Name: הערכה קולורימטרית של פעילות דיאודינאז 1 במיקרוזומי כבד אנושי באמצעות תגובת סנדל-קולטהוף (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: למדו הערכה קולורימטרית של פעילות דיאודינאז 1 במיקרוזומי כבד אנושי באמצעות תגובת סנדל-קולטהוף. שיטה זו מאפשרת זיהוי חומרים המפריעים להומאוסטזיס הורמוני בלוטת התריס בבדיקות רעילות מכניסטיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-תיו-&בטא;-D-גלוקוז, מלח נתרן</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3',5'-טריאודותירונין (rT3)&nbsp;</td><td>ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז</td><td>SC-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-פרופיל-2-תיוראציל (6PTU)</td><td>סופלקו</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>תרמו פישר</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>איזון אנליטי</td><td>NA</td><td>NA</td><td>מסוגל לשקול בדיוק עד 30 גרם עם קריאות של 0.1 מ"ג</td></tr><tr><td>תחמוצת נתרן ארסן (NaAsO2)</td><td>תרמו פישר</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>לוחות בדיקה (פורמט 96 בארות)</td><td>מרק</td><td>Z707902-108EA</td><td>לדוגמה, לוחות תרבית רקמה, לוח 96 בארות, תחתית שטוחה, פוליסטירן, 0.34 ס"מ רבוע, סטרילי, 108/cs, TPP</td></tr><tr><td>אורותיוגלוקוז (ATG)</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה 15 ו-50&nbsp; mL</td><td>מרק</td><td>Z707724-800EA, Z707716-320EA</td><td>לדוגמה, צינורות צנטריפוגות TPP, נפחים 15 ו-50 מ"ל, פוליפרופילן, &nbsp;</td></tr><tr><td>צנטריפוגה עם רוטור מתנדנד החוצה לפלטות מיקרוטיטר</td><td>NA</td><td>NA</td><td>צריך להיות גבוה מספיק כדי להכיל לוח באר בעומק 96 עם לוח סינון של 96 בארות למעלה (לפחות כ-6 ס"מ גובה)</td></tr><tr><td>סריום (IV) אמוניום סולפט (Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>חממת CO2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>מסוגל לשמור על טמפרטורות של 37&°G; C, 5% CO2 ו-&GE; 90% לחות</td></tr><tr><td>לוחות באר עמוקים (פורמט 96 בארות)</td><td>סופלקו</td><td>575653-U</td><td>לדוגמה, לוח איסוף באר ריבועי SPE 96 עמוק, נפח באר 2 מ"ל, פוליפרופילן</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672,0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>דיתיותרייטול (DTT)</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>אתילנדיאמינטרטראאצטית (EDTA)&nbsp;</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>לוחות סינון (פורמט 96 בארות)</td><td>מרק</td><td>WHA77002810</td><td>לדוגמה: מיקרו-פלטות, 96 בארים, פוליסטירן שקוף, 800 ומיקרו; L, קישור DNA, וואטמן</td></tr><tr><td>אטמי לוחות אטומים לגז</td><td>תרמו פישר</td><td>232698</td><td>לדוגמה: סרט איטום, פוליאסטר, סטרילי, סרט איטום, פוליאסטר, סטרילי, Nunc</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>פאן ביוטק</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>מיקרוסומי כבד אנושי</td><td>ביוויט</td><td>X008070</td><td>לדוגמה, מיקרוסופים של כבד כבד אנושי שנאספו על ידי תורמים INVITROCYP 150</td></tr><tr><td>יודיד (תקן IC)</td><td>סופלקו</td><td>41271-100ML</td><td>לדוגמה, תקן יודיד ל-IC, 1000 מ"ג/ליטר במים, סיגמא-אלדריץ'</td></tr><tr><td>שרף להחלפת יונים כמו Dowex 50WX2</td><td>רות'</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2; רשת 100-200</td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה 1.5&nbsp; mL</td><td>מרק</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>לדוגמה: Eppendorf&reg; צינורות מיקרוצנטריפוגה עם נעילה בטוחה, נפח 1.5 מ"ל, טבעי</td></tr><tr><td>מפיץ רב-ערוצי המסוגל לספק 50 עד 300 ו-nbsp; &; L לכל שלב</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>פיפטה רב-ערוצית המסוגלת לספק בין 10 ל-100&nbsp; &; L לכל שלב</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>מד pH עם אלקטרודות ובופרי כיול</td><td>NA</td><td>NA</td><td>מסוגל לקרוא +/- יחידות pH של 0.1</td></tr><tr><td>פוטומטר למדידת ספיגה</td><td>Tecan Trading AG</td><td>NA</td><td>לדוגמה, קורא ספיגת זריחה, INSTSUN-3</td></tr><tr><td>פיפטים המסוגלים לספק 1 עד 10&nbsp; &; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>פיפטים המסוגלים לספק 10 עד 100&nbsp; &; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>פיפטים המסוגלים לספק בין 100 ל-1000 ו-nbsp; &; L&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>פיפטים לנפחים גבוהים יותר</td><td>NA</td><td>NA</td><td>פיפטות סרולוגיות, למשל 10, 25, 50 מ"ל</td></tr><tr><td>מנער פלטות</td><td>תרמו פישר</td><td>NA</td><td>לדוגמה, לוח מיקרוטיטר Thermo Scientific H+P MONOSHAKE VORTEXER, נשלט ישירות</td></tr><tr><td>פיפטת משחזר</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>נתרן כלוריד (NaCl)</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>S9888-25G</td><td>CAS: 7647-14-5, לדוגמה נתרן כלורי, תגובת ACS, &ge; 99.0 %</td></tr><tr><td>תוכנת סטטיסטיקה</td><td>NA</td><td>NA</td><td>מסוגל לבצע ניתוח רגרסיה המשקף מאפייני בדיקה ויכולת לחשב ריכוזים מעכבים, למשל GraphPad Prims 8, GraphPad</td></tr><tr><td>חומצה גופרתית (H2SO4)&nbsp;</td><td>סופלקו</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>בקבוק וולומטרי</td><td>NA</td><td>NA</td><td>מוסמך בנפח מוגדר</td></tr></tbody></table>

הערכה קולורימטרית של פעילות דיאודינאז 1 במיקרוזומי כבד אנושי באמצעות תגובת סנדל-קולטהוף

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

colorimetric-assessment-deiodinase-1-activity-human-liver-microsomes

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

הפעילות של decarboxylase ועין מתנהלת ליזין מנוטר על ידי מגיבים המצע L-ליזין לבין המוצר קדברין עם חומצה 2,4,6 trinitrobenzensulfonic-לטופס adducts כי יש מסיסות ההפרש ב טולואן.

Assay למדידת פעילות Escherichia coli ועין מתנהלת ליזין Decarboxyase

בסרטון זה, אנו מתארים שיטה מבוססת קולורימטריה לקביעת תכולת ברזל שאינה הם ברקמת כבד עכבר. Bathophenanthroline sulfonate משמש כמצע כרומוגני בנוכחות סוכן חיזור, אשר ממיר ברזל ברזל ברזל ברזל chelatable.

בדיקת Colorimetric מבוססת Bathophenanthroline Sulfonate: שיטה פשוטה ומהירה לכימות ברזל שאינו הם ברקמת כבד עכבר

מאמר זה מציג עבודה תוכן גבוהה מיקרוסקופ לכימות בו זמנית של רמות ROS תאיים, כמו גם פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריה ומורפולוגיה - המכונים במשותף כמו morphofunction המיטוכונדריה - בתאים חסיד חיים באמצעות מולקולרית פלואורסצנטי חוברת מולקולות כתב 5- (ו - 6) -כלורומיליל -2 ', 7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, אסתר אצטיל (CM-H 2 DCFDA) ו tetramethylrhodamine methylester (TMRM).

התאוששות נייד באמצעות פרופילים תוכן גבוהה מיקרוסקופית

מיומנות מטבולית של מערכות במבחנה ב הוא דרישת מפתח עבור biotransformation ומכירה של סמים toxicants. בפרוטוקול זה, אנו מתארים את היישום של בדיקות מטבוליות התייחסות להעריך בשלב שאני המטבוליזם בתרביות תאים.

ספקטרומטריית מסה וגישות מבוססי Luminogenic לאפיון שלב I מטבולית כשירות של<em&gt; במבחנה</em&gt; תא תרבויות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול זה יכול לשמש כדי להמחיש ולכמת פעילות של dehydrogenases, תאים, רקמות, קינטיקה, הפונקציה והאטרקציות לוקליזציה subcellular ברמה המיקרוסקופית.

מיפוי מטבולית: אנזים כמותית Cytochemistry ו להסטולוגיה כדי לקבוע את הפעילות של Dehydrogenases של תאים ורקמות

אנו מתארים פרוטוקול זמן התגובה. ממפה את התפוצה המרחבית של אנזימטי לפעילות אנזימים המייצרים nicotinatmide אדנין dinucleotide פוספט (NAD(P)H) + H + ישירות בדגימות רקמה.

מיפוי החומרים: פיקוח על פעילות לקטט דהידרוגנאז ישירות בתוך הרקמה

כאן מתואר פרוטוקול המאומת היטב ופשוט למדידת נפח פעילות פחמיות autophagic בתרבית של תאים. השיטה מבוססת על לכימות שחלקן של לקטט דהידרוגנאז (LDH) בחלקים תא sedimentable, לעומת סה כ רמות LDH הסלולר.

לקטט דהידרוגנאז פחמיות וזמינותו — שיטה פשוטה ואמינה לקביעת נפח פעילות פחמיות Autophagic בתאים בתרבית

כאן, פרוטוקול למדידת התוכן ברזל שאינו heme ברקמות בעלי חיים מסופק, באמצעות בדיקה צבעונית פשוטה ומבוססת היטב שניתן ליישם בקלות ברוב המעבדות.

מדידה של תוכן ברזל רקמות שאינן Heme באמצעות בדיקת צבע מבוססת Bathophenanthroline

ספרואידים רב-תאיים של גידולים תלת-ממדיים הוכנו עם תאי אדנוקרצינומה של הריאה, פיברובלסטים ומונוציטים, ולאחר מכן בידוד של פיברובלסטים הקשורים לסרטן (CAFs) מהספרואידים האלה. CAFs מבודדים הושוו לפיברובלסטים רגילים כדי להעריך את בריאות המיטוכונדריה על-ידי חקירת הפוטנציאל הטרנס-ממברני של המיטוכונדריה, מיני חמצן תגובתי ופעילויות אנזימטיות.

הערכה של בריאות המיטוכונדריה בפיברובלסטים הקשורים לסרטן שבודדו מספרואידים של גידולי ריאה רב-תאיים תלת-ממדיים

במאמר זה אנו מציגים אוסף של בדיקות למדידה ישירה של תפקוד המיטוכונדריה בתאי יונקים ללא תלות ביכולתם לצרוך חמצן מולקולרי.

בדיקות שאינן תלויות בחמצן למדידת תפקוד המיטוכונדריה ביונקים

פרוטוקול זה מתאר שיטה חדשנית לכימות מיני חמצן תגובתי תוך-תאי (ROS) באמצעות דיהידרואתידיום (DHE) כבדיקת צבע פלואורסצנטי באמצעות גישת סינון בתפוקה גבוהה. הפרוטוקול מתאר את השיטות להערכה כמותית של מיני חמצן תגובתי תוך-תאי (ROS) בשלושת קווי תאי הקרצינומה ההפטוצלולרית השונים.

הערכת סינון בתפוקה גבוהה של ייצור מיני חמצן תגובתי (ROS) באמצעות צבע פלואורסצנטי Dihydroethidium (DHE)

למדו הערכה קולורימטרית של פעילות דיאודינאז 1 במיקרוזומי כבד אנושי באמצעות תגובת סנדל-קולטהוף. שיטה זו מאפשרת זיהוי חומרים המפריעים להומאוסטזיס הורמוני בלוטת התריס בבדיקות רעילות מכניסטיות.

הערכה קולורימטרית של פעילות דיאודינאז 1 במיקרוזומי כבד אנושי באמצעות תגובת סנדל-קולטהוף

גלה סרטונים נוספים