Name: ייצור וטיהור רקומביננטי של הידרופובין SC16 מאשריציה קולי ומעקב אחר ההרכבה העצמית שלו באמצעות בדיקות פלואורסצנציה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: למד ייצור וטיהור רקומביננטי של הידרופובין SC16 מ-Schizophyllum commune ב-Escherichia coli תחת תנאים נייטרליים ללא חומרים מחזרים. השתמש בבדיקות פלואורסצנציה עם thioflavin T כדי לעקוב אחר הרכבה עצמית של חלבון זה בממשקי אוויר-מים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>רכיב מאגר עבור ניסויי הרכבה עצמית</td></tr><tr><td>5 mL round bottom polystyrene tube</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>משמש לניסויי הרכבה עצמית בתפוקה נמוכה</td></tr><tr><td>96-well black polystyrene microplate</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>משמש למדידות פלואורסצנציה בקורא מיקרופלטות</td></tr><tr><td>Acrylamide/Bis-acrylamide (29:1) solution (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>משמש להכנת ג'לים SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>אגר המשמש להכנת צלחות LB עמידות לאמפיצילין</td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>אנטיביוטיקה המשמשת בצלחות LB-אגר</td></tr><tr><td>Baffled 2.8 L Fernbach flasks</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>משמש לגידול תרביות חיידקים בנפח גדול</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>סוכן מחזר המשמש בהכנת דגימות SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Column (1.5 cm diameter gravity column)</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>משמש לטיהור אפיניות ניקל</td></tr><tr><td>Dialysis tubing (3500 kDa MWCO)</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>משמש להחלפת מאגר במהלך טיהור</td></tr><tr><td>Emission filter</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>משמש לניסויי ThT (494 ננומטר, פס 20 ננומטר)</td></tr><tr><td>Excitation filter</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>משמש לניסויי ThT (438 ננומטר, פס 24 ננומטר)</td></tr><tr><td>Fluorescence microplate reader</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>משמש למדידת עוצמת הפלואורסצנציה של ThT</td></tr><tr><td>Hotplate</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>משמש להגדרת אמבט מים עם ניטור טמפרטורה</td></tr><tr><td>Hydrochloric acid (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>משמש להתאמת pH של מאגרים</td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>משמש בטיהור IMAC (מאגרי שטיפה ושחרור)</td></tr><tr><td>Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>מגרה ביטוי חלבון ב-E. coli</td></tr><tr><td>LB broth (Lennox)</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>מדיום גידול לתרבית חיידקים</td></tr><tr><td>Low-speed refrigerated centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>משמש לפלוט תאים לפני אחסון</td></tr><tr><td>Nickel NTA agarose beads</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>שרף המשמש לטיהור אפיניות של חלבונים עם תג His</td></tr><tr><td>SC16 plasmid</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>מבנה DNA מותאם אישית המקודד לחלבון נגזרת H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>SHuffle T7 Express competent E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>זן מארח המשמש לביטוי חלבון רקומביננטי</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>רכיב מאגר ומוסדר כוח יוני</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>משמש להתאמת pH של מאגרים</td></tr><tr><td>Sodium phosphate</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>רכיב מאגר לשמירה על pH</td></tr><tr><td>Spectrophotometer</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>משמש לכימות של SC16</td></tr><tr><td>Thioflavin T (ThT)</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>צבע פלואורסצנטי המשמש למעקב אחר הרכבה עצמית של חלבונים</td></tr><tr><td>Thrombin protease</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>משמש לפיצול חלבון נגזרת H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>מאגר המשמש בפתרונות טיהור ובמבחנים</td></tr><tr><td>High-speed refrigerated centrifuge</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>משמש לבירור לישט לאחר פירוק תאים</td></tr><tr><td>SDS-PAGE setup</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>משמש להכנת והפעלת ג'לים SDS-PAGE</td></tr></tbody></table>

ייצור וטיהור רקומביננטי של הידרופובין sc16 מאשריציה קולי ומעקב אחר ההרכבה העצמית שלו באמצעות בדיקות פלואורסצנציה

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

ייצור וטיהור רקומביננטי של הידרופובין SC16 מאשריציה קולי ומעקב אחר ההרכבה העצמית שלו באמצעות בדיקות פלואורסצנציה

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

בעידן שאחרי האדם הגנומיקה, הזמינות של חלבונים רקומביננטיים של תצורות המקומיים הוא חיוני למחקר מבנית, תפקודית טיפולית ופיתוח. כאן אנו מתארים מבחן רחב היקף של ביטוי חלבונים מערכת עובריים אנושיים לתאי כליה 293T, שניתן להשתמש בהם כדי לייצר מגוון של חלבונים רקומביננטיים.

פלטפורמת ביטוי נוח כללי לייצור חלבונים המופרשים מ תאים אנושיים

פרוטוקול לביטוי כמותית, תפוקה הגבוהה הקרנה וטיהור אנליטי של חלבוני היתוך מתרבויות חיידקי Escherichia בקנה מידה קטנה מתואר ומוחל על הביטוי של מטרות חלבון הארס של בעלי החיים דיסולפיד עשיר.

הקרנת תפוקה גבוהה ביטוי כמותי וטיהור יישומים לחלבוני ארס רקומביננטי דיסולפיד עשירים הופק ב<em&gt; א coli</em

פוליפפטידים דמויי אלסטין הם biopolymers גירוי מגיב עם יישומים החל טיהור חלבון רקומביננטי לאספקת סמים. פרוטוקול זה מתאר את הטיהור ואפיון של פוליפפטידים כמו אלסטין והתכת פפטיד או חלבון שלהם מחיידקי Escherichia באמצעות שלב טמפרטורת פתרון מעבר ההתנהגות הקריטית נמוך יותר שלהם כאלטרנטיבה פשוטה לכרומטוגרפיה.

טיהור ללא chromatographic של פוליפפטידים דמויי אלסטין רקומביננטי וFusions עם פפטידים וחלבונים מן<em&gt; חיידקי Escherichia</em

ביטוי חלבונים רקומביננטיים על ידי מערכות יונקים הופך לשיטה אטרקטיבית לייצור קומפלקסים של חלבונים לביולוגיה מבנית. כאן אנו מציגים מערכת ביטוי פשוטה אך יעילה ביותר המשתמשת בתאי יונקים שגדלו בתרחיף לטיהור קומפלקסים של חלבונים למחקרים מבניים.

ביטוי חלבון רקומביננטי לביולוגיה מבנית בתאי ההשעיה HEK 293F: רומן וגישה נגישה

גישה יעילה לבדיקות סקר לאיתור הביטוי של חלבונים בממברנה רקומביננטי בcoli Escherichia מבוסס על היתוך לחלבון פלואורסצנטי ירוק מוצגת.

הקרנה ירוקה פלורסנט מבוסס חלבון ביטוי של החלבונים ממברנה ב<em&gt; Coli Escherichia</em

אנו מספקים שיטה לסינון בו-זמנית של ספרייה של שברי נוגדנים לזיקה קשירה ומסיסות ציטופלזמית על ידי שימוש במסלול הטרנסלוקציה של Escherichia coli Twin-arginine, שיש לו מנגנון בקרת איכות מובנה לקיפול חלבון תוך תאי, כדי להציג את שברי הנוגדנים על הממברנה הפנימית.

Inner-קרום חיידקי תצוגה להקרנת ספרייה של שברי נוגדן

פרוטוקול זה מפרט את השלבים, ' עלויות ' הציוד הנדרש לייצר e. coli-המבוסס על תמציות תא וליישם במבחנה תגובות סינתזת חלבון תוך 4 ימים או פחות. למנף את אופי גמיש הפלטפורמה עבור יישומים רחב, נדון תנאי ריאקציה, כי ניתן להתאים אופטימיזציה.

Escherichia coli-המבוסס על סינתזת החלבון ללא תא: פרוטוקולים עבור טכנולוגיית פלטפורמה חזקים, גמישים ונגישים

מאמר זה מתאר זרימה מבוססת-סריג cy, מבוסס הפרוטוקול כדי לכמת הרכבה עצמית חלבון בשני S. cerevisiae ס ו HEK293T תאים.

גילוי ואפיון הרכבה עצמית של חלבון בVivo על-ידי הזרמת הקיטומטל

שיטה מפורטת מסופקת כאן ומתארת את הטיהור, הקיפול והאפיון של חלקיקי חלבון בהרכבה עצמית (סאפאנס) לשימוש בפיתוח החיסונים.

ייצור של E. coli-הביע עצמית הרכבה חלקיקי חלבון עבור חיסונים הדורשים Trimeric אפירופה מצגת

בממשק של ממיסים אורגניים ומימית, מותאם המותאם לאלסטין וחלבונים בעלי מבנה מולקולרי מורכבים כגון שלפוחיות, סיבים ומדבקות מופעלות על ידי פרמטרים סביבתיים. פרוטוקולי ההרכבה המתוארים מניבים תאים מבוססי חלבון ממברנה (PMBCs) עם מאפיינים שניתן לסמוך עליהם, המאפשרים כימוס של מטענים שונים.

בימוי האסיפה של אלסטין כמו חלבונים לתוך הגדרת מבנים Supraולקולריים מוגדרים מחוץ לגופית

פרוטוקול זה מתאר את ייצור ריבנוקלאז SLFN14 הרקומביננטי האנושי ואת ניתוחו הסטוכיומטרי באמצעות פוטומטריית מסה.<br...

ייצור מהיר של SLFN14 ריבונוקלאז רקומביננטי וניתוח סטויכיומטרי באמצעות פוטומטריית מסה

למד ייצור וטיהור רקומביננטי של הידרופובין SC16 מ-Schizophyllum commune ב-Escherichia coli תחת תנאים נייטרליים ללא חומרים מחזרים. השתמש בבדיקות פלואורסצנציה עם thioflavin T כדי לעקוב אחר הרכבה עצמית של חלבון זה בממשקי אוויר-מים.

ייצור וטיהור רקומביננטי של הידרופובין SC16 מאשריציה קולי ומעקב אחר ההרכבה העצמית שלו באמצעות בדיקות פלואורסצנציה

גלה סרטונים נוספים