם.

דור של בריחה וריאציות של נטרול נוגדנים חד-שבטיים של וירוס שפעת

נוגדנים נטרול שפעת לתאם עם הגנה של דלקות שפעת. מבחני Microneutralization למדוד נוגדנים נטרול של sera אנושי, משמשים לעתים קרובות על שפעת אנושית סרולוגיה. אנו מתארים וזמינותו של microneutralization באמצעות MDCK-SIAT1 תאים כדי למדוד נטרול נוגדן titers עכשווי וירוסים A(H3N2) 3C.2a ו- 3C.3a בעקבות חיסון שפעת או זיהום.

מבחני מדידת שפעת בנטרול תגובות נוגדנים וירוסים A(H3N2) סרה האנושי על-ידי Microneutralization באמצעות תאים MDCK-SIAT1

כאן אנו מציגים שיטה cytometry זרימה מבוססת תא לזהות נוגדנים נטרול או גורמים אחרים להפריע קליטת סלולר הנובעים מהשימוש בתחליפי האנזים במטריצה אנושי, כגון לנוזל חוט השדרה (CSF) או בנסיוב אדם.

זיהוי נוגדנים המנטרלים את קליטת סלולר הנובעים מהשימוש בתחליפי האנזים עם Assay מבוססת-תא

מתוארים כאן היא שיטה יעילה כיצד לייצר מניות סיכוייו גבוהה ויראלי של וירוס הפטיטיס E (האוהב) כדי להדביק ביעילות תאים hepatoma. עם השיטה המוצגת, הן לא מעטפת, כמו גם חלקיקים ויראלי מעטוף ניתן לקצור ומשמש לצורך הצגת קווי תאים שונים.

מודל תרבות התא להפקת צהבת מניות וירוס מסוג Titer גבוהה

כאן אנו מתארים פרוטוקול לאריזת פסאודו-וירוס ולמדידת פעילות נטרול נוגדנים.

הכנת נגיפי שפעת העופות H5 מסוג פסאודו עם שיטת העברת סידן פוספט ומדידת פעילות נטרול נוגדנים

למד את שיטת FRNT לבדיקת ניטרול נגיף הפטיטיס E באמצעות תאי Huh7 וצביעה אימונופלואורסצנטית. השיטה מאפשרת חישוב טיטר NT50 של נוגדנים מנטרלים לפיתוח חיסונים וטיפולים.

בדיקת ניטרול הפחתת פלואורסצנציה של נגיף הפטיטיס E למדידת טיטרים של נוגדנים מנטרלים

גלה סרטונים נוספים