מערך מערך מיקרו-מחטים הממוסס המיוצר בטכניקת יציקת ממס ואפיון חיוני של מכשירים ביומדיים מבוססי מיקרו-מחטים

המחקר שלנו מתמקד בעיקר באופטימיזציה של מתן תרופות לעור באמצעות ננו ומיקרוסיסטמות, כגון מכשירים מבוססי מיקרו-מחטים. מחקר זה מציע שיטה ישימה וניתנת לשחזור להכנת מחטים מיקרו-ממיסות. כדי להתחיל, יש להכין את הפיזור הקולואידי המימי של החומרים המרכיבים את DMAPs, על ידי המסה בכמות המים המתאימה.

ערבבו את התערובת בעוצמה כדי לקבל פיזור אחיד. אפשרו לפולימרים לערבב מינימום במהלך הלילה כדי להגיע לפיזור מלא, ותנו לבועות האוויר להתפזר במהלך תקופת הערבוב הארוכה הזו. אם בועות האוויר ממשיכות, יש לצנטריפוגה את הפיזור הפולימרי בטמפרטורה של 1000 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.

הוסף את המטען בריכוז הרצוי לתוך הפיזור הפולימרי, וערבב את התערובת במתינות עד שהיא הופכת להומוגנית מבלי לשלב בועות אוויר חדשות. כעת, כדי להכניס את התבניות לבארות, השתמשו בחימר מודלינג או מלט דנטלי, והשליכו את תבניות ה-PDMS לפלטת 12 הבארות. לאחר מכן, יצוק 20 מיקרוליטר של תערובת פולימרית טעונה על תבניות ה-PDMS.

הנח את הפלטה בצנטריפוגה, וסובב בטמפרטורה של 3000 גרם במשך חמש דקות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. עכשיו, סובבו את הפלטה ב-180 מעלות, וחזרו על הצנטריפוגה כדי להבטיח מילוי כל החללים הדמויי מחטים. לאחר מכן, באמצעות פיפטה, הסר בזהירות את עודף הפיזור הפולימרי הטעון בתרופות מהתבניות.

ייבשו את הפיזור הפולימרי הטעון בתבניות על ידי הנחתם תחת ואקום בעוצמה של 600 מיליבר למשך 30 דקות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. הכינו פיזור פולימרי מרוכז מאוד, ללא תרופות, ליצירת לוח הבסיס של מכשיר ה-DMAP. ודא שהפיזור הומוגני לפני השימוש.

לאחר מכן, יצוק 50 מיקרוליטר של פיזור פולימרי ללא תרופה על תבניות ה-PDMS. הנח את הפלטה בצנטריפוגה וסובב פעמיים, כולל סיבוב של 180 מעלות. לאחר הצנטריפוגה, מוסיפים 100 מיקרוליטר של פיזור לכל תבנית, ולאחר מכן 50 מיקרוליטרים נוספים לפלטת הבסיס לאחר 12 שעות.

השאירו את ה-DMAPs בתבניות ה-PDMS לייבוש במשך שלושה עד חמישה ימים בטמפרטורת החדר במייבש אטם יבש. הסר בזהירות את ה-DMAPs מתבניות ה-PDMS באמצעות מלקחיים. חלופה נוספת היא לקלף את ה-DMAPs מהתבניות באמצעות סרט סלולוזה סקוטי.

לשיטת הלחץ החיובי, יצוק 150 מיקרוליטר של תערובת פולימרית טעונה על תבניות PDMS, ומניח אותן במיכל לחץ. מלא את מיכל הלחץ באוויר עד שהוא מגיע ללחץ בין שלושה לארבעה בר. שמור על לחץ זה לפחות 15 דקות.

המחישו את ה-DMAPs באמצעות מיקרו-מצלמה עם הגדלה מתאימה להבחנה בין ההקרנות הדמויות מחט. כוון את הפוקוס כדי לפתור בבירור את המחטים המיקרו-בודדות. לאחר מכן, חבר את ה-DMAPs למכשיר תמיכה כדי להמחיש את המורפולוגיה ואורך ההקרנות הדמויות מחט באמצעות מיקרוסקופיה אופטית.

הערך את התכונות המכניות של DMAPs על ידי הנחת המכשיר במכשיר DMAPs זמין מסחרית. דחסו את האפליקטור על משטח שטוח מפלדת אל-חלד למשך 30 שניות. לאחר הדחיסה, יש לתעד את אורך ההקרנות הדמויות מחט מיקרו ולחשב את אחוז העיוות על ידי השוואת האורך לפני ואחרי הדחיסה.

לאחר מכן, קבעו את קיבולת ההחדרה הראשונית של ה-DMAPs באמצעות שיטת עור מלאכותי חלופית המבוססת על יריעות תרמופלסטיות מחומר מסוג אולפין. דחסו את מכשיר ה-DMAPs על שמונה לוחות קשורים באמצעות אותם תנאי דחיסה המופעלים על פני הפלדה אל-חלד. כעת, קבעו את קיבולת ההחדרה מחוץ לחי של DMAPs באמצעות פרשות עור אדם, חזיר או מכרסמים שנלקחו בעבר ונחתכו בקפידה.

נקה את תעלת העור על ידי השריה במים רבים למשך דקה עד שתיים. הנח את החלק הנקי של העור על חומר קצף עטוף בנייר אלומיניום, כאשר צד השכבה פונה כלפי מעלה. המשך בהכנסה באמצעות אותם תנאי דחיסה שתוארו קודם.

השאירו את ה-DMAPs מוכנסים לעור עד להמסה של קצות המחטים, וצפו בכך שהמכשיר נשאר במגע עם העור בזמן ההפיסה. קבעו את ההפקדה והספיגה של תרופות ex vivo בעור באמצעות מערכת תאי פרנץ-דיפוזיה. הכינו את ה-explant של העור באמצעות הליך הגיזום והניקוי שתואר קודם, והכניסו את ה-DMAPs למבנה העור למשך 30 שניות.

הדביקו את תא התורם של תא פרנץ-דיפוזיה לעור באמצעות כמות מתאימה של ציאנואקרילאט. אפשר לדבק להתייבש לחלוטין, ואז לחבר את קומפלקס תא תורם העור לתא הקולטן באמצעות מהדקים מתאימים. לבסוף, יש להמשיך בדגימה לפי פרוטוקול תא הדיפוזיה הסטנדרטי.

DMAPs מיוצרים הציגו מראה הומוגני עם יצירת הקרנות מיקרו-מחטים מוצלחות, וצבע הצבע היה ממוקם בתוך ההקרנות, כאשר לוח הבסיס נשאר נקי מתרופות. מיקרוסקופיה אופטית חשפה כי בליטות דמויות מחט מיקרו היו בעלות קצה חד וללא עיוות לפני הדחיסה. לאחר הדחיסה, הקרנות דמויות מחט מיקרו הראו עיוות נראה לעין במבנה.

במודל עור מלאכותי, DMAPs חדרו בהצלחה את היריעה התרמופלסטית ויצרו חורים גלויים. מספר החורים שנוצרו בשכבות השונות של מודל התרמופלסטי היה תואם לעומק החדרת המחטים המיקרו. הערות עור עכברים מחוץ לחי הראו צביעה הדרגתית של שכבות העור הפנימיות לאחר ההחדרה, בהתאם להתמוססות DMAP לאורך זמן.

בדיקה היסטולוגית עם צביעת המטוקסילין אאוזין, אישרה החדרה של בליטות דמויות מחט לחלקי העור. מערכת תאי פרנץ-דיפוזיה שימשה להערכת דיפוזיה של תרופות דרך תערובת עור, עם ויזואליזציה ברורה של תא התורם, העור ותא הקולטנים. פרוטוקול זה מספק הנחיה יסודית לייצור מכשירי מחט מיקרו-נמסים, המאפשר לחוקרים לחקור את העיצוב, הביצועים והפוטנציאל הביו-רפואי שלהם.

אתגר מרכזי הוא להבטיח תאימות מטען למטריצת הפולימר. מטענים מסוימים עלולים להפריע לתכונות החומר או לפגוע בביצועי המחטים. מחקרים עתידיים יוכלו להתאים את הפרוטוקול הזה לתרופות ופולימרים ספציפיים, לאופטימיזציה של הכנת מחטים מיקרו, ולהרחיב את היישומים בשימושים טיפוליים וביו-רפואיים.