Name: Un approccio completo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Scopri un metodo innovativo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale mediante fibrinolisi e colorazione cellulare. Questa tecnica consente il rilascio di cellule intatte per studi quantitativi e qualitativi.

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Questa ricerca è stata finanziata dall'Ufficio per la scienza e la tecnologia della città di Xiamen (3502Z20227197) e dall'Ufficio per la scienza e la tecnologia della provincia del Fujian (n. 2019J01070, n. 2021Y0027).

La ricerca è stata condotta in conformità con le linee guida istituzionali del Comitato di Etica Medica dell'Università di Huaqiao. I coaguli di sangue cerebrale sono stati rimossi chirurgicamente e raccolti presso il Quanzhou First Hospital, affiliato alla Fujian Medical University, con il consenso informato dei pazienti.
1. Pretrattamento del coagulo di sangue
<ol><li>Disporre i coaguli su un piatto pulito, aggiungere 5 ml di soluzione fisiologica con una pinzetta, agitare delicatamente il piatto e rimuovere la soluzione fisiologica con una pipetta. NOTA: Ripetere il risciacquo tre volte.</li>
	<li>Tagliare i coaguli in pezzi più piccoli (più piccoli di 5 mm x 5 mm x 5 mm) con una forbice. Aggiungere 5 mL di soluzione fisiologica, agitare delicatamente la capsula e rimuovere la soluzione fisiologica con una pipetta. NOTA: Ripetere il risciacquo tre volte. Assicurarsi che non vengano aspirati pezzi di coagulo durante il risciacquo.</li>
	<li>Trasferire i coaguli su un'altra piastra a U pulita. NOTA: Il protocollo può essere messo in pausa qui (conservare la piastra a 2-8 °C) e riavviato in un secondo momento.</li>
</ol>2. Trombolisi
<ol><li>Preparare la soluzione di lavoro sFE regolando la concentrazione di sFE a 2000 U/mL con soluzione fisiologica. NOTA: L'sFE è stato preparato secondo i protocolli consolidati di Tang Lab15.</li>
	<li>Aggiungere 300 μL di soluzione di lavoro sFE nei coaguli pretrattati.</li>
	<li>Eseguire il primo ciclo di degradazione.<ol><li>Incubare la miscela di sFE e coaguli a 37 °C per 0,5 ore. NOTA: Il blot trattato con soluzione fisiologica è stato impostato come controllo negativo. Non ruotare il campione sull'agitatore.</li>
		<li>Mescolare delicatamente il campione. Trasferire la parte liquida in un'altra provetta pulita con una pipetta pulita. NOTA: I coaguli rimanenti sono stati utilizzati per un altro ciclo di degradazione.</li>
		<li>Centrifugare la parte liquida a 200 × g per 5 min a 4 °C.</li>
		<li>Trasferire il surnatante in un'altra provetta pulita con una pipetta per ottenere la soluzione di sFE recuperata.</li>
		<li>Miscelare delicatamente la precipitazione cellulare con 50 μL di soluzione fisiologica. NOTA: La miscela cellulare è stata conservata a 2-8 °C per un uso successivo.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire la successiva degradazione.<ol><li>Degradare i coaguli rimanenti (fase 2.3.2) con la soluzione di sFE recuperata (fase 2.3.4) a 37 °C per 0,5 ore. NOTA: Le fasi di riposo sono state le stesse del primo ciclo di degradazione. Il processo di degradazione è stato completato fino a quando l'intero coagulo non è stato degradato.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire la raccolta delle celle.<ol><li>Preparare il campione di cellule del sangue raccogliendo la miscela cellulare di ogni ciclo di degradazione.</li>
	</ol></li>
</ol>3. La colorazione di Wright
<ol><li>Eseguire lo striscio cellulare.<ol><li>Regolare le celle su una densità di 1 x 106 cellule/mL.</li>
		<li>Aggiungere 5 μL di cellule al vetrino rivestito di poli-L con lisina, quindi spalmarle con il vetrino coprioggetto.</li>
		<li>Evaporare il liquido a temperatura ambiente.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire la colorazione.<ol><li>Aggiungere delicatamente 200 μL di colorante di Wright (vedere la tabella dei materiali) allo striscio cellulare e aggiungere 600 μL di colorante B di Wright per mescolare uniformemente.  Colorare per 10 minuti a temperatura ambiente.</li>
		<li>Risciacquare delicatamente la tintura con acqua pulita. NOTA: Lo striscio di cellule colorate può essere conservato a temperatura ambiente per un uso successivo.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire l'imaging microscopico.<ol><li>Esaminare le cellule colorate con un microscopio ottico (vedere la tabella dei materiali).</li>
	</ol></li>
</ol>4. Esame del sangue di routine
<ol><li>Regolare le celle su una densità di 1 x 106 cellule/mL.</li>
	<li>Analizzare i componenti cellulari come piastrine, eritrociti, globuli bianchi, linfociti, neutrofili, monociti, eosinofili, basofili e granulociti immaturi utilizzando un analizzatore autoematologico secondo le istruzioni del produttore (vedere Tabella dei materiali).</li>
</ol>

Un metodo basato su enzimi fibrinolitici per studiare i componenti delle cellule del trombo cerebrale

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

sFE è un agente fibrinolitico in grado di degradare la fibrina direttamente ed efficacemente12,16. Qui, sFE è stato impiegato per degradare la fibrina reticolata dei coaguli di sangue cerebrale, rilasciare le cellule racchiuse all'interno dei coaguli e analizzare qualitativamente e quantitativamente i componenti cellulari dei coaguli. I dati della microscopia e l'esame del sangue di routine hanno indicato che le cellule racchiuse sono state rilasciate dai coaguli...

La malattia cerebrovascolare è una delle tre principali malattie che possono minacciare la salute umana, tra le quali la malattia cerebrovascolare ischemica rappresenta oltre l'80%. La trombosi cerebrale e la trombosi venosa cerebrale sono oggi le malattie cerebrovascolari ischemiche più preoccupanti, causate principalmente da coaguli di sangue cerebrale 1,2. Se il trattamento non viene eseguito correttamente, avrà alti tassi di disabilità e mortalità e un alto tasso di recidiva dopo la dimissione3.
Recentemente, un numero crescente di studi ha dimostrato che i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale sono strettamente correlati con la diagnosi, il trattamento e la prognosi della trombosi cerebrale 4,5,6. Pertanto, la disponibilità di dati sulla composizione del trombo, in particolare sui componenti cellulari, è importante per la diagnosi clinica e il trattamento. Sfortunatamente, i metodi attualmente disponibili non sono in grado di analizzare in modo completo la componente del coagulo di sangue quantitativamente e qualitativamente. Ad esempio, la colorazione in situ a base di Martius Scarlett Blue può studiare solo i globuli rossi/bianchi di alcune fette del coagulo7. La colorazione in situ basata sull'immunoistochimica (IHC) può studiare solo i componenti limitati del sangue di alcune fette del coagulo utilizzando i loro anticorpi8. I metodi basati su immagini microscopiche riguardano solo la struttura specifica del coagulo9. Inoltre, tutti questi metodi sono laboriosi e richiedono molto tempo10. Ad oggi, le procedure per lo studio quantitativo e qualitativo dei componenti delle cellule trombiformi cerebrali non sono state riportate. È ampiamente riconosciuto che la fibrina reticolata avvolge strettamente le cellule del sangue nei coaguli11. Di conseguenza, la degradazione specifica della fibrina reticolata e il rilascio delle cellule intatte sono fondamentali per l'analisi accurata dei componenti cellulari.
Lavori precedenti hanno isolato un enzima fibrinolitico da Sipunculus nudus (sFE), che può degradare la fibrina in modo specifico e rapido12. In questo caso, è stato proposto un metodo per analizzare i componenti cellulari dei trombi cerebrali basato sull'attività unica di sFE. Questo protocollo ha utilizzato sFE per degradare prima la fibrina dei coaguli e poi ha analizzato i componenti cellulari mediante colorazione di Wright ed esame del sanguedi routine 13,14. Secondo questo metodo, i componenti cellulari dei trombi cerebrali possono essere studiati quantitativamente e qualitativamente. Questo protocollo semplice ed efficace potrebbe essere applicato per l'analisi della componente cellulare di altri coaguli di sangue.

<table><tbody><tr><td>Piastra di reazione di agglutinazione</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>Analizzatore ematologico automatico</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore automatico a vapore a pressione verticale&nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Banco pulito</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore a temperatura costante</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di coltura (100 mm)</td><td>Forno</td><td></td> di riscaldamento ed essiccazione serie NEST 704001 <td></td></tr><tr><td>DHG&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia analitica elettronica</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Membrana filtrante (0,22 &; micro; m)</td><td></td><td>Centrifuga Micro Refrigerata Millex GP</td> SLGP033NK <td></td></tr><tr><td></td><td>Vetrini per microscopio Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td></td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Millipore di riferimento Milli-Q</td><td></td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>soluzione fisiologica CISEN</td><td></td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio ottico</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>Puntale per pipetta (1 mL</td>) <td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Puntale per pipetta (200 &; micro; L)</td><td>Pipettatore Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(1 mL)</td><td>Pipettatore Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>(200 &; micro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>Oscillatore a vortice di piccole dimensioni</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta</td><td>Hystic</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>Wright Soluzione colorante</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

un approccio completo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

La trombosi cerebrale, un coagulo di sangue in un'arteria o vena cerebrale, è il tipo più comune di infarto cerebrale. Lo studio dei componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale è importante per la diagnosi, il trattamento e la prognosi. Tuttavia, gli attuali approcci allo studio dei componenti cellulari dei coaguli si basano principalmente sulla colorazione in situ , che non è adatta per lo studio completo dei componenti cellulari perché le cellule sono strettamente avvolte nei coaguli. Studi precedenti hanno isolato con successo un enzima fibrinolitico (sFE) da Sipunculus nudus, che può degradare direttamente la fibrina reticolata, rilasciando i componenti cellulari. Questo studio ha stabilito un metodo completo basato sull'sFE per studiare i componenti cellulari del trombo cerebrale. Questo protocollo include la dissoluzione del coagulo, il rilascio cellulare, la colorazione cellulare e l'esame del sangue di routine. Secondo questo metodo, i componenti cellulari potrebbero essere studiati quantitativamente e qualitativamente. Vengono mostrati i risultati rappresentativi degli esperimenti che utilizzano questo metodo.

Nella fase iniziale del processo di degradazione, è stato riscontrato che i coaguli di sangue avevano una struttura compatta rossa e la soluzione di lavoro era incolore. Dopo un'incubazione di 30 minuti, la soluzione di lavoro è diventata di colore rosso chiaro, il che indica che le cellule del sangue incrociate sono state rilasciate nella soluzione di lavoro. La maggior parte dei coaguli si è dissolta quando si è allungato il tempo di incubazione a 5 ore e la soluzione di lavoro è diventata rosso chiaro. Al contrario, n...

Questo studio descrive un metodo rapido ed efficace per l'analisi dei componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale attraverso la dissoluzione del coagulo, la colorazione cellulare e l'esame del sangue di routine.

Un approccio completo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

La nostra ricerca si concentra principalmente sulla trombosi cerebrale. Molti studi hanno dimostrato che la componente delle cellule del coagulo di sangue cerebrale è correlata alla diagnosi, al trattamento e alla prognosi della trombosi cerebrale. In questo studio, abbiamo stabilito un nuovo metodo per l'analisi della componente cellulare dei coaguli di sangue cerebrale.Questa sfida nell'analisi dei componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale è il rilascio dell'intero albero dai coaguli di sangue. Questo perché i coaguli hanno perso fibrosi, eruzione cutanea, le cellule del sangue nei coaguli. Gli approcci mirati per avviare i componenti cellulari dei coaguli sono meglio eseguiti in posizione C2, che non è adatta per l'avvio completo dei componenti cellulari.Al contrario, il nostro metodo consente di illuminare sia quantitativamente che qualitativamente le componenti delle cellule di pendenza cerebrale. Il nostro metodo utilizza l'enzima fibrinolitico per ritardare la fibratura nei coaguli di sangue, rilasciando le cellule intatte. I dati ottenuti dall'analisi dei componenti cellulari faciliteranno lo studio dei meccanismi della trombosi cerebrale a livello molecolare.Il nostro team continuerà a concentrarsi sullo studio della fibrinolisi e del sistema di coagulazione.

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Fonte: Kim, D., et. al. Imaging fluorescente nel vicino infrarosso combinato e tomografia microcomputerizzata per la visualizzazione diretta dei tromboemboli cerebrali. J. Vis. Exp. (2016)Questo video dimostra la visualizzazione del trombo cerebrale nei topi utilizzando l'imaging con tomografia micro-computerizzata (micro-CT). Un modello murino di trombo cerebrale viene iniettato con nanoparticelle d'oro mirate alla fibrina che fungono da agente di contrasto. Il mouse viene posizionato sul...

Visualizzazione di un trombo cerebrale in un topo mediante imaging con tomografia microcomputerizzata

Cervello cellule mieloidi caratterizzazione seguente ictus può essere eseguita utilizzando il metodo stereologia frazionatore ottica, o da una analisi citofluorimetrica del cervello leucociti sospensioni. Entrambi sono tecniche utili per effettuare un'accurata distinzione fenotipica delle principali sottopopolazioni di cellule mieloidi trovati nel cervello ischemico.

Stereologica e Citometria a Flusso Caratterizzazione dei leucociti sottopopolazioni in modelli di transitori o permanenti Cerebral Ischemia

L'infiammazione gioca un ruolo centrale nella patogenesi dell'ictus ischemico. Prove crescenti suggeriscono che agisce come un'arma a doppio taglio che esacerba le lesioni cerebrali precoci, ma contribuisce anche alla riparazione successiva. Questo protocollo descrive l'isolamento delle cellule immunitarie dal cervello ischemico e la loro successiva fenotipizzazione citofluorimetrica.

Isolamento e analisi citofluorimetrica delle cellule immunitarie dal cervello ischemica mouse

Questo protocollo descrive l'applicazione della tomografia combinata a fluorescenza nel vicino infrarosso (NIRF) imaging e micro-computerizzata (microCT) per la visualizzazione tromboembolie cerebrale. Questa tecnica consente la quantificazione del carico trombotico ed evoluzione. La tecnica di imaging NIRF visualizza fluorescente trombo nel cervello asportato, mentre la tecnica microCT visualizza trombo all'interno gli animali viventi utilizzando oro-nanoparticelle.

Imaging fluorescente combinata vicino infrarosso e la tomografia micro-computerizzata per Direttamente Visualizzazione cerebrale tromboembolie

L'obiettivo di questo articolo è di presentare un metodo che consente una ricostruzione 3-dimensionale dell'albero cerebrovascolare in topi dopo micro tomografia computata e determinazione dei volumi di segmenti vascolari intero che possono essere utilizzati per quantificare il vasospasm cerebrale in modelli murini di emorragia subaracnoidea.

Un metodo volumetrico per la quantificazione di Vasospasm cerebrale in un modello murino di emorragia subaracnoidea

Presentiamo un modello di malattia vascolare in vitro per studiare le interazioni del sangue intero con l'endotelio derivato dal paziente. Questo sistema permette lo studio delle proprietà trombogeniche delle cellule endoteliali primarie in varie circostanze. Il metodo è particolarmente adatto per valutare in situ trombogenicità e terapia anticoagulante durante diverse fasi della coagulazione.

Modello di malattia microfluidico in vitro per studiare le interazioni sangue-endoteliali intere e le dinamiche del coagulo di sangue in tempo reale

Questo protocollo descrive una nuova tecnica di misurazione dei tre parametri più importanti della lesione cerebrale ischemica sullo stesso set di campioni cerebrali di roditori. L'uso di un solo campione cerebrale è altamente vantaggioso in termini di costi etici ed economici.

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La fibrina è responsabile della formazione di coaguli durante l'emostasi e la trombosi. I saggi di turbidità e il tromboelastograhy (TEG) possono essere utilizzati come strumenti sinergici che forniscono una valutazione complementare di un coagulo. Queste due tecniche insieme possono dare maggiori informazioni su come le condizioni di coagulazione influenzano la formazione di coaguli di fibrina.

Sfruttare la turbidità e la tromboelastografia per la caratterizzazione complementare dei coaguli

I modelli tradizionali di ictus fototrombotico (PTS) inducono principalmente aggregati piastrinici densi con un'elevata resistenza al trattamento litico con attivatore tissutale del plasminogeno (tPA). Qui viene introdotto un modello PTS murino modificato co-iniettando trombina e colorante fotosensibile per la fotoattivazione. Il modello PTS potenziato con trombina produce coaguli misti piastrina:fibrina ed è altamente sensibile alla trombolisi tPA.

Un modello di ictus fototrombotico arricchito di fibrina e sensibile al tPA

Questo lavoro descrive un saggio microfluidico che utilizza lo stress di taglio per innescare la formazione di trombo nel sangue e caratterizza il trombo tramite molteplici dimensioni di lettura. Il test può misurare la tendenza protrombotica dei campioni di sangue ed è quindi utile nella diagnosi di malattie, nella scoperta di farmaci e in studi meccanicistici di base relativi alla trombosi.

Saggio di profilazione trombonica: una piattaforma basata sulla microfluidica per caratterizzare in modo completo la trombogenesi biomeccanica

Scopri un metodo innovativo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale mediante fibrinolisi e colorazione cellulare. Questa tecnica consente il rilascio di cellule intatte per studi quantitativi e qualitativi.

Un approccio completo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale

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